Добавил:
ivanov666
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз:
Предмет:
Файл:Патогенные анаэробы рода Clostridium в ветеринарной медицине. Учебное пособие для студентов ветеринарного факультета.pdf
111
Экзотоксин Cl.novyi по активности превосходит токсины других
возбудителей газовой гангрены. Он сильнее других токсинов угнетает
фагоцитоз и обладает гемолитическим действием, которое нейтрализуется
специфической антитоксической сывороткой, ему присущи летальные и
некротические свойства. Токсин разрушается при нагревании до 50 °С в
течение 30 мин.
Этот микроб также образует ферменты патогенности - гиалуронидазу,
фибринолизин, дезоксирибонуклеазу, протеиназы.
Антигенная структура. По составу растворимых антигенов токсина
различают четыре серовара Cl.novyi: А, В, С и D.
Серовар A (Cl.novyi) вызывает газовую гангрену у человека и
животных, выделяется также при брадзоте. Вырабатывает альфа-, гамма- и
дельта-токсины.
Серовар В (Cl.gigas) является возбудителем инфекционного
некротического гепатита овец, а также газовой гангрены человека и
травоядных. Может вызывать у крупного рогатого скота и свиней
инфекционный некротический гепатит. Вырабатывает альфа- и бета-токсины.
Серовар С (Cl.bubalorum) вызывает хронический остеомиелит у
буйволов, продуцирует гамма-токсин.
Серовар D (Cl.haemolyticum) вызывает инфекционную иктерогемоглобинурию у крупного рогатого скота, очень редко у овец и в
единичных случаях у свиней. Синтезирует бета-токсин, а также эта- и тетатоксины. Первый из них - фермент тропомиозиназа - расщепляет миозин и
повреждает мышцы.
Устойчивость. Вегетативные формы по устойчивости не отличаются
от других видов патогенных анаэробов. Они погибают от воздействия
прямых солнечных лучей через 24-48 ч, ультрафиолетовых лучей через 20-30
мин. Нагревание до 80 °С убивает их за 20 мин, кипячение - за 5 мин. Споры
могут сохраняться в почве в течение 7-8 лет и выдерживать кипячение 1-2 ч.
112
Патогенность. Злокачественный отек, обусловленный Cl.novyi, может
возникать вследствие любого ранения, инфицированного этим возбудителем.
Исход болезни, как правило, смертельный. Поражаются животные различных
видов: лошади и другие непарнокопытные, рогатый скот, овцы, козы, свиньи,
дикие млекопитающие, птицы.
Из лабораторных животных исключительно восприимчивы морские
свинки. У них на месте введения культуры отмечается желатинозный
студенистый бесцветный или слабо-розовый отек с небольшим количеством
газа. Мышцы гиперемированы, без запаха.
Clostridium histolyticumвыделили в 1916 г.
Вейнберг и Сеген из раневого содержимого человека, пораженного газовой
гангреной. При раневой анаэробной инфекции обнаруживают реже других
микробов, не более чем в 1-18 % случаев. Как правило, встречается в
ассоциации с другими патогенными клостридиями, значительно осложняя
течение болезни. У лошадей известны случаи, когда Cl.histolyticum был
единственным возбудителем раневой инфекции. Этот микроб является
естественным обитателем кишечника человека и животных.
Морфология. Cl.histolyticum - грамположительная палочка длиной 3-5
и шириной 0,2-0,5 мкм, образующая в старых культурах овальные,
расположенные центрально или субтерминально (в виде игольного ушка)
споры; в организме споры не формируются. Перитрих, подвижный в свежих
культурах. Капсулу не имеет. Легко окрашивается спирто-водными
растворами анилиновых красок.
Культивирование. На среде Китта - Тароцци растет без
газообразования, в виде равномерного помутнения с последующим
просветлением среды и образованием осадка. При росте на агаре с кровью
через 24-48 ч отмечаются мелкие росинчатые колонии диаметром 0,5-1,0 мм,
они полусферические, прозрачные, блестящие с ровным краем и узкой зоной
гемолиза вокруг. Чаще гемолиз отсутствует. Старые колонии теряют
113
прозрачность, становятся серыми или белыми с неровными краями. В
глубине сахарного агара с высоким столбиком штаммы, обладающие
подвижностью, образуют колонии-пушинки с уплотненным центром.
Неподвижные штаммы формируют колонии-чечевицы, иногда с отростками.
На мозговой среде на 2-3-й сутки роста начинается почернение, максимум
которого наступает на 7-9-й день.
