Добавил:
ivanov666
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз:
Предмет:
Файл:Патогенные анаэробы рода Clostridium в ветеринарной медицине. Учебное пособие для студентов ветеринарного факультета.pdf
101
укусам кровососущих насекомых. Иногда отмечается непосредственная
локализация процесса в грудной полости, что вызывает предположение о
возможности пылевого заражения через органы дыхания. С током крови
возбудитель попадает в мышцы и места, наиболее благоприятные для его
развития, - гематомы, размозженные и разорванные ткани, участки некроза.
Первичный очаг инфекционного процесса возникает после короткого
инкубационного периода и имеет тенденцию к бурному развитию. В местах
оседания микробы интенсивно размножаются, выделяют токсин и образуют
газ.
Компоненты токсина подавляют фагоцитоз, вызывают нарушение
целостности кровеносных сосудов и другие повреждения, ведущие к отеку и
некрозу тканей, газы же обусловливают крепитацию образовавшихся
отечных припухлостей.
Продукты распада тканей и токсины возбудителя являются причинами
развития лихорадки, нарушения сердечной деятельности и расстройства
дыхания. Перед гибелью животных резко повышается концентрация
микробов в тканях и отмечается бактериемия. Инфекционный процесс может
протекать и без образования карбункула в виде сепсиса.
Лабораторная диагностика. Материалом для лабораторного диагноза
служат кусочки пораженных мышц, отечный экссудат, кровь, взятые тотчас
после гибели животного. Необходимо помнить, что вскрытие трупов
животных, погибших от эмфизематозного карбункула, недопустимо
(почвенная инфекция). Поэтому кусочки мышц отбирают без полного
вскрытия трупа. Если же труп случайно вскрыт, берут кусочки
паренхиматозных органов.
Исследование проводят по схеме: микроскопия мазков, посевы на
питательные среды в анаэробных и аэробных условиях и заражение
лабораторных животных.
Микроскопия имеет ориентировочное значение. Мазки окрашивают по
Граму и Муромцеву. Cl.chauvoei - грамположительная, полиморфная,
102
спорообразующая, толстая с закругленными краями палочка. Бактерии
располагаются одиночно или парами.
Чистую культуру Cl.chauvoei удается выделить, если посевы проводят
сразу же после гибели животного. Но, как правило, материал бывает сильно
загрязнен посторонней микрофлорой. Поэтому применяют ряд методов
подавления сопутствующей микрофлоры. Материал можно высушить в
термостате, при этом вегетативные клетки гибнут, споры сохраняют
жизнеспособность. Рекомендуется также проводить посев на жидкую
элективную среду с добавлением фенола, кристаллвиолета или азида натрия,
которые ингибируют постороннюю микрофлору. Иногда материал
прогревают при температуре 80 °С в течение 15 мин. Исследуемый материал
засевают пастеровской пипеткой на среду Китта - Тароцци, в МПБ, на МПА
и глюкозо-кровяной агар в чашках (агар Цейсслера), посевы инкубируют в
анаэробных условиях при температуре 37
0
С в течение 24-48 ч. Со среды
Китта - Тароцци для выделения чистой культуры делают дробный посев на
чашки с глюкозо-кровяным агаром. Наличие характерных колоний на агаре и
типичных по морфологии палочек в препаратах из колоний дают основание
для постановки предварительного диагноза.
В необходимых случаях изучают сахаролитические и
протеолитические свойства культуры. Для окончательного диагноза
необходима биопроба.
Вирулентностью обладают только свежевыделенные культуры.
У крупного рогатого скота и овец естественного иммунитета нет, но с
возрастом восприимчивость их к данному заболеванию снижается. В
результате переболевания животные приобретают длительный активный
иммунитет. По своей природе иммунитет при эмфизематозном карбункуле
антитоксический и антимикробный.
103
3.5. ВОЗБУДИТЕЛИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННОГО ОТЕКА
Злокачественный отек (газовая инфекция, раневой газовый отек,
газовая гангрена) - острая нсконтагиозная раневая инфекция, вызываемая
группой патогенных клостридий.
