Добавил:
ivanov666
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз:
Предмет:
Файл:Методы исследования свойств зернопродуктов и вторичного сырья зерноперерабатывающих предприятий. Лабораторный практикум. Учебное пособие
.pdf
Расчет состава метиловых (этиловых) эфиров жирных кислот
i i i
S h a
100
i
S
i
S
масла проводят методом внутренней нормализации.
Площадь пика компонента Siмм2, вычисляют по формуле
где hi- высота пика, мм; аi- ширина, измеренная на половине, мм.
Результат измерения высоты пика записывают до первого
десятичного знака.
Сумму площадей всех пиков на хроматограмме
Siпринимают
за 100 %.
Массовую долю каждой
кислоты масла Xi, %, вычисляют по
формуле
S
i
X
i
,
где Si- площадь пика метилового (этилового) эфира, мм2;
-
сумма площадей всех пиков на хроматограмме, мм2.
Вычисление проводят до второго десятичного знака с последующим округлением результата до первого десятичного знака.
За окончательный результат измерений принимают среднее
арифметическое значение результатов двух последовательных измерений.
Вопросы для самоконтроля
1. На чем основан качественный и количественный анализ
хроматографии?
2. В чем состоит суть подготовки пробы для определения
жирно
-кислотного состава на газожидкостном хроматографе?
3. Описать принцип работы основных видов детекторов,
применяемых в газожидкостных и газовых хроматографах.
4. Каков принцип работы газового хроматографа?
5. Что позволяет определить хроматограмма?
71
Лабораторная работа № 15.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУППОВОГО СОСТАВА ЛИПИДОВ
МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Цель работы: определить групповой состав липидов в семенах
масличных культур.
Материалы, реактивы и оборудование: система растворителей (петролейный эфир
слота в соотношении 90:10:1); диэтиловый эфир,
форно
-молибденовой кислоты в этаноле с массовой долей 96 %,
- диэтиловый эфир - ледяная уксусная ки-
5 % раствор фос-
лезвие, стеклянный капилляр; хроматографическая камера; сушильный шкаф; пластины
silufol; пипетка; пульверизатор.
Краткие теоретические сведения
При хроматографическом разделении липидов из тонкого слоя
одного семени подсолнечника производится прямая экстракция липидов непосредственно на хроматографической пластине. Этим
достигается минимальное воздействие на липиды и возможность
исследовать групповой состав отдельных частей семян. Разделение
липидов на группы производится в тонком слое адсорбента, нанесенного на пластинку, в токе восходящей смеси растворителей.
Дальнейшее проявление пятен разделенных на группы липидов
производится фосфорно
-молибденовой кислотой или парами йода.
Идентификацию отдельных групп липидов проводят по со
поставлению с местонахождением индивидуально чистых веществ-свидетелей или метчиков, нанесенных на линию старта параллельно исследуемым образцам. Другим способом идентификации
является сопоставление рассчитываемых величин
справочными данными. Величина
Rf есть отношение скорости дви-
Rf с известными
жения компонента к скорости движения растворителя.
-
72
Абсолютное значение величины Rf зависит от температуры,
типа камеры, давления и т.д., но последовательность разделенных
групп остается постоянной.
Методика выполнения работы
Кружок ткани поместить на предварительно активированную
при 105 °С пластину
края пластинки). Затем на образец пипеткой нанести 3
silufol на линию старта (1,0-1,5 см от нижнего
-5 капель ди-
этилового эфира. Пластинку опустить наклонно в предварительно
насыщенную парами растворителей хроматографическую камеру и
быстро закрыть ее крышкой. По перемещении фронта растворителя
вверх на 10
-15 см (обычно 30-40 мин) пластинку извлечь из камеры,
поместить под тягу до исчезновения запаха растворителя.
Из пульверизатора нанести на пластинку спиртовой раствор
фосфорно
-молибденовой кислоты, поместить ее в сушильный шкаф
при температуре 105 °С и высушить до проявления пятен липидных
соединений.