Биохимические свойства. Этот микроорганизм не ферментирует ни
один из сахаров. Только некоторые штаммы сбраживают глюкозу, кислоту
при этом не обнаруживают, она нейтрализуется аммиаком, образующимся
при протеолизе белков. Обладает высокой протеолитической активностью.
Кусочки нативных мышц, помещенные в жидкую питательную среду с
интенсивно растущей культурой C.histolyticum, подвергаются быстрому
протеолизу. Индол не образуется, сероводород в культурах выделяется в
значительном количестве.
Токсинообразование. На жидких средах Cl.histolyticum образует
сложный термолабильный токсин, в составе которого обнаружено пять
компонентов. Альфа-токсин - летальный, некротический яд. Поражает
центральную нервную систему: при внутривенном его введении гибель
животных наступает при явлениях судорог и конвульсий. Бета-токсин коллагеназа, разрушает нативный и денатурированный коллаген, а также
желатин. Гамма-токсин - протеиназа, активируется цистеином, разрушает
желатин и казеин, на коллаген не действует. Дельта-токсин - эластаза,
протеолитический фермент. Эпсилон-токсин - гемолизин, чувствителен к
действию кислорода. Cl.histolyticum синтезирует также дезоксирибонуклеазу.
Среди токсических компонентов этого микроба преобладают
протеолитические ферменты.
Антигенная структура. Антигены бета-, гамма- и дельта-токсинов
различны и нейтрализуются только гомологическими антисыворотками.
Устойчивость. У Cl.histolyticum она сравнима с другими патогенными
анаэробами - возбудителями газовой гангрены. Однако устойчивость спор
114
может меняться в зависимости от штамма, но обычно они погибают при
кипячении в течение 1 ч.
Патогенность. Самостоятельно вызванная этим микроорганизмом
инфекция встречается исключительно редко. Патогенными бывают только
штаммы в гладкой форме.
Газовая гангрена с участием Cl.histolyticum протекает тяжело, с
явлениями быстрого глубокого распада мягких тканей и часто заканчивается
смертью. При внутримышечной инъекции 0,5-1,0 мл свежей культуры или
токсина в конечность морской свинки отмечаются покраснение кожи, отек,
множественные кровоизлияния, расплавление мышечной и соединительной
тканей.
На месте введения образуется язва, затем расплавление мягких тканей
до костей. Гибель животного наступает через 18-
28 ч, газ и запах
отсутствуют.
В расплавленных мышцах и перитонеальной жидкости
обнаруживаются бактерии. Для выделения культуры лучше всего
производить посев из тканей в месте заражения.
Clostridium sordellii выделил Сорделли в 1922 г. при
заболевании газовой гангреной человека. Этот микроб рассматривают как
патогенный вариант Cl.bifermentans серовара В.
Морфология. Cl.sordellii - полиморфные палочки с закругленными
концами длиной 3-8 и шириной 1,2-1,5 мкм. Бактерии располагаются
изолированно, по 2-3 вместе, редко цепочками. Образует овальные,
центральные или субтерминальные споры, обнаруживаемые в культурах.
Имеет жгутики, перитрих, активно подвижен в молодых культурах. Капсулу
не синтезирует. По Граму красится положительно.
Культивирование. Относится к строгим анаэробам. На среде Китта -
Тароцци в течение 24 ч дает интенсивное помутнение и газ, в старых
культурах часто образуется слизь в виде нитей, культуры издают неприятный
115
гнилостный запах; на кровяном агаре, по Цейсслеру, через 24-48 ч
появляются слабо выпуклые серовато-белые колонии с неровными краями,
окруженные узкой зоной гемолиза. В глубине агара столбиком колонии
имеют форму чечевицы, иногда с выростами по краю.
Биохимические свойства. Ферментирует глюкозу, мальтозу, фруктозу
и не расщепляет лактозу и сахарозу. Синтезирует активные протеазы.
Молоко пептонизирует, разжижает желатин и свернутую сыворотку,
переваривает мясо и яичный белок. Вырабатывает аммиак и сероводород,
индола не образует, нитраты в нитриты не восстанавливает.
Токсинообразование. Вирулентные штаммы
Cl.sordellii вырабатывают высокоактивный термолабильный летальный
некротический токсин, вызывающий желатинозный отек (разрушается при
температуре 60 °С). Этот токсин напоминает альфа-токсин Cl novyi и
нейтрализуется специфической антисывороткой. Синтезирует лецитиназу С,
лизирующую эритроциты мышей, в меньшей степени - кролика и почти не
действует на эритроциты овцы. Имеет общие антигенные субстанции с
лецитиназой Cl.perfringens А. Вырабатывает гиалуронидазу и
кислотолабильный гемолизин типа тста-токсина C.perfringens. Ферментами
патогенности у этого микроба также являются уреаза и фибринолизин.