Заболевание характеризуется быстро распространяющимся
болезненным отеком мягких тканей, их разрушением, образованием в
пораженных тканях газа и интоксикацией организма. Встречается
злокачественный отек в виде спорадических случаев повсеместно. Обычно
болезнь развивается после обширных и глубоко проникающих ранений.
Поражает животных и человека. У крупного рогатого скота злокачественный
отек может наблюдаться после отелов, особенно тяжелых,
сопровождающихся повреждениями и ранениями родовых путей, а также
после абортов.
Злокачественный отек - заболевание полимикробной этиологии. В
развитии инфекционного процесса основную роль играют следующие виды
бактерий из рода клостридиум: Cl.septicum, Cl.perfringeris, Cl. novji,
Cl.histolyticum и Cl.sordcllii.
У сельскохозяйственных животных возбудителем болезни чаще
является Cl.scpticum, нередко наблюдается смешанная инфекция. У овец
возбудителем может быть Cl.chauvoei.
В пораженных тканях иногда обнаруживают протсолитическую
анаэробную бактерию Cl.sporogencs, которая способствует гнилостному
распаду тканей, в результате чего осложняется течение болезни.
Clostridium septicum ( Vibrion septique) - анаэробная
бактерия, выделена из трупа коровы Пастером и Жубертом в 1877 г.
Морфология. Cl.septicum - полиморфная, грамположительная,
бескапсульная, подвижная палочка (перитрих), длиной 2-10 мкм и шириной
0,8-2 мкм. Споры овальной формы, располагаются центрально или
субтерминально, образуются в культурах и трупе. В мазках из культур
находят отдельные палочки, цепочки и нити. Микробные клетки из старых
104
культур грамотрицательные и плохо окрашиваются спирто-водными
растворами анилиновых красителей. В препаратах-отпечатках из серозных
покровов печени и других органов обнаруживают длинные нити (рис.11).
Рис.11. Изолированные палочки с закругленными концами. В мазках-отпечатках
образуют нити
Культивирование. Cl.septicum - строгий анаэроб. Оптимальная
температура 37 °С, рН 7,6. На среде Китта - Тароцци растет интенсивно,
через 16-24 ч наступает равномерное помутнение среды с газообразованием.
Через 48 ч микробы оседают на дно и бульон просветляется. При росте в
мозговой среде почернения не наступает, но образуется газ. В агаре
столбиком растет в виде нежных хлопьеподобных колоний диаметром 1-2 мм
с уплотненным центром и радиально отходящими перепутанными нитями, а
на поверхности кровяного агара с глюкозой - в виде кружевных сплетений
нитей-арабесок с зоной гемолиза (рис.12).
105
Рис. 12 . На сахарном кровяном МПА – сплошная нежная пленка, зона гемолиза
Молоко свертывается медленно (через 3-5 дней), пептонизации сгустка
казеина нет.
Биохимические свойства. Ферментирует с образованием кислоты и
газа глюкозу, лактозу, галактозу, мальтозу, левулезу и салицин, не разлагает
глицерин и маннит. Очень редко разлагает сахарозу.
Токсинообразование. Cl.septicum синтезирует высокоактивный
экзотоксин сложного состава. Токсин может быть выделен из фильтрата
культур на бульоне Мартена (рН 7,6-7,8), на средах из кислотного и
ферментативного гидролизата казеина.
В составе токсина обнаруживают четыре растворимых компонента: α,
β, у и д. Альфа-токсин - кислородостабильный летальный, некротический и
гемолитический фактор, скорее всего фермент, неотносящийся к
лецитиназам. Гемолизирует эритроциты овцы в течение 60 мин при условии,
если в растворе нет сахарозы. Бета-токсин - кислородолабильный гемолизин.
Является ферментом - дезоксирибонуклеазой. Вызывает быстрый гемолиз.
Нейтрализуется также антисывороткой Cl.perfringens. Гамма-токсин -
фермент гиалуронидаза. Дельта-токсин - кислородолабильный гемолизин,
лизирующий эритроциты барана, лошади и человека. В культуральных
фильтратах этого микроба кроме указанных токсических компонентов
106
обнаружены еще фибринолизин и коллагеназа, которые могут играть
некоторую роль в деструктивных процессах при газовой гангрене.
