Среды для культивирования анаэробных микроорганизмов

Среду Китта-Тароцци готовят на основе бульйона Хоттингера, к которому добавляют кусочки бычьей печенки или мяса. Стерилизуют его при 1 атмосфере в течение 30  мин. Активная реакция среды – 7,4-7,6. После посева материала среду заливают сверху слоем вазелинового масла толщиной до 1 см.

Анаэробный кровяной агар готовят на основе еритрит-агара. В его состав входят также специальные добавки: среда 199 (10 %), гемин (10 мкг/мл), твин-80 (0,1 %), метадион (10 мкг/мл), цитратна кровь (до 5 %) и тому подобное. После стерилизации его разливают в чашки Петри. Используют не позже, как через 2 год после изготовления.

Желтковый агар. В растопленную и охлажденную до 56-60 °С среду на основе еритрит-агара добавляют суспензию куриного желтка (20 %), глюкозу (0,2 %),гемин (10 мкг/мл) и разливают в чашки Петри. Среду используют для определения лецитиназнои активности возбудителей, в частности C. perfringens. При наличиилецитиназы вокруг колоний образуются зоны помутнения.

Коммерческая среда для контроля стерильности. Его можно использовать в качестве транспортное. Для улучшения роста анаэробных бактерий к его составу можно вводить специальные добавки, такие как среда 199, гемин, твин-80, метадион, цитратна кровь и тому подобное.

Среда Вильсон-блера. Его готовят на основе растопленного и охлажденного до 60 °С 1 % сахарного (глюкоза) МПА рН 7,4 с добавлением на 100 мл 10 млстерильного 20 % раствору сульфита натрия и 1 мл 8 % раствору хлорида железа. Готовую среду не стерилизуют.

Его используют для ускоренной диагностики газовой анаэробной инфекции, вызванной Clostridium рerfringens. Уже через 1-2 год наблюдают изменение среды: оно чернеет в результате возобновления сульфита натрия в сульфат, который взаимодействует с хлоридом железа, образовывая сульфид железа. Появляются также разрывы агара в результате интенсивного газообразования.

Лакмусовое молоко. Готовят среду из свежего молока. Предварительно его кипятят и оставляют в прохладном месте на одни сутки. Снимают верхний слой жира и процедуру повторяют. Молоко фильтруют, и 10 % раствором бикарбоната натрия доводят рН до 7,2. Перед стерилизацией к молоку добавляют 5-10 % лакмусовой настойки и идентичное количество 10 % раствору бикарбоната натрия, чтобы пена молока приобрела сине-фиолетовый оттенок. При пидлужуванни молока оно становится сине-фиолетовым, при пидкислюванни – розовым вплоть до красного.

 

 

 

Идентификация микроорганизмов с помощью бактериофагов

Бактериофаги имеют выраженное литическое действие на микроорганизмы. Эту особенность используют для определения их вида. С этой целью в две пробирки с мясо-пептонним бульйоном засевают исследуемую культуру бактерий. Потом в одну из них добавляют несколько капель индикаторного фага. Пробирки инкубируют при оптимальной температуре в течение 18-24 год. Сравнивают мутность бульйона в контрольной и опытной пробирке и делают вывод о чувствительности микроорганизмов к литическому действию бактериофагов.

Литическое действие бактериофагов (справа – позитивный результат)

 

Можно с этой целью использовать плотную питательную среду, на которую газоном засевают исследуемую культуру бактерий. После подсушивания чашек на них бактериологической петлей или пастеровской пипеткой наносят каплю соответствующего разведения бактериофагу, которое указано на ампуле. Посевы инкубируют в термостате при 37 °С в течение 18-24 год и фиксируют наличие прозрачных круглых пятен, которые свидетельствуют о литическом действии бактериофагу. Позитивный результат свидетельствует о принадлежности бактерий к определенному виду.

Фаготипмрование микроорганизмов проводят с целью анализа эпидемиологической ситуации для определения источника инфекции. Чаще всего его выполняют при диагностике стафилококковых, кишечных и других инфекций.

В основе теста лежит определение фаговариантов (фаговаров) возбудителей. Для этого дно чашки с м’ясо-пептонним агаром за числом бактериофагов разделяют на квадраты. Выращивают четырехчасовую бульйонну культуру исследуемого штамма и 1 мл ее засевают на поверхность среды. Распределяют равномерно культуру по поверхности среды и избыток ее сливают. Чашку подсушивают в термостате при 37 °С в течение 30-40 мин и на поверхность агара в каждый квадрат капают пипеткой бактериофаги соответствующих разведений. Посевы ставят в термостат или оставляют при комнатной температуре в течение 18-20 год, после чего оценивают результаты. Учет результатов проводят на темном фоне с помощью лупы. В зависимости от степени чувствительности культуры к бактериофагам выделяют разные степени лизису бактерий, который оценивается по чотириплюсовою системе: от лизиса, который сливается к его отсутствию.