Результаты титрования фага по методу Грациа

Разведение	Число пятен на чашке	Титр фага
10-9	3	3·109
10-8	38	38·108
10-7	сливной рост	Не учитывается

2. Изучить схему трансдукции у бактерий (зарисовать)

3. Изучить схему конъюгации у бактерий (зарисовать)

5. Подведение итогов занятия – 5 минут

ЗАНЯТИЕ 14

ТЕМА. Симбиоз и антагонизм. Про- и пребиотики. Антибиотики. Фитонциды

Цель занятия. Ознакомить студентов с биологическим действием антибиотиков, отметить важность выбора антибиотика для лечения, научить оценивать выбор препарата в зависимости от спектра чувствительности микроба к антибиотикам

Методические указания к практической работе

Продолжительность занятия: 3 академических часа (135 минут)

Место проведения занятия: учебная аудитория

Материально-техническое оснащение – таблицы, стенды, микроскопы, микропрепараты, вакцины

Хронометраж практического занятия:

1. Вводное слово преподавателя – 5 мин

2. Проверка исходного уровня знаний (тест-контроль) – 15 мин

3. Разбор теоретических вопросов по теме – 80 мин

1. Симбиоз (определение)

2. Формы взаимоотношений между различными группами микроорганизмов

3. Антагонизм (определение)

4. Антибиотики (определение)

5. Открытие антибиотиков

6. Антибиотики по происхождению

7. Антибиотики по механизму действия

8. Фитонциды (определение)

9. Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам

10. Пробиотики (понятие, виды, применение)

11. Пребиотики (понятие, виды, применение)

1. Изучение микробного антагонизма по схеме (зарисовать)

Суточную бульонную культуру тест-микроба (стафилококк, сарцина) засевают на МПА газоном. На этот же посев наносят в виде бляшек (макроколонии) культуру микроба-антагониста (сенная палочка). Посевы инкубируют в термостате 18–20 часов после чего учитывают результат и делают вывод об антагонистической активности испытуемой культуры.

2. Ознакомиться с диско-диффузионным методом (ДДМ) определения чувствительности бактерий (стафилококк и кишечная палочка) к антибиотикам (зарисовать схему). Оформить протокол

На поверхность питательного агара засевают газоном испытуемую культуру (стафилококк, кишечная палочка). Чашки приоткрывают и подсушивают при комнатной температуре 10–15 минут. Затем накладывают диски пинцетом на расстоянии 2 см друг от друга и от краев чашки. Чашки помещают в термостат для инкубации на 18–20 часов, перевернутыми кверху дном, после чего учитывают результат. Чашки помещают кверху дном на темную матовую поверхность, учет проводят в отраженном свете. С помощью линейки и измерителя определяют диаметр зон задержки роста вокруг дисков, включая диаметр дисков. Оценку результатов проводят по таблицам, которые содержат пограничные значения диаметров зон задержки роста для устойчивых, умеренно устойчивых и чувствительных микроорганизмов (табл. 9).

Таблица 9

Интерпретация значений диаметров зон задержки роста при определении чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам (Среда агв)

Противомикробные препараты в диске	Диаметр зон для культур (в мм)
	устойчивых	промежуточных	чувствительных
1	2	3	4
Бензилпенициллин для стафилококков	≤20	21-28	≥29
Бензилпенициллин для др. бактерий	≤10	11-16	≥17
Ампициллин для стафилококков	≤20	21-28	≥29
Ампициллин для грамотрицательных бактерий	≤9	10-13	≥14
Карбенициллин 25 мг	≤14	15-18	≥19
Карбенициллин 100 мг (для P.aeruginosa)	≤11	12-14	≥15
Оксациллин 10 мкг	≤15	16-19	≥20
Оксациллин 1 мкг*	≤10	11-12	≥13
Азлоциллин (для P.aeruginosa)	≤13	14-16	≥16
Цефалотин	≤14	15-18	≥19
Цефазолин	≤14	15-18	≥19
Цефуроксим	≤14	15-18	≥19
Цефокситин	≤14	15-18	≥19
Цефотаксим	≤14	15-20	≥21
Цефтриаксон	≤14	15-20	≥21
Цефоперазон	≤14	15-18	≥19
Цефтазидим	≤14	15-17	≥18
Цефалексин	≤14	15-18	≥19
Цефаклор	≤14	15-18	≥19
Цефиксим	≤15	16-19	≥20
Цефтибутен	≤17	18-20	≥21
Цефтизоксим	≤14	15-19	≥20
1	2	3	4
Ванкомицин для энтерококков	≤14	15-16	≥17
Ванкомицин для стафилококков*	11	-	12
Фузидин	≤16	17-20	≥21
Линкомицин	≤19	20-23	≥24
Клиндамицин	≤14	15-20	≥21
Олеандомицин	≤12	13-17	≥18
Эритромицин	≤17	18-21	≥22
Азитромицин	≤13	14-17	≥18
Тетрациклин	≤16	17-21	≥22
Доксициклин	≤15	16-19	≥20
Левомицетин	≤15	16-18	≥19
Рифампицин	≤12	13-15	≥16
Полимиксин	≤11	12-14	≥15
Стрептомицин	≤16	17-19	≥20
Канамицин	≤14	15-18	≥19
Неомицин	≤12	13-16	≥17
Гентамицин	≤15	-	≥16
Тобрамицин	≤14	-	≥15
Сизомицин	≤15	-	≥16
Амикацин	≤14	15-16	≥17
Фурадонин	≤15	16-18	≥19
Фурагин	≤15	16-18	≥19
Ципрофлоксацин	≤15	16-20	≥21
Азтреонам	≤15	16-21	≥22
Пиперациллин (для P.aeruginosa)	≤17	-	≥18
Офлоксацин	≤12	13-16	≥17
Рокситромицин*	≤13	15-18	≥19
Кларитромицин*	≤13	14-17	≥18
Цефомандол*	≤14	15-17	≥18
Цефепим*	≤14	15-17	≥18
Имипенем*	≤13	14-15	≥16
Меропенем*	≤13	14-15	≥16
Налидиксовая кислота*	≤12	13-17	≥18
Фуразолидон	≤14	15-17	≥18
Норфлоксацин	≤12	13-16	≥17
Пефлоксацин	≤18	19-21	≥22
Ломефлоксацин	≤18	19-21	≥22
Спарфлоксацин для стафилококков	≤15	16-18	≥19
Спарфлоксацин для S.pneumoniae	≤15	16-18	≥19
Левофлоксацин	≤13	14-16	≥17
Линезолид для стафилококков	≤21	-	≥21

Примечание: * - данные для среды Мюллера-Хинтон с добавлением 5% крови, для среды АГВ требуют уточнения.

Для контроля точности, качества питательных сред, дисков проводят исследование чувствительности к антибиотикам эталонных штаммов:

Staphylococcus aureus АТСС 25923

Escherichia coli АТСС 25922

Pseudomonas aeruginosa АТСС 27853

Таблица 10