Рассчитать
величины Rf для проявляющихся пластин и иден-
тифицировать их:
Rf = а / b,
где а - расстояние от линии старта до центра; b - расстояние от линии
старта до линии фронта, см.
По рассчитанным величинам
Rf проводят идентификацию
разделенных групп липидов. Для различных групп растительных
липидов величины
Rf имеют следующие значения (для данной сис-
темы растворителей):
Углеводороды, каротиноиды, эфиры стеринов …… 1-0,9
Воски ………………………………………………….. 0,9
Триглицериды ………………………………………… 0,3-0,4
α-Токоферолы ………………………………………… 0,19
73
Свободные жирные кислоты ……………………………… 0,18
,
( ...
n
S S S
( ...
n
S S S
Высшие алифатические спирты ………………………….. 0,15
Стерины …………………………………………………….. 0,10
Диглицериды ……………………………………………….. 0,08
Моноглицериды, фосфолипиды …………………………… 0,00
Для количественного расчета концентраций групп липидов
проводят денситометрическое определение.
Для этого необходимо изучить инструкцию по использованию прибора. На предметном столике расположить хроматографическую пластинку с разделенными и проявленными пятнами липидов и провести сканирование. Измерить высоту и ширину оснований
пиков
-треугольников, полученных на диаграммной бумаге, рассчи-
тать их площадь (мм
2
). Концентрация каждого компонента, %, оп-
ределяется по формуле
100
S
n
1 2
K
n
где Sn- площадь пика данного компонента, мм ;
сумма площадей всех пиков, мм2.
74
1 2
Вопросы для самоконтроля
1. Какие существуют методы выделения липидов?
2. Для чего используется денситометрия?
3. Какие существуют сорбенты для ТСХ?
4. Каковы условия разделения на пластинке?
-
Лабораторная работа № 16.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ РТУТИ МЕТОДОМ
БЕСПЛАМЕННОЙ АТОМНОЙ АБСОРБЦИИ
Цель работы: освоить метод определения ртути в пищевых
продуктах.
Материалы, реактивы и оборудование: анализатор ртути
"Юлия
-2"; баня водяная; весы лабораторные; колбы мерные; колбы
конические; воронки; цилиндры мерные; пипетки; стаканы; фильтры
обеззоленные "синяя лента"; этанол; кислота азотная концентрированная; кислота серная концентрированная; кислота соляная концентрированная; хлорид олова
(II); раствор соляной кислоты с мас-
совой долей 6 %; калия перманганат; дихромат калия.
Краткие теоретические сведения
Предлагаемый метод основан на мокром кислотном озолении
пробы с последующим восстановлением ртути до металлической
формы и количественном определении методом беспламенной
атомной абсорбции на отечественном ртутном анализаторе типа
"Юлия
-2".
В основу работы анализатора "Юлия-2" положен непламенный атомный абсорбционный метод, основанный на измерении
поглощения излучения с длиной волны
λ = 253,7 нм атомами ртути,
выдеяемыми из анализируемой пробы после восстановления ртути
до элементарного состояния.
При подаче питания на лампу
-излучатель и фотоэлемент
(рис. 9, 10) при выключенной газодинамической системе преобразователя (т. е. при прохождении через кювету полной энергии излучения лампы) величина фототока через измерительный прибор
максимальная. При наличии ртути в анализируемой пробе и после
восстановления ее до элементарного состояния, микропроцессором
подается поток воздуха
где атомы ртути поглощают излучение лампы (
, и ртуть из барботера направляется в кювету,
=253,7 нм),
75
в результате чего величина электрического тока в цепи фотоэле-
шторка
о-
с
мента изменяется пропорционально концентрации ртути в воздухе,
проходящем через кювету. Постепенно, по мере выдувания паров
ртути из анализируемой пробы, показания измерительного прибора
приходят в исходное состояние.
Метод атомно
-абсорбционного анализа - относительный
метод и поэтому обычно требует градуировки прибора. Градуировка
производится путем предварительного измерения концентрации
ртути в нескольких растворах с известной концентрацией определяемого элемента.