Антигенная структура. В составе Cl.septicum выделены О- и Нантигены. Установлено, что имеется общность споровых антигенов у
Cl.septicum и Cl.chauvoei, но они могут четко дифференцироваться по Оантигену. С помощью Н-агглютинации внутри вида Cl.septicum выявлено 6
сероваров.
Устойчивость. Вегетативные формы микроба быстро гибнут под
влиянием различных факторов внешней среды, они довольно чувствительны
к кислороду. Споры относительно устойчивы и выдерживают кипячение в
течение 2-15 мин. В почве этот микроб может вегетировать и сохраняться
годами.
Патогенность. Данный микроб вызывает газовую гангрену у
животных и человека, а также брадзот овец. К заражению чувствительны
лошади, крупный рогатый скот, овцы, свиньи. Патогенен для всех
лабораторных животных, но в основном используют морских свинок.
Животные, зараженные подкожно или внутримышечно, погибают через 8-20
ч с признаками газового отека. На месте инъекции у них легко снимается
шерсть, происходит выпотевание красноватой жидкости. При вскрытии кожа
легко отделяется, подкожный слой красного цвета, мышцы отечны,
геморрагично инфильтрированы и пропитаны пузырьками газа. В грудной и
брюшной полостях скапливается значительное количество жидкости.
Кишечник вздут.
Культуру легко удается изолировать из крови сердца и из печени, где
обычно имеются очаги размножения микроба.
Clostridium perfringens (Cl. welchii) открыли и описали в
1892 г. Уэлч и Неттал. Широко распространен в природе и встречается
повсеместно, особенно большое количество его обнаруживают в почве,
богатой гумусом. Патогенные штаммы микроба выделяются из почвы
главным образом весной в местах, где почва загрязняется фекалиями
107
животных. Основной резервуар сохранения патогенных штаммов - здоровые
животные, в желудочно-кишечном тракте которых размножается
Cl.perfringens и выделяется с фекалиями во внешнюю среду. Так происходит
загрязнение кормов, пастбищ, почвы вначале вегетативными формами, а
затем спорами: микроб быстро спорулирует и длительное время сохраняется.
Cl.perfringens - самый нетребовательный анаэроб, очень активный в
биохимическом отношении и весьма патогенный.
Микробиологическая характеристика бактерии смотрите выше по
тексту.
Рис.13. Толстые, короткие палочки, располагаются одиночно
Рис. 14. На сахарном кровяном МПА –мелкие колонии, вокруг колоний гемолиз
108
Антигенная структура. На основании антигенного состава токсических факторов различают шесть сероваров C.perfringens: А, В, С, D, Е и
F.
Серовар A (Cl welchii) вызывает газовую гангрену (злокачественный
отек) у людей и животных, пищевые токсикоинфекции у людей, является
возбудителем энтеротоксемии телят и свиней, может также вызывать
некротический мастит овец, коз и крупного рогатого скота.
Вырабатывает альфа-, тета- и каппа-токсины.
Серовар В (Lamb dysentery bacillus) вызывает анаэробную дезинтерию
(некротический энтерит) ягнят, козлят, телят, поросят, жеребят и
цыплят. В числе токсических компонентов обнаруживают альфа-, бета-,
эпсилон-токсины, а также протеиназу и гиалуронидазу.
Серовар С (B.paludis) вызывает геморрагическую энтеротоксемию
овец, иногда энтеротоксемию телят, ягнят, поросят, коз и верблюдов.
Синтезирует альфа- и бета-токсины.
Серовар D (B.ovitoxicus) является возбудителем энтеротоксемии овец
(«мягкая почка»), выделяется также при энтеротоксемии коз, телят и при
«травяной болезни» у лошадей. Обладает альфа- и эпсилон-токсинами.
