Расчет наиболее вероятного числа бактерий (нвч) в 100 мл питьевой воды централизованного хозяйственно-питьевого водоснабжения

Число положительных результатов из 3-х объемов			НВЧ бактерий в 100 мл	Довери-тельный интервал (95%)		Число положительных результатов из 3-х объемов			НВЧ бактерий в 100 мл	Довери-тельный интервал (95%)
по 100 мл	по 10 мл	по 1 мл		ниж-ний	верх-ний	по 100 мл	по 10 мл	по 1 мл		ниж-ний	верх-ний
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 2	0 0 0 1 1 1 1 2 2 2 2 3 3 3 3 0 0 0 0 1 1 1 1 2 2 2 2 3 3 3 3 0	1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0	0,3 * * 0,3 * * * 0,6 * * * * * * * 0,4 0,7 * * 0,7 1,1 * * 1,1 * * * * * * * 0,9	0 0,1 0,2 0,1 1,1 1,2 0.3 0,1 0,2 0,3 0,3 0,2 0,3 0,3 0,4 0,1 0,2 0,2 0,3 0,2 0,2 0,3 0,4 0,2 0,3 0,4 0,5 0,3 0,4 0,5 0,6 0,2	1,4 2,8 4,2 1,4 2,8 4,3 5,7 2,8 4,3 5,8 7,3 4,4 5,9 7,4 8,9 1,7 3,4 5,0 6,9 3,4 5,2 7,1 8,9 5,3 7,1 9,0 11,1 7,3 9,3 11,3 13,4 4,3	2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3	0 0 0 1 1 1 1 2 2 2 2 3 3 3 3 0 0 0 0 1 1 1 1 2 2 2 2 3 3 3 3	1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3	1,4 * * 1,5 2 * * 2 3 * * 3 * * * 2 4 6 * 4 8 12 * 9 15 21 29 24 46 110 ≥ 240	0,3 0,4 0,6 0,3 0,4 0,6 0,7 0,5 0,6 0,7 0,9 0,6 0,8 0,9 1,1 0,5 0,8 1,4 2,0 0,9 1,6 2,5 3,4 2,0 3,2 4,6 6,2 5,1 9,3 23,5 -	6,7 9,3 12,1 6,9 9,6 12,5 15,7 9,9 12,9 16,3 19,8 13,3 16,8 20,6 24,6 10,8 18,0 29,7 44,6 20,0 35,0 53,8 74,2 43,6 69,8 100,3 136,4 112,1 216,0 516,0 -

Примечание: * - вероятность ниже допустимого уровня, количественный учет невозможен.

Таблица 6

Расчет наиболее вероятного числа бактерий (нвч) в 100 мл воды водоемов

Число положительных результатов из 3-х объемов			НВЧ бактерий в 100 мл	Число положительных результатов из 3-х объемов			НВЧ бактерий в 100 мл
по 1 мл	по 0,1 мл	по 0,01 мл		по 1 мл	по 0,1 мл	по 0,01 мл
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1	0 0 0 0 1 1 1 1 2 2 2 2 3 3 3 3 0 0 0 0 1 1 1 1 2 2 2 2 3 3 3 3	0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3	менее 30 30 60* 90* 30 61* 92* 120* 62* 93* 120* 160 94* 130* 160* 190* 36 72 110* 150* 73 110 150* 190* 110 150* 200* 240* 160* 200* 240* 290*	2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3	0 0 0 0 1 1 1 1 2 2 2 2 3 3 3 3 0 0 0 0 1 1 1 1 2 2 2 2 3 3 3 3	0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3	91 140 200* 260* 150 200 270* 340* 210 280 350* 420* 290 360* 440* 530* 230 390 640 950* 430 750 1200 1600* 930 1500 2100 2900 2400 4600 11000 более 11000

Примечание: * - вероятность ниже допустимого уровня.

3. Определение спор сульфитредуцирующих клостридий в воде методом мембранных фильтров (Составить схему. Оформить протокол)

Сульфитредуцирующие клостридии – спорообразующие палочки, анаэробы, редуцирующие сульфит натрия на железосульфитном агаре, с образованием черных колоний, при температуре 44°С в течение 16–18 часов.

1 день

Пробы воды по 20 мл, предварительно прогретые на водяной бане при температуре 75°С в течение 15 минут (для удаления вегетативной флоры), фильтруют.

Железосульфитный агар, перед нанесением фильтров, расплавляют на водяной бане и поддерживают его нагретым в пределах 70–80°С.

1. Фильтры помещают в пробирки с горячим железосульфитным агаром – сворачивают пинцетом в трубочку, таким образом, чтобы сторона фильтра с осевшими бактериями была обращена внутрь, а затем разворачивают по стенке пробирки. Пробирки быстро охлаждают холодной водой и культивируют при 44°С в течение 16-18 часов.

2. Фильтры помещают на чашки Петри с железосульфитным агаром, залитым тонким слоем, поверхностью с осевшими микроорганизмами. Заливают расплавленный железосульфитный агар до верхнего края чашки и инкубируют при 44°С в течение 16–18 часов.

2 день

Подсчитывают количество черных колоний на фильтрах и в толще среды и выражают результат в КОЕ спор сульфитредуцирующих клостридий в 20 мл.

4. Определение колифагов в воде. Составить схему. Оформить протокол

Колифаги – бактериофаги способные образовывать зоны лизиса газонной культуры E.coli (тест-культуры К 12 Str^R) на питательном агаре через 18–20 часов инкубирования при 37°С.

Титрационный метод

1 день

В исследуемые пробы воды, объемом по 100 мл, добавляют по 10 мл питательного бульона с 1% раствором пептона (10-кратного концентрированного) и 1 мл смыва тест-культуры кишечной палочки или 2 мл 4-х часовой бульонной культуры. Инкубируют в течение 18–20 часов при 37°С.

2 день

Забирают 10 мл из полученного материала и добавляют к ним 1 мл хлороформа (для освобождения от бактерий), энергично встряхивают и оставляют до полного осаждения хлороформа при комнатной температуре. В чашку Петри пипеткой вносят 1 мл воды, обработанной хлороформом (не касаясь осадка хлороформа), и заливают предварительно приготовленной смесью (100 мл агара на 1 мл смыва микроорганизма) питательного агара (сначала расплавленного, потом остуженного до 45°С) и E.coli объемом 12–15 мл. Инкубируют 18–20 часов при 37°С.

3 день

Результат определяют по наличию полного лизиса, появления нескольких или одной бляшки на чашке и при отсутствии зон лизиса на контрольной чашке. Результат выражают в бляшкообразующих единицах (БОЕ). Коли-фаги не должны обнаруживаться в 100 мл воды.