Добавил:
ivanov666
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз:
Предмет:
Файл:Применение комбинированных препаратов (эмексид и смектовет) при послеродовом эндометрите у коров и желудочно-кишечных болезнях у телят. Монография
.pdf
Таблица 31
Клиническое состояние кроликов до опыта и через 4 ч
Номер
кролика
1 38,5 126 55 38,6 128 59
2 38,7 125 54 38,7 127 56
3 38,8 128 57 38,8 128 59
4 38,4 124 56 38,5 124 59
5 38,5 125 58 38,5 126 60
6 38,6 128 55 38,6 130 58
М
ср
Примечание. Т – температура тела, оС; П – пульс, количество ударов
в мин; Д – количество дыхательных движений в мин.
Данные о клиническом состоянии кроликов через 24 и 48 ч
Номер
кролика
1 38,7 123 53 38,6 124 55
2 38,7 125 54 38,7 125 56
3 38,5 126 59 38,8 127 59
4 38,5 124 56 38,6 124 59
5 38,5 128 58 38,5 126 54
6 38,6 130 55 38,6 130 56
М
ср
Исходные данные По окончании экспозиции (4 ч)
Т П Д Т П Д
38,5 126 55,8 38,6 127,2 58,5
Таблица 32
после нанесения препарата
Через 24 ч Через 48 ч
Т П Д Т П Д
38,58 126 55,8 38,6 126 56,5
Из данных табл. 31 и 32 видно, что клиническое состояние кроликов на протяжении эксперимента оставалось в пределах физиологической нормы.
При анализе полученных данных установлено, что
смектовет не обладает местно-раздражающим действием
на кожу при однократном нанесении.
2.2.1.9. Аллергенные свойства смектовета
Аллергенные свойства препарата смектовет изучали
в несколько этапов.
121
Опыты проведены на 12 морских свинках обоего
пола массой тела 250–300 г рыжей окраски с большими белыми участками на боках. Животные содержались
в обычных условиях вивария на стандартном рационе.
Морские свинки после карантинирования по принципу аналогов были разделены на 2 группы – опытную
и контрольную по 6 голов в каждой. Кожно-сенсибилизирующее действие смектовета изучали путем многократного нанесения препарата на выстриженные участки
спины 3 х 3 см морских свинок опытной группы. Участки
готовили за 1 сутки до начала эксперимента. На эпилированную поверхность наносили препарат ежедневно в течение 21 дня в количестве 200 мг. Морским свинкам контрольной группы препарат не наносили. При ежедневном
наблюдении после 15-го дня отмечали сухость кожного
покрова у двух морских свинок опытной группы в сравнении с контролем. Эритемы, признаков воспаления, отека, болезненности не наблюдали.
Через 10 дней морским свинкам опытной группы на
противоположный участок наносили разрешающую дозу
смектовета в количестве 100 мг. В течение суток видимых изменений кожного покрова не наблюдали, что говорит об отсутствии сенсибилизации организма.
Во второй серии опытов нами было взято 9 морских
свинок. В кожу наружной поверхности уха морских свинок 1-й опытной группы (3 животных) с помощью туберкулинового шприца вводили 20 мкл, 2-й (3 животных) –
30 мкл 0,5 %-го водного раствора смектовета. Контрольным свинкам (3 животных) вводили такое же количество
физиологического раствора натрия хлорида. Наличие реакции оценивали через 12 дней после однократной сенсибилизации путем накожного нанесения 400 мкл раствора
испытуемого препарата на выстриженные участки боков
122
в течение 7 дней. Через 24 ч после последней аппликации
проводили учет реакции кожи и исследовали кровь.
Установлено, что через 15 мин после внутрикожного введения испытуемый препарат не вызывал видимых
изменений ушных раковин. Через 12 суток при нанесении на выстриженные участки разрешающей дозы препарата видимая реакция (гиперемия, зуд, отек) отсутствовала.
Через 24 ч после учета эпикутанных аппликаций
были поставлены иммунологические тесты: реакция
специфической агломерации лейкоцитов (РСАЛ), реакция специфического лизиса лейкоцитов (РСЛЛ) и реакция непрямой дегрануляции тучных клеток (НДТК). Результаты исследований представлены в табл. 33.
Таблица 33
Результаты иммунологических тестов
Смектовет, доза, мкл
20,0 30,0
Реакция специфической агломерации лейкоцитов (РСАЛ)
1,72 ± 0,12 1,84 ± 0,13 1,76 ± 0,12
Реакции специфического лизиса лейкоцитов (РСЛЛ)
5,91 ± 0,65 6,71 ± 0,72 6,21 ± 0,80
Контроль
При исследовании сенсибилизирующего действия
препарата смектовет не выявлено выраженной реакции
иммунной системы опытных животных на его введение.