Серовар Е (Cl.perfringens typ Е) выделяется при энтеротоксемии
телят и ягнят. Имеет альфа- и йота-токсины, а также активные
коллагеназу и протеиназу.
Серовар F (B.enterotoxicus) описан как возбудитель некротического
энтерита людей, выделяет альфа- и бета-токсины.
Устойчивость. Вегетативные клетки малоустойчивы,
резистентность же спор, напротив, очень высокая. Имеются данные, что
споры различных штаммов серовара А этого вида микроба выдерживают
температуру 100 "С в течение 1-3 ч.
Патогенность. Все серовары Cl.perfringens способны вызывать
газовую гангрену у человека и животных. Отдельные варианты являются
возбудителями специфических инфекционных процессов у животных
109
различных видов: анаэробной дизентерии ягнят, энтеротоксемии овец,
телят и т. д.
В экспериментальных условиях весьма чувствительны к заражению
голуби, воробьи, морские свинки, более устойчивы кролики, белые мыши,
крысы.
Clostridium novji (Cl. oedematiens) выделил Нови в 1883
г. из трупа морской свинки, его этиологическую роль как возбудителя
газовой гангрены установили в 1915 г. Вейнберг и Сеген.
Морфология. Крупная полиморфная прямая или слегка изогнутая с
закругленными, иногда обрубленными краями палочка длиной 4-8 и
шириной 1-1,5 мкм; бактерии могут располагаться короткими цепочками по
3-5 клеток и более. Капсул не образует. В молодых культурах палочки
подвижны (перитрихи), в присутствии кислорода подвижность быстро
теряется. Образует круглые или овальные субтерминальные споры, которые
обычно обнаруживаются через 24 ч роста культуры (рис.15).
Рис.15.
Крупные палочки, располагаются одиночно
Хорошо окрашиваются спиртоводными растворами обычных
анилиновых красок. Молодые вегетативные клетки грамположительные, из
старых культур - грамотрицательные.
Культивирование. Cl.novyi - один из строгих анаэробов. Оптимальная
температура 37 °С, рН 7,8. На среде Китта - Тароцци дает обильный рост со
110
сплошным помутнением и слабым газообразованием. Культуры издают
неприятный запах. Для получения их нередко требуется около 48 ч
инкубирования. В последующем бульон просветляется и на дне образуется
хлопьевидный осадок, в случае обильного раннего роста микробы уже через
24 ч оседают на дно. На кровяном агаре с глюкозой растет в виде
шероховатых серого цвета колоний с неправильными бахромчатыми краями
и отростками, образующими на периферии колоний параллельные петли.
Колонии окружены зоной гемолиза. В глубине столбика агара с глюкозой
колонии имеют форму линзы, комочков ваты, снежных хлопьев, часто с
уплотненным желтоватым или коричневатым центром, окруженным короной
спутанных нитей. Через 36-48 ч с момента посева можно наблюдать разрыв
агара за счет образования газов.
Мозговая среда не чернеет. Молоко свертывается медленно с
выпадением мелких хлопьев, пептонизация не наступает.
Биохимические свойства. Сахаролитические свойства выражены
слабо и различны у отдельных сероваров. Cl.novyi сероваров А, В, и С
ферментирует глюкозу, фруктозу и мальтозу, а серовар D только глюкозу;
глицерин разлагают все серовары, кроме некоторых штаммов серовара В.
Способность разлагать углеводы изменяется в зависимости от штамма.
Протеолитические свойства выражены слабо.
Токсинообразование. Cl.novyi в организме и при росте на элективных
питательных средах синтезирует и выделяет очень активный и сложный
токсин, в составе которого обнаружено восемь компонентов. К числу лучше
изученных относят альфа-, бета-, гамма- и дельта-токсины. Альфа-токсин термолабильный, летальный, некротический, капиллярный яд. Вызывает
некроз тканей, желатинозный отек и гибель животных. Бета-токсин фосфолипаза С (лецитиназа), обладает некротическим, гемолитическим и
летальным действием. Гамма-токсин - фосфолипаза D; некроти-зирующий и
гемолитический факторы. Дельта-токсин - кислородолабильный гемолизин.