- •Глава 1 Дыхание бактерий
- •Глава 2 Принципы и методы выделения чистых культур бактерий
- •2.1 Бактериологическое исследование
- •Посев петлей
- •Посев шпателем
- •Метод разведений Метод поверхностных штрихов. Методы выделения чистых культур, основанные на механическом принципе
- •Колонии по методу Дригальского
- •Метод штрихов
- •Методы выделения чистых культур, основанные на биологическом принципе
- •Этапы выделения чистых культур микроорганизмов
- •Выделение чистой культуры анаэробных бактерий
- •Выделение и идентификация анаэробных микроорганизмов
- •Среды для культивирования анаэробных микроорганизмов
- •Идентификация микроорганизмов с помощью бактериофагов
- •Литическое действие бактериофагов (справа – позитивный результат)
- •Фаготипирование бактерий
- •Определение бактериоциногенности микроорганизмов
- •Бактериоцинотипирование (зоны задержки роста)
- •Молекулярно генетические методы
- •Реакция гибридизации
- •Итог: Основные виды идентификации чистых культур
- •Характеристика колоній
- •Ориентировочная реакция агглютинации на стекле. В центре позитивный результат.
- •Важнейшие группы химиотерапевтических средств и механизмы их антимикробного действия
- •Колонии Streptomycetes, которые продуцируют стрептомицин
- •Механизм действия антибиотиков
- •Важнейшие группы антибиотиков и механизмы их противомикробного действия Антибиотики, подавляющие синтез бактериальной клеточной стенки
- •Полусинтетические пенициллины
- •Варианты цефалоспоринов
- •Антибиотики, нарушающие функции цитоплазматической мембраны (цпм) микроорганизмов
- •Антибиотики, ингибирующие синтез белка на рибосомах бактериальных клеток
- •Аминогликозидные антибиотики
- •Группа тетрациклинов
- •Левомицетин
- •Линкомицин
- •Макролиды
- •Антибиотики, ингибирующие рнк-полимеразу
- •К препаратам, которые используются во врачебной практике, ставятся определенные требования:
- •Резистентность микрорганизмов к антибиотикам
- •Плазмиды резистентности
- •Комбинированное действие антибиотиков
- •Определение чувствительности бактерий к антибиотикам
- •Основные наборы дисков, которые рекомендуются для определения чувствительности в зависимости от вида выделенной культуры и патологического материала
- •Предельные значения диаметров зон задержки роста и значения мпк антибиотиков для интерпретации результатов
- •Основные принципы рациональной антибиотикотерапии
- •V. Установление длительности курау антибиотикотерапии.
Выделение и идентификация анаэробных микроорганизмов
Учитывая современное развитие микробиологической науки, выделять и идентифицировать культуры анаэробных микроорганизмов можно аналогично аеробнимбактериям. Обязательным при этом есть соблюдение на всех этапах исследования условий анаэробиоза, используя для этого трикомпонентну газовую смесь (в определенном соотношении азот, водород и углекислый газ) или систему “Gas Generating Box”.
Однако возбудители столбняка, ботулизма, газовой анаэробной инфекции можно выделять и идентифицировать за другой схемой.
На первом этапе (И день исследования) изучают макроскопические особенности клинического материала, делают мазок и окрашивают его за методом Грама. После этого материал засевают на среду Китта-Тароцци и молоко. Предварительно среду регенерируют на кипящей водяной бане в течение 10-20 мин и охлаждают. Непосредственно после посева материала среду нагревают на водяной бане при 80°С в течение 20 мин для уничтожения вегетативных неспоровых форм микробов. Среды ставят в термостат и при температуре 37 °С культивируют 1-3 сутки.
На втором этапе изучают проявления роста микроорганизмов (помутнение, образование осадка и газа на среде Китта-тароцци, пептонизация молока). Поскольку среда Китта-тароцци сверху залита слоем вазелинового масла для предотвращения доступа кислорода, у него окунают пастеровскую пипетку, набирают жидкость, из которой готовят мазок, крася его за методом Грамма. Под микроскопом в мазке можно видеть большие граммположительные палочкоподобные бактерии. После этого проводят занял материалу за методами Вейнберга или Цейсслера для получения изолированных колоний.
За методом Вейнберга готовят несколько узких высоких пробирок (3-4) с растопленным и охлажденным до 42-45 °С сахарным м’ясо-пептонним агаром. Возможно использование среды Вильсон-блера. Материал из среды Китта-тароцци вносят в первую пробирку с помощью пастеровской пипетки и тщательным образом перемешивают, потом переносят в друге, а дальше – в третью. Для застудневания агара их быстро охлаждают под струей холодной водопроводной воды. За счет этого живые микробные клетки фиксируются в определенных участок агара. После застывания агара пробирки культивируют при оптимальной температуре в течение 1‑2 суток для образования изолированных колоний.
Колонии по Вейнбергу
Содержание каждой пробирки можно, кроме того, всосать в пастеровские пипетки или трубки Виньяль-Вейона, следя, чтобы не было пузырьков воздуха. Последние имеют длину возле 30 см и диаметр 0,5-0,6 см. Верхний конец их, который закрывается ватой, имеет перетяжку, а нижний вытянут в виде капилляра. После заполнения пипетки ее вытянутый конец запаивают и кладут в термостат для культивирования. Через 1-2 сутки в агаре вырастают колонии анаэробных бактерий. Для того, чтобы их изолировать, трубку надрезают напильником на определенном уровне, разламывают, колонию берут бактериальной петлей или иглой, переносят в соответствующую среду.
Для выделения изолированных колоний за методом Цейсслера материал из среды Китта-тароцци или молока наносят петлей или 1-2 капли пастеровской пипеткой на чашку Петри с сахарно-кровяным агаром и делают посев шпателем за методом Дригальского. Не стерилизуя шпатель, засевают вторую чашку, а затем и третью. Чашки переворачивают вверх дном, подписывают, ставят в анаеростат, в котором создают анаэробные условия, а затем – в термостат при температуре 37 °С на 2-3 сутки. На последней чашке вырастают изолированные колонии.
Третий этап исследования начинается с изучения морфологических особенностей колоний, которые выросли в чашках Петри или трубках Виньяль-вейона. Исследуются их форма, величина, цвет, характер краев, рельеф колонии, консистенция и тому подобное. Из колоний готовят мазки, красят их за методом Грама. После этого колонии отсевают в среду Китта-Тароцци для получения чистой культуры. Посевы инкубируют определенное время при оптимальной температуре.
На четвертом этапе обращают внимание на особенности роста чистой культуры возбудителей на соответствующих средах, проверяют ее на чистоту и проводят идентификацию. Идентифицируют выделенные чистые культуры анаэробных микроорганизмов подобно аеробних за морфологическими, культуральными, биохимическими и биологическими признаками. Обязательно используют определение токсигенних свойств возбудителей в биологичниий пробе и реакции нейтрализации на лабораторных животных. В некоторых случаях определяют антигенные свойства микроорганизмов.
Таким образом, на основании изучения разнообразных свойств микроорганизмов делается вывод о принадлежности их к тому или другому виду.