Патогенность. Этот микроб обнаруживался у крупного рогатого скота
при заболевании анаэробной гемоглобинурией, также при брадзоте и
энтеротоксемии овец.
К экспериментальному заражению чувствительны морские свинки,
кролики, мыши, кошки и голуби. Бульонная культура 48-часового роста при
внутримышечном и подкожном введениях вызывает гибель животных через
24 ч. В месте введения заражаюшего материала развивается подкожный
желатинозный бесцветный или розово-красного цвета отек. Иногда
наблюдаются пузырьки газа, гнилостного запаха нет. Кишечник и желудок
инъецированы и геморрагичны.
116
Патогенез злокачественного отека. В патогенезе газовой инфекции
различают две фазы: инфекционную и токсическую. Инфекционная фаза
характеризуется усиленным размножением микроорганизмов в очаге
поражения и быстрым распространением по всем тканям и органам. Уже
через час микробы обнаруживают в мышцах и во внутренних органах.
Токсическая фаза возникает в результате действия токсинов,
всосавшихся в ткани, и характеризуется появлением в них соответствующих
изменений. Динамика патологического процесса прежде всего определяется
спектром токсических компонентов, синтезируемых клостридиями.
Выхождение пла
змы и форменных элементов крови из сосудов в
окружающие ткани приводит к развитию отека. Из-за наличия в отечной
жидкости токсинов, обладающих некротизирующими и протеолитическими
свойствами, разрушаются соединительная и мышечная ткани, одновременно
в очаге поражения происходит интенсивное газообразование как результат
ферментативного действия клостридий. Сложные деструктивные изменения
тканей (протеолиз и некроз) создают благоприятные условия для быстрого
размножения клостридий и накопления токсина. Параллельно угнетается
фагоцитарная активность лейкоцитов и макрофагов. В итоге интоксикации
поражаются центральная нервная система, дыхательный центр, нарушается
сердечная деятельность и наступает смерть.
Лабораторная диагностика. Материалом для бактериологического
исследования при злокачественном отеке служат тканевой экссудат, кусочки
пораженных мышц, паренхиматозные органы, а от трупов овец, кроме того,
часть сычуга и тонкого кишечника с содержимым (для одновременного
исследования на брадзот и энтеротоксемию). При исследовании материала
проводят микроскопию мазков, посевы на питательные среды, заражение
лабораторных животных.
Мазки окрашивают по Граму и Муромцеву. Наличие в препаратах
большого количества грамположительных палочек служит ориентировочным
признаком при подозрении на клостридиальную инфекцию.
117
Свежий материал пастеровской пипеткой засевают на среду Китта Тароцци, а также в МПБ и на МПА.
Если материал несвежий, то готовят суспензию на физиологическом
растворе, прогревают ее 15-20 мин при температур
е 80 °С с целью
разрушения вегетативных клеток сопутствующих бактерий и проводят
высевы. Одновременно материал засевают на глюкозо-кровяной агар в
чашках. Посевы инкубируют в анаэробных условиях 24-48 ч, после чего
изучают рост на среде Китта-Тароцци и глюкозо-кровяном агаре.
Устанавливают морфологию и подвижность бактерий из культур на среде
Китта - Тароцци.
С жидкой питательной среды для выделения чистой культуры делают
дробные посевы на чашки с глюкозо-кровяным агаром. Наличие характерных
колоний и крупных грамположительных палочек в мазках дает основание для
постановки предварительного микробиологического диагноза. В ряде
случаев возникает необходимость изучить биохимические показатели
выделенной культуры. Сахаролитические свойства определяют путем
посевов на полужидкий агар с углеводами и индикатором, протеолитические
- посевами на молоко, мозговую среду, желатин и свернутую сыворотку.
Диагноз подтверждается биологическим исследованием. С этой целью
производят подкожное или внутримышечное заражение морских свинок
взвесью из патологического материала в дозе 1 мл и наблюдают за ними 7-8
дней. При наличии возбудителей злокачественного отека животные погибают
через 16-48 ч с характерными патологоанатомическими изменениями,
вызываемыми определенным видом анаэроба.
Для определения вида и серовара возбудителя применяют реакцию
нейтрализации с гомологичными антитоксическими сыворотками.
Иммунитет при злокачественном отеке антитоксический.
118
3.6. ВОЗБУДИТЕЛЬ БРАДЗОТА ОВЕЦ
Брадзот - острая неконтагиозная болезнь овец, характеризующаяся
геморрагическим воспалением сычуга и двенадцатиперстной кишки (отек,
геморрагии, иногда некрозы) с образованием газа в пищеварительном тракте.
