- •Глава 1 Дыхание бактерий
- •Глава 2 Принципы и методы выделения чистых культур бактерий
- •2.1 Бактериологическое исследование
- •Посев петлей
- •Посев шпателем
- •Метод разведений Метод поверхностных штрихов. Методы выделения чистых культур, основанные на механическом принципе
- •Колонии по методу Дригальского
- •Метод штрихов
- •Методы выделения чистых культур, основанные на биологическом принципе
- •Этапы выделения чистых культур микроорганизмов
- •Выделение чистой культуры анаэробных бактерий
- •Выделение и идентификация анаэробных микроорганизмов
- •Среды для культивирования анаэробных микроорганизмов
- •Идентификация микроорганизмов с помощью бактериофагов
- •Литическое действие бактериофагов (справа – позитивный результат)
- •Фаготипирование бактерий
- •Определение бактериоциногенности микроорганизмов
- •Бактериоцинотипирование (зоны задержки роста)
- •Молекулярно генетические методы
- •Реакция гибридизации
- •Итог: Основные виды идентификации чистых культур
- •Характеристика колоній
- •Ориентировочная реакция агглютинации на стекле. В центре позитивный результат.
- •Важнейшие группы химиотерапевтических средств и механизмы их антимикробного действия
- •Колонии Streptomycetes, которые продуцируют стрептомицин
- •Механизм действия антибиотиков
- •Важнейшие группы антибиотиков и механизмы их противомикробного действия Антибиотики, подавляющие синтез бактериальной клеточной стенки
- •Полусинтетические пенициллины
- •Варианты цефалоспоринов
- •Антибиотики, нарушающие функции цитоплазматической мембраны (цпм) микроорганизмов
- •Антибиотики, ингибирующие синтез белка на рибосомах бактериальных клеток
- •Аминогликозидные антибиотики
- •Группа тетрациклинов
- •Левомицетин
- •Линкомицин
- •Макролиды
- •Антибиотики, ингибирующие рнк-полимеразу
- •К препаратам, которые используются во врачебной практике, ставятся определенные требования:
- •Резистентность микрорганизмов к антибиотикам
- •Плазмиды резистентности
- •Комбинированное действие антибиотиков
- •Определение чувствительности бактерий к антибиотикам
- •Основные наборы дисков, которые рекомендуются для определения чувствительности в зависимости от вида выделенной культуры и патологического материала
- •Предельные значения диаметров зон задержки роста и значения мпк антибиотиков для интерпретации результатов
- •Основные принципы рациональной антибиотикотерапии
- •V. Установление длительности курау антибиотикотерапии.
Фаготипирование бактерий
Учитывая, что чувствительность бактерий к фагу является достаточно постоянным признаком, сравнивают фаготипы исследуемых культур из фаготипоммикроба, который был выделен от достоверного источника инфекции. При их совпадении делают вывод об обнаруженном источнике инфекции.
Определение бактериоциногенности микроорганизмов
Бактериоцини является веществами антибиотической природы, которые продуцируются разными бактериями. Они имеют достаточно узкий спектр противомикробного действия, направленный против филогенетично близких возбудителей. Этот тест используют с эпидемиологической целью для выявления источника инфекции, а также для идентификации определенных групп бактерий.
Бактериоцинотипирование (зоны задержки роста)
Для определения бактериоциноваров на поверхность агара в чашке Петри в виде полоски по диаметру засевают бактериологической петлей культуру возбудителя. Чашку инкубируют в термостате при оптимальной температуре в течение 24-48 год, потом микроорганизмы убивают с помощью УФВ или паровхлороформа. Культуру осторожно снимают из поверхности агара с помощью шлифовального стекла, и донеи перпендикулярно штрихами бактериологической петлей подсевают 4-часовые бульйонни культуры индикаторных штаммов. После 18-24-часовой инкубации при оптимальной температуре оценивают чувствительность индикаторных штаммов к бактериоцинив за величиной зон задержки роста. Такой подход позволяет определить бактериоценотип исследуемых микроорганизмов.
Для определения чувствительности исследуемого штамма к определенным бактериоцинив в плотную питательную среду уколом засевают индикаторные бактерии, которые продуцируют определенные типы бактериоцинив. После инкубации в термостате микробы, которые выросли, инактивують за помощью паривхлороформа или ультрафиолетового облучения. Потом на поверхность чашки заливают растопленный и охлажденный к 45°С МПА, смешанный из 0,2 мл 4‑ часовой бульйоннои культуры исследуемого штамма. После того, как агар застигнет, чашку опять помещают в термостат и инкубируют при оптимальной температуре на протяжении суток. За диаметрами зон задержки роста культуры оценивают чувствительность ее к бактериоцинив.
Молекулярно генетические методы
Для выявления и идентификации бактерий, вирусов, грибов и самых простых в последнее время начали широко использовать молекулярно генетические методы.
Реакция гибридизации ДНК и РНК (реакция генных зондов). Последовательность нуклеотидив ДНК и РНК является уникальной для геномов всех микроорганизмов. Любой участок нуклеиновой кислоты можно определить с помощью комплементарной копии ДНК или РНК, меченой ферментом или радиоактивной меткой (ДНК- и РНК-зонды). Такие зонды получены для большинства патогенных бактерий и вирусов. За их помощью проводят идентификацию ДНК или РНК возбудителей бактериальных и вирусных инфекций в клиническом материале. Реакция молекулярной
гибридизации является очень
чувствительной и высокоспецифической. Она дает возможность обнаруживать ДНК или РНК в очень малых количествах (1-10 пг).
Методика реакции генных зондов сводится к тому, что выделенные из патологического материала ДНК или РНК возбудителей денатурируют и наносят на специальные мембраны из нитроцеллюлозы.