Препарат не вызывал контактного дерматита после многократных накожных аппликаций, а реакции специфического лизиса и специфической агломерации лейкоцитов
были отрицательные.
Была поставлена реакция непрямой дегрануляции
тучных клеток. Данная реакция используется при определении гиперчувствительности к различным веществам,
в том числе к медикаментозным.
123
Взвесь тучных клеток собирали из брюшной полости
белых крыс в смоченные гепарином пробирки. Предварительно животным внутрибрюшинно вводили 5 мл подогретого до 37 °C раствора Тироде без глюкозы, после
легкого массажа брюшной стенки в течение 1–1,5 мин делали разрез брюшной стенки по средней линии и собирали экссудат, содержащий тучные клетки. Тучные клетки
отделяли трехкратным центрифугированием с фосфатным буфером (рН 7,2). В окрашенных по Романовскому
мазках подсчитывали по 100 клеток, определяли процент
дегранулированных и сравнивали с контролем. Реакция
считалась положительной, если процент дегранулированных тучных клеток в опытных мазках превышал этот
показатель контрольных животных более чем на 10 %
(табл. 34).
Таблица 34
Влияние смектовета на дегрануляцию тучных клеток
Доза препарата Дегранулированные тучные клетки, %
Контроль 4,47 ± 0,12
Смектовет 20,0 мкл 3,97 ± 0,41
Смектовет 30,0 мкл 4,85 ± 0,15
Как видно из данных, представленных в табл. 34, реакция гиперчувствительности к препарату смектовет отсутствует.
Исследования сенсибилизирующего действия смектовета не выявили выраженной реакции иммунной
системы подопытных животных. Препарат не вызвал
контактного дерматита после многократных накожных
аппликаций, реакции специфического лизиса и специфической агломерации лейкоцитов, непрямой дегрануляции
тучных клеток были отрицательными. Полученные данные позволяют сделать вывод об отсутствии аллергенного действия у препарата смектовет.
124
2.2.1.10. Эмбриотоксичность
и тератогенность смектовета
Опыты проведены по методике А. П. Шицковой
и др. (1977) на самках белых крыс линии Вистар массой 180–220 г. Фазу полового цикла устанавливали
путем исследования вагинального содержимого. Первым днем беременности считали день обнаружения
спермиев после подсадки самцов к самкам. Животные
по принципу аналогов были разделены на 3 группы –
2 опытные и контрольную по 20 животных в каждой.
Крысам 1-й опытной группы на 5-й день беременности
(период имплантации) и 1-й на 10-й день беременности
(период органогенеза) вводили смектовет перорально
в дозе 1/10 LD50, установленной в остром опыте. Для
выявления повреждающего действия препарата на
плод половину самок подвергали эутаназии на 19–20-й
дни беременности. Проводили осмотр матки, плацент
и плодов, подсчитывали количество желтых тел, оценивали равномерность положения плодов в рогах матки.
Раннюю и позднюю резорбцию, общую эмбриональную смертность, выживаемость подсчитывали по формулам, предложенным А. М. Малашенко и И. К. Егоровым (1977). В целях выявления патологии внутренних
органов эмбрионов материал фиксировали в жидкости
Боуэна и 70° спирте. Аномалии скелета выявляли по
методу Даусона (1984). Критериями оценки эмбриотоксического и тератогенного действия смектовета
служили показатели гибели зародышей на пред- и постимплантационных стадиях развития (эмбриональный
эффект), наличие аномалий развития внутренних органов и скелета (тератогенный эффект), уровень плодовитости, масса зародышей. Результаты исследований
представлены в табл. 35.
