- •Минобрнауки россии
- •Введение
- •Правила работы и поведения в лаборатории
- •Список необходимого оборудования
- •Порядок выполнения работ и оформления лабораторного журнала
- •Тема 1. Техника микроскопирования (1 ч)
- •Тема 2. Приготовление препаратов микроорганизмов прижизненное изучение микроорганизмов (1 ч)
- •Тема 3. Питательные среды, их приготовление, разливка. Получение элективных культур (1 ч)
- •Тема 4. Экология микроорганизмов. Основы санитарно-бактериологического анализа
- •1000 Л – х микробов
- •Критерии для санитарной оценки воздуха жилых помещений (число микроорганизмов в 1 м3 воздуха) по а.И.Шафиру
- •Тема 5. Получение чистых культур. Изучение особенностей микроорганизмов с целью их идентификации (4 ч)
- •Обнаружение волютина
- •Обнаружение гликогена и гранулезы
- •Тема 6. Изучение ветвящихся и образующих плодовые тела форм бактерий методом элективных культур
- •Тема 7. Трансформация микроорганизмами соединений азота
- •Изучение культуры
- •Закладка элективной культуры азотобактера
- •Изучение культуры
- •Закладка элективных культур первой и второй фаз нитрификации
- •Изучение первой фазы нитрификации
- •Изучение второй фазы нитрификации
- •Закладка элективной культуры
- •Изучение культуры
- •Тема 8. Участие микроорганизмов в круговороте углерода (3 ч)
- •Закладка элективной культуры
- •Изучение культуры
- •Закладка элективной культуры
- •Закладка элективной культуры тионовых серобактерий
- •Закладка элективной культуры десульфатирующих бактерий
- •Изучение культур
- •Рецепты некоторых красителей, индикаторов и растворов
- •Литература
Тема 3. Питательные среды, их приготовление, разливка. Получение элективных культур (1 ч)
Работа 8. Получение элективной культуры сенной палочки
(Bacillus subtilis)
Элективными (накопительными) называют культуры, в которых преобладают особи одного вида микроорганизмов, но наряду с ними присутствуют и другие.
Оборудование: ножницы, сено, стерильные конические колбы, вата, мел, электрическая плитка, воронка.
Ход работы
Колбу объемом 500 мл на четверть заполняют мелко нарезанным сеном, доливают водой, добавляют щепотку мела и кипятят 15-20 минут. Отвар фильтруют через вату, вложенную в воронку, в стерильные конические колбы слоем 1-2 см, закрывают ватными пробками. Температура инкубации – 22-25ºС.
Через сутки обнаруживаются подвижные формы Bacillus subtilis (рис. 4а).
В двух-трехсуточной культуре наблюдается пленка из палочек, соединенных в нити (рис. 4б).
В шести-семидневной культуре наблюдается образование спор (рис 4в).
Задание: пронаблюдать и зарисовать цикл развития Bacillus subtilis:
Рис. 4:
а - однодневная культура; б - двухдневная; в - семидневная
Работа 9. Разлив агара
Оборудование: пробирки со стерильным мясо-пептонным или сухим питательным агаром (МПА, СПА), водяная баня, спиртовка, спички, стерильные чашки Петри.
Ход работы
Разогреть пробирки с агаром на водяной бане до расплавления.
Завернутую в бумагу чашку положить перед собой, бумагу развернуть, за чашкой поместить зажженную спиртовку.
Обжечь пробку и горлышко пробирки с МПА, держа ее в правой руке.
Левой рукой вынуть ватную пробку, приоткрыть чашку Петри, ввести в нее горлышко пробирки и влить агар.
Закрыть чашку и, покачивая ее, распределить агар ровным слоем. Дать застыть.
Тема 4. Экология микроорганизмов. Основы санитарно-бактериологического анализа
(3 ч)
Работа 10. Количественный анализ микроорганизмов воздуха
Для ориентировочного и сравнительного определения загрязненности воздуха пользуются чашечным (седиментационным) методом Коха. Более точен аспирационный метод с помощью аппарата Кротова.
Оборудование: стерильные чашки Петри, МПА (СПА) в пробирках, водяная баня, спиртовка, карандаш по стеклу, микроскоп, термостат.
Ход работы
Разлить агар в чашки Петри (Р-9).
Открыть чашку в исследуемом помещении на 5 минут.
Закрыть чашку и поместить в термостат на 7 дней при t = 23-26ºС. Завернутую в бумагу чашку Петри перевернуть крышкой вниз, чтобы конденсированная влага не стекала на агар.
Измерить миллиметровой бумагой радиус чашки Петри и подсчитать площадь по формуле S = πr2.
Подсчитать число выросших колоний с помощью лупы: а) бактерий; б) грибов.
Рассчитать количество микробов в 1 м3 воздуха, пользуясь методикой В.Л. Омелянского.
Пример расчета: по В.Л. Омелянскому, на площадь 100 см2 за 5 минут оседает столько микробов, сколько их в трех литрах воздуха
S = πr2 = 3,14 4,52 = 63,6 см2
63,6 см2 – 43 микроорганизма
100 см2 – х микроорганизмов
х (микроорганизмов в трех литрах)
Нам нужно узнать, сколько микробов оседает из 1 м3 воздуха (или из 1000 литров):
3 л – 67 микробов