Тема 2. Приготовление препаратов микроорганизмов прижизненное изучение микроорганизмов (1 ч)

Работа 4. Приготовление препарата методом раздавленной капли

На чистое предметное стекло наносят ровную каплю водопроводной воды и помещают в нее немного исследуемых микроорганизмов. Рекомендуются настои естественных материалов (мяса, рыбы, муки, овощей, навоза и др.). Покровное стекло ставят на ребро у самого края капли и постепенно опускают на нее, предотвращая появление пузырьков воздуха. Излишек жидкости удаляют фильтровальной бумагой.

При исследовании жидкой культуры неразбавленную суспензию клеток наносят на стекло пипеткой.

Микроскопируют препарат сухой системой. Препарат позволяет установить форму клеток, их размеры, расположение, наличие подвижности.

Работа 5. Приготовление препарата методом висячей капли

Вцентр покровного стекла наносят бактериологической петлей небольшую ровную каплю исследуемой жидкости (рис. 3). На покровное стекло с каплей осторожно накладывают предметное стекло с лункой так, чтобы капля помещалась в центре углубления.

Края лунки предварительно смазываются вазелином, препарат быстро переворачивают и микроскопируют.

Метод используется в основном для выявления подвижности микроорганизмов.

Наблюдают висячую каплю при суженной диафрагме с плоским зеркалом. Препарат «висячая капля» может храниться долго.

Рис. 3. Приготовление препарата методом висячей капли

Работа 6. Прижизненная окраска микроорганизмов

К капле микробной суспензии на предметном стекле добавляют каплю красителя и накрывают все это покровным стеклом.

Рекомендуется дифференцировать пекарские дрожжи для выявления живых и мертвых клеток. Мертвые клетки окрашиваются быстрее и ярче.

Для прижизненной окраски используются малые концентрации нетоксичных красителей: нейтральный красный, нейтральный фиолетовый, метиленовый синий, эозин, эритрозин в концентрациях 1:10 000,1:100 000.

Отработанные препараты живых микроорганизмов помещают в дезинфицирующий раствор.

Работа 7. Приготовление фиксированного и окрашенного

(постоянного) препарата

В постоянных препаратах микроорганизмы зафиксированы, т.е. убиты и приклеены к стеклу, затем окрашены.

Метод включает несколько этапов:

1. Обезжиривание стекол. Наиболее надежна обработка смесью Никифорова (эфир + спирт 1:1). В повседневной работе бывает достаточно натереть стекло мылом и вытереть салфеткой или обжечь стекло в пламени горелки.

2. Приготовление мазка. На стекло наносят суспензию клеток в капле водопроводной воды и с помощью иглы или покровного стекла распределяют ровным слоем (≈ 4 см²).

3. Высушивание мазка производится на воздухе или очень высоко над пламенем горелки (чтобы избежать коагуляции).

4. Фиксация обеспечивает гибель клеток, прилипание к поверхности стекла и большую восприимчивость к красителю. Простейший способ – фиксация пламенем: препарат проводят 2-3 раза в пламени горелки. В особых случаях применяют химические фиксаторы: осмиевая кислота, спирт, формалин и другие.

5. Окраска. На охлажденный препарат наносится краситель на 1-3 минуты, затем препарат тщательно промывается водой.

6. Высушивание производится на воздухе. Можно с помощью фильтровальной бумаги.

7. Микроскопирование производится без покровного стекла в иммерсионной системе.