125
Таблица 35
Результаты изучения эмбриотоксического
и тератогенного действия препарата смектовет
Показатель Контроль
Эмбриотоксическое действие
Количество желтых
тел на одну самку
Количество мест имплантации на одну
самку
Количество живых
эмбрионов на одну
самку
Количество мертвых
эмбрионов на одну
самку
Общая эмбриональная смертность, %
Постимплантационная гибель, %
Доимплантационная
гибель, %
Выживаемость 87,3 ± 10,1 89,3 ± 11,3 90,3 ± 10,1
Средняя масса
крысенка, мг
Средняя длина туловища крысенка, мм
Средняя масса плаценты, мг
Уродства, аномалии
развития внутренних
органов и скелета
11,2 ± 0,4 11,1 ± 0,5 11,4 ± 0,6
10,4 ± 0,3 10,5 ± 0,2 10,8 ± 0,6
9,8 ± 0,4 9,7 ± 0,2 9,9 ± 0,7
1,1 ± 0,3 0,9 ± 0,5 0,6 ± 0,5
13,5 ± 0,3 13,0 ± 0,5 13,4 ± 0,6
9,3 ± 0,7 8,5 ± 0,4 5,6 ± 0,3
4,5 ± 0,4 5,4 ± 0,3 6,5 ± 0,5
Тератогенное действие
6011,1 ± 167,7 5825,8 ± 251,0 5834,4 ± 163,2
47,1 ± 0,6 48,1 ± 0,5 47,9 ± 0,4
299,8 ± 31,2 322,3 ± 25,3 301,1 ± 15,2
Нет Нет Нет
Смектовет
5-й день 10-й день
Установлено, что препарат смектовет в дозе 1/10 LD50
(617 мг/кг) при введении на 5-й день (период имплантации) и на 10-й день (период органогенеза) беременности
126
не оказывал отрицательного воздействия на ее продолжительность.
Достоверных различий в плодовитости крыс опытных и контрольной групп не установлено. Среднее количество плодов на самку в контрольной группе составило
9,8 + 0,4, а у крыс, получавших препарат на 5-й и 10-й
дни беременности, 9,7 ± 0,2 и 9,9 ± 0,7 соответственно.
Уродств, аномалий развития внутренних органов и скелета плодов, рожденных от крыс опытных групп, не обнаружено. Таким образом, смектовет не обладает эмбриотоксическим и тератогенным действием.
В соответствии с данными Европейского агентства
по оценке лекарственных препаратов, Комитета по ветеринарным лекарственным препаратам (The European
Agency for the Evaluation of Medicinal Products, Veterinary
Medicines Evaluation Unit, Committee for Veterinary
Medicinal Products), сульфаниламиды и триметоприм
не обладают мутагенным и канцерогенным действием
(EMEA/MRL/029/95-Rev5). В связи с этим дополнительные исследования по изучению мутагенности и канцерогенности препарата смектовет не проводили.
2.2.1.11. Действие повышенных доз на здоровых телят
Опыты по изучению действия повышенных доз препарата смектовет провели на 9 телятах первой недели
жизни массой 40,0–50,0 кг, разделенных по принципу
аналогов на 3 группы по 3 головы в каждой. Препарат
вводили индивидуально перорально в виде водного раствора, приготовленного на теплой кипяченой воде. Телятам 1-й группы вводили смектовет в дозе 0,2 г/кг массы (расчетная терапевтическая доза), 2-й группе – 1,0
(5-кратная терапевтическая доза), 3-й группе – в дозе
2,0 г/кг (10-кратная терапевтическая доза). За животны-
127
ми вели наблюдения в течение 7 суток после введения,
отмечая общее состояние, поведение, отправление физиологических функций.
Однократное пероральное введение препарата в дозах
0,2 и 1 г/кг массы не вызывало видимых изменений в клиническом состоянии телят. На протяжении 7 суток отклонений в поведении и состоянии телят не отмечалось.
Однократное пероральное введение смектовета
в дозе 2,0 г/кг массы (10-кратная терапевтическая доза)
вызвало кратковременное угнетение общего состояния
с отказом от корма и питья, проходящее в течение 3 часов. В дальнейшем на протяжении 7 суток отклонений
в поведении и состоянии телят не отмечали, гибель животных отсутствовала.
Таким образом, можно сделать вывод, что смектовет
относится к веществам малоопасным.
1.2.1.12. Субхроническая токсичность смектовета
для здоровых телят
Изучение субхронической токсичности препарата
смектовет проведено на 9 телятах месячного возраста,
которых разделили на 3 группы. Токсическое действие
препарата при энтеральном применении оценивали по
клиническому состоянию, морфологическим, биохимическим показателям крови. Кровь для исследований брали у телят из яремной вены в утреннее время до кормления. В крови определяли количество эритроцитов,
лейкоцитов, гемоглобина, лейкограмму рассчитывали
общепринятыми методами. Фракции белка, концентрацию общего белка, липидов и билирубина, концентрацию мочевины, холестерина, глюкозы, креатинина, активность АсАТ и АлАТ – на биохимическом анализаторе
«Infrapid-61».
128
Смектовет применяли телятам перорально в дозах
0,2 (терапевтическая доза) и 1,0 г/кг массы тела (5-кратная терапевтическая доза) в течение 14 дней с интервалом между введениями 24 ч. Препарат задавали с небольшим количеством теплой кипяченой воды. Контрольным
животным препарат не применяли.