Рис. 9. Рабочее положение анализатора в комплекте с иономером: 1 - барботер; 2
- пробирка; 3 - пробирка с барботером в рабочем положении
Функциональная схема анализатора включает в себя опти-
ческую и газодинамическую схемы (рис. 10).
Рис. 10. Функциональная схема преобразователя: 1 - кювета; 2 лампы; 3 - лампа; 4 - фотоэлемент; 5 - пробирка с барботером для погл
щения ртути; 6, 7, 8 - воздуховоды; 9 - микрокомпрессор; 10 - пробирка
барботером для пробы; 11 - штуцер микрокомпрессора
76
Использование в анализаторе фотоэлемента Ф-29,
имеющего максимум спектральной чувствительности в области 220
-260 нм, и разрядной ртутной лампы низкого давления, в которой 90 % энергии излучения приходится на
спектральную линию
λ - 253,7 нм, позволило максимально
упростить оптическую схему и исключить монохроматор.
Газодинамическая схема обеспечивает выделение атомов
ртути из анализируемой пробы и прохождение их через кювету,
для чего применяется поток воздуха, получаемый от встроенного
микропроцессора с регулируемой производительностью.
Подготовка анализатора к работе
1.
Нажать кнопку включения сети на анализаторе, при этом
.
должен засветиться индикатор включения прибора (см. рис. 9).
Включить измерительный блок (иономер).
2. Зажечь лампу анализатора, для чего кратковременно
(1 с) несколько раз нажать кнопку запуска лампы. Открыть
шторку и по свечению в кювете убедиться в загорании лампы.
3. Закрыть шторку и проверить на измерительном приборе
установку нуля (для иономера проверку установки нуля производить в диапазоне «
4.
Открыть шторку и вращением ручки ГРУБО анализа-
-1 -19» предварительно нажав кнопку mV).
тора установить на цифровом табло измерительного блока цифру
в интервале 50,0
течение
30 мин (на иономере установит стрелку прибора около
- 60,0, после чего дать прогреться приборам в
середины основной шкалы).
5. Включить микропроцессор соответствующей кнопкой,
при этом должен засветиться индикатор включения микропроцессора. Проверить герметичность газодинамической системы
анализатора. Для этого ручку "МИНИМ.
-МАКС." на передней
панели установить в крайнее левое положение, в пробирки с
барботерами налить по 3 см
3
воды. Пережать воздуховод 8. После
пережатия должно полностью прекратиться барботирование в
пробирке для пробы, что свидетельствует о герметичности в га-
77
зодинамической системе. Затем выключить микропроцессор и
вылить воду из пробирок с барботерами.
6. Ручками ГРУБО и ТОЧНО анализатора установить на
цифровом табло измерительного блока цифру 90,0, что соответствует 90 относительным единицам пропускания через стеклянную кювету спектральной линии ртути (при работе с иономером
нажать клавишу «4
-9» иономера и при нажатой клавише mV
ручками ГРУБО и ТОЧНО установить стрелку показывающего
прибора на цифру 100 по верхней шкале. При работе в диапазоне
«4-9» оцифровка «0-100» верхней шкалы иономера соответствует
диапазону 40
-90 относительных единиц пропускания через стек-
лянную кювету энергии спектральной линии ртути).
7. Поместить в пробирку с барботером для поглощения ртути
3
раствора с массовой долей перманганата калия 5 %, а в другую
5 см
пробирку с барботером 2 см
3
анализируемой пробы и 0,3 см3рас-
твора хлорида олова.
8. Ручку МИНИМ.
-МАКС. на панели анализатора установить в крайнее левое положение и включить микропроцессор.
Снимать показания с цифрового табло (при работе с иономером
снимаем показания в точке максимального отклонения стрелки от
точки 100)
. После окончания измерений поместить барботер из
пробирки с пробой в пустую пробирку и продуть газодинамическую систему для установления первоначальных показаний.
