Закладка элективной культуры десульфатирующих бактерий
Приготовить элективную среду: дистиллированная вода – 100 мл, натрий (или кальций) молочнокислый (CH3-CH(OH)-COONa) – 0,35 г, (NH4)2SO4 – 0,4 г, K2HPO4 – 0,05 г, Mg SO4 – 0,1 г, CaSO4 – 0,05 г, соль Мора – 0,05 г. рН среды = 7.
Среду стерилизовать в автоклаве при 0,5 атм. 30 минут. Соль Мора стерилизуют отдельно и добавляют в среду перед посевом.
Разлить в стерильные большие пробирки доверху.
Заразить почвой (0,2 г) или сточной водой (0,5 мл).
Для обнаружения сероводорода внести кристаллик железного купороса.
Закрыть резиновыми пробками, заплавить парафином (анаэробные условия).
Инкубировать 2-3 недели при t = 25-30ºС.
Из осадка среды выделяется накопительная культура Desulfovibrio desulfuricans (рис. 20).
Выполнить рисунок, проследить выделение сероводорода по запаху и почернению среды при образовании сульфида железа.
Рис. 20. Десульфатирующие серобактерии Desulfovibrio desulfuricans
Изучение культур
Из элективных культур изготовить прижизненные препараты «раздавленная капля», изучить, пользуясь объективом х 40.
Изготовить фиксированные окрашенные препараты, промикроскопировать с иммерсионной системой.
Изготовить препарат «раздавленная капля» из ила серного источника, тщательно изучить под микроскопом.
Выполнить рисунки препаратов.
Рецепты некоторых красителей, индикаторов и растворов
Насыщенный раствор метиленовой синей.
3 г метиленовой синей растворяют в 100 мл 96-процентного спирта. Настаивают в течение 2-3 дней, периодически встряхивая. Фильтруют. Раствор может храниться длительное время.
Раствор метиленовой синей (1:40).
Готовят непосредственно перед употреблением. 1 мл насыщенного раствора + 40 мл дистиллированной воды.
Метиленовая синяя по Лёффлеру.
К 100 мл дистиллированной воды прибавляют 300 мл насыщенного спиртового раствора метиленовой синей и 1 мл однопроцентного раствора КОН. Раствор устойчив.
Насыщенный спиртовой раствор фуксина основного.
10 г сухого красителя растворяют в 100 мл 96-процентного спирта. Раствор устойчив.
Раствор фуксина 1:10.
К 90 мл дистиллированной воды добавляют 10 мл насыщенного раствора фуксина. Водный раствор нестоек, поэтому его готовят непосредственно перед употреблением.
Раствор фуксина для окрашивания прижизненных препаратов.
К 100 мл дистиллированной воды добавляют 1 мл насыщенного спиртового раствора фуксина.
Карболовый фуксин Циля.
К 10 мл насыщенного раствора фуксина прибавляют 100 мл 5-процентного раствора фенола (карболовой кислоты). Приготовленную смесь через 48 часов отфильтровывают. Раствор устойчив.
Раствор генцианвиолетта.
К 10 мл дистиллированной воды добавляют 1 мл насыщенного спиртового раствора генцианвиолетта.
Карболовый генцианвиолетт.
Растворяют 1 г генцианвиолета в 10 мл 96-процентного спирта. Полученный раствор выливают в 100 мл 5-процентного раствора фенола.
Карболовый эритрозин.
3 г эритрозина и 5 г фенола растворяют в 100 мл дистиллированной воды. Смесь отстаивают, а затем ею пользуются для окраски почвенных микроорганизмов.
Судан III.
0,5 г красной краски Судан III растворяют в 100 мл 95-процентного спирта.
Раствор Люголя в модификации Грама.
В ступку помещают 1 г кристаллического иода и 2 г иодистого калия и растирают смесь пестиком. Добавляют 1 мл дистиллированной воды и, продолжая растирать, добавляют еще 5 мл воды. Раствор переносят в склянку и доводят общий объем до 300 мл. Раствор годен не более 30 дней. Хранить в темной посуде.
Раствор Люголя для выявления гликогена и гранулезы.
Для окраски гликогена: 7 г йода, 20 г йодистого калия и 100 мл дистиллированной воды.
Для окраски гранулезы: 1 г йода, 2 г йодистого калия и 100 мл дистиллированной воды. Раствор готовят как указано в пункте 12.
Раствор туши.
Жидкую натуральную тушь разводят водопроводной водой в соотношении 1:9, разливают в пробирки и автоклавируют при 0,5 атм. Раствору дают отстояться 2 недели, после чего тушь готова к употреблению.
Реактивы для крахмально-иодной пробы на нитриты.
а) 2 г ZnCl2 растворяют в 10 мл дистиллированной воды, кипятят и добавляют крахмал (0,4 г). Доводят объем до 100 мл и оставляют стоять неделю. Затем раствор фильтруют и добавляют равный объем 0,2-процентного раствора КJ.
б) H2SO4 (1 часть концентрированной H2SO4 + 3 части дистиллированной воды).
Хромовая смесь для мытья посуды.
1-й способ: В концентрированную серную кислоту добавляют около 5% размельченного в порошок кристаллического бихромата калия и осторожно нагревают в фарфоровой чашке на водяной бане до его растворения.
2-й способ: 6 г бихромата калия растворяют в 100 мл воды, затем в раствор осторожно (!) добавляют 100 мл серной кислоты.
Раствор дифениламина.
Несколько кристаллов дифениламина растворяют в 1 мл концентрированной серной кислоты.
Реактив Несслера.
Раствор хлорида ртути (17 г в 300 мл воды) приливают к раствору йодида калия (35 г в 100 мл воды) до выпадения красного нерастворимого осадка. Объем полученной жидкости доводят до 1 л, добавляя 20-процентного раствор ОН. Если при этом осадок растворился, то снова добавляют раствор хлорида ртути до получения осадка. Раствор хранят в герметично закрытой склянке.
Реактив Несслера для выявления аммиака.
32 г дистиллированной воды, KI (134 г), HgCl2 (500 мл), KOH (20 г).
20 г KI растворяют в 50 мл дистиллированной воды, к раствору до насыщения добавляют HgCl2 (около 32 г), далее доливают 460 мл дистиллированной воды и вносят 134 г КОН. Раствор хранят в темной склянке, лучше в холодильнике.
Чернила для написания по стеклу.
1 г фуксина основного растворяют в 15 мл спирта. 2 г танина растворяют в 15 мл воды и кипятят. Оба раствора смешивают в равных объемах.