Тема 7. Трансформация микроорганизмами соединений азота

Работа 25. Аммонификация белка

Оборудование: весы, разновесы, колба 100-150 мл, дистиллированная во­да, почва, водяная баня, электроплитка, спиртовка, петли, пинцет, предметные стекла, целлофан, резиновые колечки, чашки Петри, красная лакмусовая бумага, полоски фильтровальной бумлки, пропитанные 10-процентным раствором ацетата свинца, красители (фуксин, кристаллвиолетт), микроскоп, иммерсионное масло, пробирки с MПБ и МПА.

Ход работы

Закладка элективной культуры аэробных бактерий-аммонификаторон

1. Приготовить в колбе суспензию из 10 г почвы и 90 мл дистилли­рованной воды.

2. Расплавленный МПА охладить до 45-50°С и заразить одной петлей почвенной суспензии.

3. Содержимое перемешать и вылить в стерильную чашку Петри.

4. Инкубировать при t = 25-28°C в течение 3-4 суток.

Изучение культуры

1. Описать согласно схеме (работа 15) характерные колонии.

2. Приготовить постоянные препараты, микроскопировать с им­мерсионной системой.

На МПА развиваются преимущественно колонии p. Bacillus, p. Pseudomonas, p. Proteus, p. Achromobacter.

Закладка элективной культуры анаэробных бактерип-аммопификаторов

1. Стерильный МПБ, разлитый высоким слоем в пробирки, зара­зить комочком почвы.

2. Под пробку прикрепить полоску лакмусовой бумаги для обнару­жения аммиака и полоску бумаги, смоченной ацетатом свинца, для обна­ружения сероводорода.

3. Пробирки закрыть ватными пробками и сверху закрепить целло­фан с помощью резинового колечка (анаэробные условия).

1. Инкубировать при t = 25-28°С в течение 3-5 суток.

Изучение культуры

1. Отметить наличие аммиака и сероводорода (изменение цвета индикаторных бумажек).

2. Из нижних слоев жидкости выполнить мазок, приготовить постоянный препарат.

3. Микроскопировать с иммерсионной системой. Отметить наличие и расположение спор.

На мазках преимущественно выявляются бактерии р. Clostridium.

Закладка элективной культуры анаэробных бактерий-аммонификаторов

1. Стерильный МПБ, разлитый высоким слоем в пробирки, заразить комочком почвы.

2. Под пробку прикрепить полоску лакмусовой бумаги для обнаружения аммиака и полоску бумаги, смоченной ацетатом свинца, для обнаружения сероводорода.

3. Пробирки закрыть ватными пробками и сверху закрепить целлофан с помощью резинового колечка (анаэробные условия).

4. Инкубировать при t = 25-28ºС в течение 3-5 суток.

Изучение культуры

1. Отметить наличие аммиака и сероводорода (изменение цвета индикаторных бумажек).

2. Из нижних слоев жидкости выполнить мазок, приготовить постоянный препарат.

3. Микроскопировать с иммерсионной системой. Отметить наличие и расположение спор.

На мазках преимущественно выявляются бактерии p.Clostridium.

Работа 26. Фиксация атмосферного азота микроорганизмами

Оборудование: колбы 100-150 мл, почва, питательная среда: водопроводная вода – 100 мл, маннит – 2 г, К₂НРО₄ – 0,02 г, СаСО₃ – 0,5 г; микроскоп, предметные и покровные стекла, клубеньки с корней бобовых растений, бритвы, красители (кристаллвиолетт, фуксин), спиртовка, петли, иммерсионное масло.

Ход работы