Изучение второй фазы нитрификации

1. Проверить наличие остатка азотистой кислоты реактивом цинк-йод-крахмал. Если вторая фаза нитрификации прошла до конца, проба будет отрицательной.

2. В отсутствии азотистой кислоты провести качественную реакцию на азотную кислоту. Для этого в фарфоровую палетку внести 3-4 капли концентрированной серной кислоты и несколько кристаллов дифениламина, добавить каплю исследуемой среды. При наличии азотной кислоты жидкость окрашивается в темно-синий цвет. Следует иметь в виду, что азотистая кислота с дифениламином также дает синее окрашивание.

3. Приготовить фиксированный препарат и изучить его, пользуясь иммерсией. Род Nitrobacter представлен короткими палочками (рис. 16).

4. Зарисовать наблюдаемые формы. Результаты опытов занести в таблицу:

Вариант опыта	Наличие нитритов	Наличие нитратов
Первая фаза
Вторая фаза

Обозначения: + - слабая окраска; ++ - средняя; +++ - интенсивная; ++++ - очень интенсивная.

Рис. 16. Нитрифицирующие бактерии: 1 – Nitrosomonas, 2 – Nitrodacter

Работа 28. Денитрификация

Оборудование: элективная питательная среда: сегнетовая соль – 2 г, KNO₃ – 0,2 г, K₂HPO₄ – 0,05 г, MgSO₄ – 0,02 г, вода – 100 мл (вместо соли винной кислоты можно взять лимоннокислый натрий или калий); колбы на 50 мл или пробирки, почва, дифениламин, концентрированная серная кислота, фарфоровые палетки, петли, однопроцентный раствор фуксина, спиртовки, предметные стекла, микроскопы с иммерсией.

Ход работы

Закладка элективной культуры

1. Разлить среду в высокие пробирки или в колбы до горлышка. Заразить комочком почвы. Плотно закрыть пробками.

2. Инкубировать при t = 35ºС в течение 7-12 суток.

3. Следить за ходом денитрификации по исчезновению нитратов (проба с дифениламином), отмечая появления аммиака.

Изучение культуры

1. Закончить инкубацию, когда проба на азотную кислоту станет отрицательной.

2. Изготовить фиксированный окрашенный препарат. При микроскопировании выявляются мелкие палочки. При выращивании на солях винной кислоты чаще выявляются Pseudomonas stutzeri, на цитратах – Paracoccus denitrificans.

Тема 8. Участие микроорганизмов в круговороте углерода (3 ч)

Работа 29. Молочнокислое брожение

Оборудование: молочнокислые продукты (кефиры, йогурт, ацидофилин), рассолы (капустный, огуречный, грибной), спиртовки, петли, красители (фуксин и метиленовый синий), микроскоп с иммерсионной системой, предметные стекла.

Ход работы

1. Изготовить фиксированные окрашенные препараты готовых культур.

2. Изучить препараты под микроскопом с иммерсией. Выполнить рисунки.

3. При микроскопировании в указанных средах выявляются Streptococcus lactis, Lactobacillus bulgaricus, выявляются Streptococcus cremoris, Lactobacillus acidophilus и другие бактерии, а также дрожжевые грибы (рис. 17).

1 2

Рис. 17. Микрофлора:

1 – кефира, 2 – ацидофилина: Streptococcus lactis, Lactobacillus bulgaricus,

Saccharomyces kefiri, Lactobacillus acidophilus

Работа 30. Маслянокислое брожение

Оборудование: колбы на 50-100 мл, солод, мел, сахар, семена гороха, электроплитка, вата, рабочий раствор Люголя (УвКУ), микроскоп с иммерсионной системой, предметные стекла, петли, фуксин, полиэтиленовая пленка, резиновые колечки.

Ход работы