1 Вопрос. Физико-химические свойства.
Амфотерные соединения, обладающие свойствами как кислот, так и оснований.
И
зоэлектрическое
состояние– количество «положительных
и отрицательных зарядов равно. Молекула
электронейтральна.
Изоэлектрическая точка– рН среды, при изоэлектрическом состоянии, т.е. это такое значение рН, при котором частицы белка не передвигаются в электрическом поле ни к аноду, ни к катоду.
А
том
С – хиральный центр (ассиметрический
центр) => аминокислоты могут существовать
в 2-ух стереоизомерных формах, относящихся
к Д и кLряду.
Все природные аминокислоты относятся к L-ряду. Рацимизация осуществляется медленно. ДляL-аспарагиновая кислота 0,1 в год превращается в Д. Д – аминокислоты будут как исключение.
Как кислоты легко образуют сложные эфиры, хлорангидриды, гидрозиды, по аминогруппе могут быть алкилированы, ацелированы.
Осаждение белков. (методы выделения и очистки белков)
Этапы:
Измельчение биологического материала в гомогенный состав.
Гомогенизаторы: ножевые, пестиковые, шаровые мельницы.
Попеременное замораживание и размораживание
Замораживание воды под прессом гомогенного состава
Насыщение под Р бактериальной клетки азотом, затем резко сбрасывается Р, выделившийся газовый N взрывает клетки.
Нерастворимые части ткани из гомогената осаждаются ценрифугированием. Если выделенный белок прочно связан с какими-либо клеточными растворами, его переводят в раствор, обрабатывая гомогенат детергентами.
Экстракция
- проводят солевыми растворами, различными буферными смесями с определенными значениями рН, некоторыми органическими растворителями C2H5OH (вод).
Фракционирование смеси на индивидуальные белки.
(высаливание, тепловая денатурация, осаждение органическими растворителями, хроматография, гель-фильтрация, электрофорез, ультрацентрафигирование, кристаллизация).
Растворение белков в воде связвано с гидратацией каждой молекулы (окружением её гидратной оболочки). По физическим и химическим свойствам воды, входящая в состав гидратных оболочек отличается от чистого растворителя.
Необходимо разрушить гидратную оболочку. Водоотнимающе действуют ацетон, спирт. При нагревании, облучении, высаливания, белок выпадает в осадок.
Высаливание – процесс осаждения белка из раствора при добавления различных солей. Белок не теряет способность растворяться вновь после удаления соли. Метод высаливания используется в клинической практике. В медицинской практике используется метод Кона – происходят более тонкое разделения белка плазмы крови. Это достигается при применении различных концентраций эталона при низкой температуре = 3-5о.
Хроматография – принцип уве… (в 1903 г). Основан на специфической адсорбции на адсорбате, который заключен в колонку.
Типы хроматографии:
Ионообменная
Адсорбционная (элюэнт – раствор для выливания….)
Распределительная
Аффинная (по сродству) – сорбент – полимер, с лигандом выделяемого белка
Частные случаи: - тонкослойная хроматография
- стационарная твердая фаза на бумаге – адсорбент, жидкая фаза – пары воды;
- в колонке смола – катионид.
- принцип избирательного взаимодейтвия белков со специфическими веществами – лигандами, закрепленными на носителе.
Гель-фильтрация– разновидность хроматографии. Набухание гранул имеют поры определенные размеры, в которых диффундируют определенные белки. Можно определитьMrмассу белка. Используемые полимер – пористый, высокогидратированный сефадекс… - специально-обработанные икстраны – продукты жизнедеятельности бактерий.
Электрофорез– разделение белков в электрическом поле (отделение низкомолекулярных от высокомолекулярных). Фильтрованная бумага с раствором белка включенная в электрическую цепь.
Диализ – изготовление из целлофана диализного мешочка, в котором вода. Диализный мешочек помещают в раствор белка, следует диффузия в воде низкомолекулярных белков.