- •Кафедра микробиологии, вирусологии и иммунологии
- •Часть 1
- •Методические указания к самостоятельной работе
- •1. Вопросы по теме занятия 1 для самостоятельного изучения их студентами:
- •Справочные и теоретические материалы
- •Классификация живых организмов
- •Таксономия прокариотов
- •Основные различия клеток прокариотов (эубактерий) и эукариотов (а.И. Коротяев, с.А. Бабичев, 1998)
- •Микроскопическое изучение микроорганизмов
- •Методические указания к самостоятельной работе
- •1. Вопросы по теме занятия 2 для самостоятельного изучения их студентами:
- •Справочные и теоретические материалы
- •Отличительные признаки грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов
- •Методические указания к самостоятельной работе
- •1. Вопросы по теме занятия 3 для самостоятельного изучения их студентами:
- •Справочные и теоретические материалы
- •Методические указания к самостоятельной работе
- •Справочные и теоретические материалы
- •Методические указания к самостоятельной работе
- •1. Вопросы по теме занятия 5 для самостоятельного изучения их студентами:
- •Справочные и теоретические материалы
- •Морфолого-биологические свойства риккетсий
- •Классификация вирусов позвоночных
- •Химический состав вирусов
- •Свойства вирусов
- •Методы обнаружения вирусов
- •Включения
- •Методы культивирования вирусов
- •Типы культуры ткани
- •Методические указания к самостоятельной работе
- •Справочные и теоретические материалы
- •Морфологические признаки плесневых грибов
- •Классификация питательных сред
- •Методические указания в самостоятельной работе
- •1. Вопросы по теме занятия 7 для самостоятельного изучения их студентами:
- •Справочные и теоретические материалы
- •Методы выделения чистых культур аэробных бактерий
- •Методические указания к самостоятельной работе
- •1. Вопросы по теме занятия 8 для самостоятельного изучения их студентами:
- •Справочные и теоретические материалы
- •Ферменты бактерий
- •Характеристика колоний энтеробактерий на некоторых дифференциально-диагностических средах
- •Методические указания к самостоятельной работе
- •Справочные и теоретические материалы
- •Методические указания к самостоятельной работе
- •1. Вопросы по теме занятия 10 для самостоятельного изучения их студентами:
- •Справочные и теоретические материалы
- •1 Группа (индикаторы фекального загрязнения)
- •Гидросфера. Распространение бактерий в воде
- •Требования к микробиологической чистоте воды
- •Атмосфера. Распространение бактерий в воздухе
- •Допустимые уровни микробной обсемененности воздуха помещений некоторых отделений стационара
- •Методические указания к самостоятельной работе
- •1. Вопросы по теме занятия 11 для самостоятельного изучения их студентами:
- •Справочные и теоретические материалы
- •Показатели температуры плавления порошков-индикаторов
- •Методические указания к самостоятельной работе
- •1. Вопросы по теме занятия 12 для самостоятельного изучения их студентами:
- •Справочные и теоретические материалы
- •Генетические рекомбинации у бактерий
- •Классификация фагов по морфологии
- •Результаты титрования фага по методу Грациа
- •Методические указания к самостоятельной работе
- •1. Вопросы по теме занятия 13 для самостоятельного изучения их студентами:
- •Справочные и теоретические материалы
- •Генетические рекомбинации у бактерий
- •Плазмиды бактерий
- •1. Вопросы по теме занятия 14 для самостоятельного изучения их студентами:
- •Справочные и теоретические материалы Классификация антибиотиков
- •Методические указания к самостоятельной работе
- •1. Вопросы по теме занятия 15 для самостоятельного изучения их студентами:
- •2. Дома студенту необходимо письменно ответить на следующие вопросы (домашняя работа сдается преподавателю на занятии):
- •Справочные и теоретические материалы
- •Характеристика механизмов патогенности и вирулентности бактерий
- •Формы инфекционного процесса Инфекционное заболевание
- •Токсины бактерий
- •Методические указания к самостоятельной работе
- •Справочные и теоретические материалы
- •Бактериологическое исследование
- •Отбор и доставка материала на исследование
- •Порядок исследования
- •Идентификация культур холерных вибрионов
- •Отношение патогенных вибрионов к дифференцирующим углеводам
- •Признаки, дифференцирующие биовары V. Cholerae о1
- •6. Методы изучения свойств холерных вибрионов Серологические методы
- •Серологическая диагностика холеры
- •1. Вопросы по теме «Yersinia pestis, Yersinia enterocolitica, Yersinia pseudotuberculosis» для самостоятельного изучения их студентами:
- •Справочные и теоретические материалы
- •Методические указания к самостоятельной работе
- •1. Вопросы по теме «Возбудитель туляремии» для самостоятельного изучения их студентами:
- •Справочные и теоретические материалы
- •1. Вопросы по теме «Возбудитель бруцеллеза» для самостоятельного изучения их студентами:
- •Справочные и теоретические материалы
- •1. Вопросы по теме «Возбудитель сибирской язвы» для самостоятельного изучения их студентами:
- •Справочные и теоретические материалы
Химический состав вирусов
Нуклеиновая кислота |
ДНК или РНК | |
Белки |
Структурные