9. Вычислить поглощение в относительных единицах с
учетом результата измерения для холостой пробы
Методика выполнения работы
Из основного стандартного раствора готовят рабочий
раствор с концентрацией ртути 1 мкг/см
3
. Затем готовят растворы
с концентрацией 0,0015, 0,0025, 0,004 и 0,005 мкг/см
78
3
, производя
разбавление соответственно 1,5; 2,5; 4 и 5 см3рабочего раствора в
мерных колбах вместимостью 1 дм
3
.
В пробирку для определения ртути вносят по 1 см3приго-
товленных растворов. Добавляют дистиллированную воду до
3
объёма 2,7 см
и 0,3 см3раствора хлорида олова. Немедленно
вводят в склянку барботер. Снимают показания иономера.
Градуировочный график строят, откладывая по оси абсцисс массу ртути в мкг, по оси ординат пропускание, выраженное
в % от полной шкалы в диапазоне
4 - 9 иономера (Т9= Т
хол
- Тпр).
Для приготовления раствора хлорида олова 1,8 хлорида
олова 2
- водного помещают в мерную пробирку вместимостью 25 см3и доводят до метки раствором с массовой долей
соляной кислоты 6 %, нагревают. Раствор продувают с помощью
микропроцессора прибора до отрицательной реакции на ртуть.
Для приготовления раствора для поглощения отработанной ртути 5 г перманганата калия растворяют в 94,5 см
лированной воды и добавляют 0,5 см
3
концентрированной соляной
3
дистил-
кислоты. Для деструкции образца пищевого продукта в коническую колбу (вместимостью 500 см' для массы навески 5 г и 750 см
для массы навески свыше 5 г) помещают навеску и равномерно
распределяют по дну колбы. Последовательно вносят этанол, воду, азотную кислоту в соответствии со схемой минерализации (для
продуктов переработки зерна).
Колбу с продуктом закрывают воронкой диаметром 25 мм,
содержимое перемешивают и оставляют на ночь. На следующий
день осторожно по каплям через воронку при помешивании добавляют в пробу серную кислоту из стакана вместимостью 50 см
3
не допуская бурного выделения окислов азота, с которыми возможны потери ртути. После добавления серной кислоты колбу
оставляют в вытяжном шкафу при комнатной температуре до
полного прекращения выделения бурых паров окислов азота. Затем колбу ставят на горячую водяную баню и проводят нагрева-
3
,
79
ние. Добавляют 30 см3кипящей дистиллированной воды и вы-
ан хол 1
( )
a а V
держивают на водяной бане при температуре кипения 15
-20 мин.
Горячий деструктат фильтруют в цилиндр вместимостью
100 см3через увлажненный водой фильтр. Колбу из-под деструктата и фильтр несколько раз промывают кипящей дистиллированной водой. Объём деструктата и промывных вод доводят до
100 см
3
. Перед измерением деструктат тщательно перемешивают.
При необходимости деструктат для последующих определений
ртути хранят сутки.
Для проведения анализа 1 см
бирку для определения ртути, добавляют 1,7 см
раствора и
0,3 см3раствора хлорида олова. Немедленно вводят в
3
деструктата вносят в про-
3
разбавляющего
пробирку барботер и регистрируют максимальное отклонение
стрелки иономера. При сильном пенообразовании в измерительную пробирку перед добавлением раствора двухлористого олова
вносят каплю силиконового или вазелинового масла.
Содержание ртути в пробе (мкг) находят по градуировочному графику. Массовую долю ртути
С, %, в продукте рассчиты-
вают по формуле
C
M V
где аан- масса ртути в анализируемом объёме, мкг; а
ртути в холостом опыте, мкг;
V1- общий объём деструктата, см3;
,
2
- масса
хол
V2- аликватный объём деструктата, см3; М - масса образца, взятая
для деструкции, г.
Вопросы для самоконтроля
1. На чем основан метод беспламенной атомной абсорбции?
2. Рассказать о принципиальной схеме прибора "Юлия -2".
80
Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]