Смектовет в изучаемых дозах не оказывал существенного влияния на клинический статус, поведение
и аппетит телят. Показатели клинического состояния телят всех групп в течение всего опыта находились в пределах физиологической нормы (табл. 36).
Таблица 36
Показатели температуры, частоты пульса и дыхания телят
в течение опыта
Период
исследований
До введения препарата
Через 7 дней после
введения препарата
Через сутки после
окончания введения
препарата
Доза,
мг/кг
Контроль 38,6 ± 0,10 123,1 ± 3,81 40,9 ± 3,16
200,0 38,5 ± 0,12 127,7 ± 4,16 38,6 ± 2,91
1000,0 38,8 ± 0,11 125,7 ± 3,21 41,7 ± 2,21
Контроль 38,7 ± 0,11 124,3 ± 4,73 38,6 ± 2,06
200,0 38,5 ± 0,10 129,7 ± 2,85 37,0 ± 2,10
1000,0 38,4 ± 0,13 126,1 ± 4,21 39,2 ± 2,63
Контроль 38,6 ± 0,08 126,7 ± 3,93 39,0 ± 2,68
200,0 38,7 ± 0,10 128,5 ± 3,37 37,8 ± 2,52
1000,0 38,7 ± 0,09 126,7 ± 2,96 40,5 ± 3,12
Tемпера-
тура,°С
Пульс,
уд/мин
Кол-во
дыханий
в 1 мин
В течение всего опыта телята контрольной и опытной
групп были подвижны, активны, рефлексы сохранены.
Нарушений функций пищеварения и мочеотделения не
установлено. Препарат в исследуемых дозах не снижал
скорости роста телят и не влиял на их развитие.
Многократное применение смектовета в терапевтической и в 5 раз ее превышающей дозах существенно не
влияло на морфологические и биохимические показатели крови телят (табл. 37).
129
Таблица 37
Показатели крови клинически здоровых телят при применении
смектовета (через сутки после отмены препарата)
Показатель Контроль
Эритроциты, 1012/л 6,90 ± 0,21 6,80 ± 0,15 6,30 ± 0,42
Лейкоциты, 109/л 11,50 ± 3,01 10,20 ± 3,15 10,40 ± 3,26
Гемоглобин, г/л 102,10 ± 5,13 108,00 ± 5,04 104,10 ± 6,17
Общий белок, г/л 65,10 ± 0,57 65,70 ± 1,51 62,10 ± 3,12
Альбумины, г/л 34,70 ± 1,15 35,90 ± 2,27 33,10 ± 2,28
α-глобулины, г/л 9,90 ± 1,03 10,30 ± 2,11 9,80 ± 1,53
β-глобулины, г/л 11,50 ± 2,10 10,40 ± 1,04 10,30 ± 2,10
γ-глобулины, г/л 9,20 ± 3,21 9,50 ± 2,34 9,30 ± 1,23
Мочевина, мМ/л 4,32 ± 0,42 4,90 ± 0,47 5,14 ± 0,41
Глюкоза, мМ/л 4,13 ± 0,08 3,96 ± 0,22 4,20 ± 0,13
Общие липиды, г/л 2,15 ± 0,14 1,88 ± 0,19 1,98 ± 0,14
Холестерин, мМ/л 1,15 ± 0,21 1,20 ± 0,13 1,14 ± 0,10
АсАТ, ЕД/л 37,10 ± 3,04 40,10 ± 4,01 43,50 ± 3,44
АлАТ, ЕД/л 76,70 ± 5,29 79,20 ± 4,81 85,10 ± 5,61
Креатинин, мкМ/л 107,40 ± 3,54 113,60 ± 4,28 116,30 ± 5,76
Билирубин, мкМ/л 2,22 ± 0,22 2,33 ± 0,19 2,51 ± 0,21
Дозы препарата, мг/кг
200,0 1000,0
При исследовании была отмечена тенденция повышения в сыворотке крови уровня мочевины и креатинина, билирубина и активности АсАТ, но они достоверно не
отличались от показателей контрольной группы и находились в пределах физиологической нормы для данного
вида животных.
В результате установлено, что длительное введение
препарата смектовет в терапевтической и в 5-кратной терапевтической дозе телятам не вызывало функциональных изменений в организме.
Уровень креатинина и мочевины в сыворотке крови
был практически в пределах нормы, что свидетельствует о том, что смектовет в испытанных дозах не обладает
нефротоксическим действием.
130
Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]