Неструктурные |
1) Капсидные 2) Суперкапсидные 1) Предшественники вирусных белков 2) РНК- или ДНК-полимеразы 3) Белки-регуляторы 4) Протеиназы 5) Протеинкиназы |
Липиды |
Фосфолипиды Холестерин | |
Углеводы |
Гликопротеиды |
Таблица 11
Свойства вирусов
Свойства вирусов |
Неклеточная организация Содержание только одной нуклеиновой кислоты (или РНК или ДНК) Отсутствие собственных белоксинтезирующих систем Генетический паразитизм Дизъюнктивная репродукция | |
Форма существования |
Внутриклеточная – нуклеиновая кислота Внеклеточная – вирион | |
Форма вириона |
Шаровидная Палочковидная Кубоидальная Пулевидная Головастиковидная | |
Тип симметрии |
Спиральный Кубический Смешанный | |
Структурные элементы |
Простоорганизованные вирусы Сложноорганизованные вирусы |
1) Капсид 2) Нуклеиновая кислота 1) Суперкапсид 2) Капсид 3) Нуклеиновая кислота |
Таблица 12
Методы обнаружения вирусов
Микроскопические |
Микроскопия материала |
Тельца Пашена |
Обнаружение телец-включений |
Гварниери Бабеша-Негри | |
Иммунофлюоресценция |
Прямая Непрямая | |
Вирусологические |
В культуре ткани |
Клеточная дегенерация:
дегенерация
Подавление метаболизма:
Метод иммунофлюоресценции:
Реакция гемадсорбции |
На восприимчивых организмах |
| |
В курином эмбрионе |
Фокусные поражения оболочек Реакция гемагглютинации:
|
Ядро
Ядро
В
цитоплазме при:
бешенстве
гриппе
трахоме
В
ядре при:
аденовирусных
инфекциях
кори
герпесе
Включения
Рис. 2. Внутриклеточные включения при вирусных заболеваниях
Метод культивирования вирусов в клетках культуры ткани является самым распространенным. Благодаря ему стало возможным изучение синтеза отдельных компонентов вируса, влияния репродукции вируса на метаболические процессы самой клетки.
Источником получения клеток служат ткани и органы эмбрионов, забитых птиц и животных, а также ткани, извлеченные у человека при хирургических операциях. Используются нормальные и злокачественно перерожденные клетки: эпителиальные, фибробластические и смешанные. Способность извлеченных из организма клеток размножению вне организма тесно связана со степенью дифференциации ткани. Чем меньше ткань дифференцирована, тем большей способностью к пролиферации обладают ее клетки. Поэтому клетки опухолевых и эмбриональных тканей легче культивируются вне организма, чем нормальные клетки взрослого организма.
Для роста и размножения клеток вне организма необходимо определенное содержание органических соединений, аминокислот, белков, витаминов, кислорода, углекислоты. Оптимальный рост и развитие клеток обеспечивается при рН 7,2–7,4.
Для приготовления и выращивания культур клеток употребляются:
1) Растворы: Хенкса – содержит хлористые соли натрия, калия, кальция, магния; Берсена – содержит натриевую соль этилендиаминотетрауксусной кислоты, применяется для снятия клеток с поверхности стекла.
2) Питательные среды: а) синтетические или полусинтетические
- поддерживающие клетки в жизнеспособном состоянии – среда 199, среда Игла
- обеспечивающие рост и размножение клеток – среда 199 с добавлением гидролизата лактальбумина
Приготовление первичной культуры клеток складывается из нескольких последовательных этапов. Для получения первично трипсинизированной культуры ткани используют эмбрионы человека (10–12 недельные), кур, почки обезьян, кроликов и др. Ткань измельчают ножницами в среде 199, многократно промывают раствором Хенкса, после чего заливают 0,25% раствором трипсина для разъединения клеток. Полученную однородную суспензию изолированных клеток дважды отмывают от трипсина раствором Хенкса, центрифугируют, осадок разводят средой 199 так, чтобы получить взвесь, содержащую в 1 мл 10000–40000 клеток. К взвеси клеток добавляют пенициллин и стрептомицин по 100 ед/мл, разливают по пробиркам и помещают в термостат на 4-5 дней.
Цитопатогенное действие вируса. Вирус, внесенный в тканевые культуры, проникает в клетки и репродуцирует. Клетки при этом повреждаются, это сопровождается морфологическими изменениями, часть клеток погибает. Изменения в ткани, вызванные вирусами, называют цитопатогенным действием вируса. Вирусы вызывают цитопатогенное действие трех типов:
образование симпластов
круглоклеточную дегенерацию
очаги клеточной пролиферации
Некоторые вирусы можно обнаружить в пораженных клетках по наличию включений в ядре или цитоплазме. Включения представляют собой скопления вирионов или реакцию клетки на присутствие в ней вирусов.
Титрование вируса в культуре производят методом подсчета бляшек. Вирус размножается в зараженных клетках, они дегенерируют и не воспринимают прижизненную окраску нейтральным красным. Причем размножению одной вирусной частицы соответствует одна бляшка. На розовом фоне видны неокрашенные бляшки диаметром 1–3 мм.
Реакция гемадсорбции. Некоторые вирусы не вызывают изменений культуры клеток и не дают отчетливый цитопатогенный эффект. В этом случае присутствие вирусов можно обнаружить в реакции гемадсорбции. Сущность реакции заключается в том, что на поверхности клеток, зараженных вирусом, адсорбируются эритроциты. Скопление эритроцитов на клеточном слое можно наблюдать под микроскопом.
Схема 7