Болезнь заканчивается гибелью животного.
Распространена во всех странах, где развито овцеводство. Источник
инфекции - больные овцы. Описаны случаи заболевания брадзотом коз и
свиней.
Возбудитель брадзота - Cl.septicum.
В лабораторию для бактериологического исследования направляют
перевязанную часть сычугами двенадцатиперстной кишки с содержимым,
паренхиматозные органы, мышцы, отечную ткань, трубчатую кость.
Пригоден только свежий материал, так как у овец после гибели в кишечнике
происходит быстрое размножение анаэробных бактерий и проникновение их
в органы и ткани; результаты исследования материала от несвежих трупов не
учитывают.
Схема микробиологического диагноза аналогична описанной выше.
3.7. ВОЗБУДИТЕЛИ ИНФЕКЦИОННОЙ АНАЭРОБНОЙ
ЭНТЕРОТОКСЕМИИ
Инфекционная анаэробная энтеротоксемия - болезнь,
характеризующаяся общей токсемией и бактериемией. Поражаются
практически все виды сельскохозяйственных животных.
Встречаются: анаэробная дизентерия ягнят; инфекционная
энтеротоксемия овец; анаэробная энтеротоксемия крупного рогатого скота и
др.
Анаэробная дизентерия ягнят- острая
токсикоинфекция, поражающая новорожденных ягнят в первые пять дней
жизни. Болезнь характеризуется геморрагической энтеротоксемией и
119
сопровождается высокой смертностью. Вызывается сероваром В Cl.
perfringens (Lamb dysentery bacillus)
Материалом для лабораторного исследования служат свежий труп или
перевязанный отрезок пораженного кишечника, части паренхиматозных
органов, брыжеечные лимфоузлы, трубчатая кость и стерильно взятое
содержимое тонкого кишечника.
Лабораторный диагноз ставят на основании данных обнаружения
токсина в содержимом тонкого кишечника при помощи биопробы на белых
мышах или кроликах и выделения чистой культуры.
При обнаружении токсина в фильтрате содержимого кишечника
определяют его серовар в реакции нейтрализации на белых мышах с
антитоксическими сыворотками Cl.perfringens. Реакцию нейтрализации
можно ставить также с выделенной чистой культурой, и прежде всего в том
случае, если в содержимом кишечника не были обнаружены токсины.
Возбудитель инфекционной энтеротоксемии
овец (болезнь «мягкая почка»). Инфекционная энтеротоксемия -
заболевание овец всех возрастов, развивающееся в результате всасывания из
кишечника токсинов, синтезируемых возбудителем. Болезнь может
протекать молниеносно, остро и хронически. При молниеносном течении
болезнь возникает внезапно и животные гибнут быстро. При вскрытии
животных через несколько часов после их гибели обнаруживают характерное
размягчение одной или двух почек.
Вызывается заболевание сероваром D C.perfringens (B.ovitoxicus), реже
- сероваром С. Основным токсическим фактором серовара D является
эпсилон-токсин.
Встречается болезнь во всех странах. Переболевшие и оставшиеся
живыми овцы приобретают иммунитет продолжительностью 7-10 мес.
Возбудители энтеротоксемиикрупного рогатого
скота. Анаэробная энтеротоксемия - остропротекающая тяжелая болезнь
телят, характеризующаяся геморрагическим энтеритом, часто
120
кровоизлияниями на слизистых носовой и ротовой полостей,
выраженнойтоксемией. Чаще поражает новорожденных телят, но может
встречаться у животных до 1,5-2-месячного возраста. Возникает болезнь
спонтанно, без занесения из других хозяйств. Основным резервуаром
сохранения возбудителей служит желудочно-кишечный тракт животных, в
котором они размножаются и выделяются с фекалиями во внешнюю среду.
Энтеротоксемия встречается практически во всех странах с развитым
животноводством.
Возбудителями энтеротоксемии крупного рогатого скота являются
серовары А, В, С, D и Е Cl.perfringens. Особую опасность представляет
серовар А, так как вызывает тяжело протекающую болезнь и массовую
гибель телят. Заболевание может быть вызвано каждым сероваром отдельно,
обнаружены также случаи смешанной инфекции, обусловленной сероварами
А, В, С и D. Серовары С и D обычно вызывают болезнь у телят более
старшего возраста.
Микробиологический диагноз включает обнаружение токсина в
содержимом кишечника, выделение культуры из патологического материала
и определение ее токсичности. При обнаружении токсина ставят реакцию
нейтрализации с антитоксическими сыворотками сероваров А, В, С, D и Е на
белых мышах.