Производственный контроль предприятий отрасли. Лабораторный практикум. Учебное пособие

МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РФ

ФГБОУ ВО «ВОРОНЕЖСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ

УНИВЕРСИТЕТ ИНЖЕНЕРНЫХ ТЕХНОЛОГИЙ»

О.Ю. МАЛЬЦЕВА, О.Л. МЕЩЕРЯКОВА, О.С. КОРНЕЕВА, Г.П. ШУВАЕВА, А.Е.ЧУСОВА, Т.В. СВИРИДОВА

ПРОИЗВОДСТВЕННЫЙ КОНТРОЛЬ ПРЕДПРИЯТИЙ ОТРАСЛИ

Утверждено редакционно-издательским советом университета

в качестве учебного пособия

ВОРОНЕЖ

2016

1

УДК 658.513

ББК Л 80-7

П80

Научный редактор профессор О.С. КОРНЕЕВА

Р е ц е н з е н т ы:

кафедра биологии и защиты растений Воронежского государственного аграрного университета;

ген. директор В.А. АФАНАСЬЕВ (Воронежский научно-исследовательский институт

комбикормовой промышленности)

Печатается по решению редакционно-издательского совета

Воронежского государственного университета инженерных технологий

Производственный контроль предприятий отрасли. Лабора-

П80 торный практикум [Текст] : учебное пособие / О.Ю. Мальцева, О.Л. Мещерякова, О.С. Корнеева [и др.]; Воронеж. гос. ун-т инж. технол. – Воронеж : ВГУИТ, 2016. – 96 с.

ISBN 978-5-00032-211-6

Учебное пособие разработано в соответствии с требованиями ФГОС ВО подготовки выпускников по направлению 19.03.01 – «Биотехнология». Оно предназначено для закрепления теоретических знаний дисциплины«Производственный контроль на предприятиях отрасли», относящейся к блоку Б1 «Дисциплины» . Изложены методики проведения лабораторных работ по производственному контролю предприятий биотехнологической отрасли.

Оригинал-макет данного издания является собственностью Воронежского государственного университета инженерных технологий, его репродуцирование (воспроизведение) любым способом без согласия университета запрещается.

2

От авторов

Производственный контроль на предприятии предполагает соблюдение установленных санитарных правил и норм, а также надлежащее осуществление профилактических мероприятий са- нитарно-противоэпидемиологического характера. Он проводится

сцелью обеспечения безопасности человека и окружающей среды. Производственный контроль реализуется с помощью проведения ряда лабораторных исследований, направленных на изучение факторов производственной среды.

Знания по этой дисциплине нужны непосредственно инже- нерам-биотехнологам при работе на биотехнологическом производстве.

Внастоящее время нет ни одной отрасли, которая не подлежала бы обязательному контролю, именно от таких мер зависит безопасность и здоровье людей, связанных тем или иным образом

спроизводством. К числу биотехнологических производственных предприятий, подлежащих обязательному контролю, относятся организации пищевого, ветеринарного, медицинского и фармацевтического профиля, осуществляющие изготовление биологически активных веществ, биопрепаратов, лекарственных средств, пищевых и других продуктов и препаратов.

Взадачи курса «Производственный контроль предприятий отрасли» входит ознакомление студентов с многообразием методов производственного контроля поступающего сырья, биотехнологических процессов, способов контроля производства, необходимых для выполнения санитарных правил и норм, максимально обеспечивающих безвредность и безопасность для человека и среды обитания со стороны производства; изучение факторов производственной среды: физических (температура, влажность, вибрация, освещение и другие), химических и биологических; изучение научно-технической информации, выполнение литературного и патентного поиска по дисциплине; использование полученных знаний и профессиональных навыков для анализа информации; подготовка данных и составление отчетов, обзоров, научных публикаций.

3

Лабораторная работа № 1.

Санитарно-гигиенический контроль условий биотехнологического производства

Цель работы: освоить методы санитарно-гигиенического контроля условий биотехнологического производства

Реактивы и материалы: среда Кода, 2 см3 пептонной воды (pH 7,0), 10 см3 стерильной селенитовой среды, среда Плоскирева, среда Клиглера, 0,45 г калия дигидрофосфата(KH2PO4), 5,34 г натрия гидрофосфата безводного, 4 г натрия гидроселенита (NaHSeO3 ) без примеси теллура, 5 г пептона, 7 г натрия гидрофосфата безводного, 3 г натрия дигидрофосфата безводного (NaH2PO4), 4 г лактозы, среда Эндо.

Теоретические сведения

Санитарно-гигиенический контроль условий производства на предприятиях осуществляется общегосударственной и ведомственными службами.

Государственный санитарный надзор осуществляется сани- тарно-эпидемиологической службой (СЭС), Россельхознадзором, Роспотребнадзором в форме предупредительного и текущего надзора за выполнением установленных для предприятий санитарногигиенических требований.

Органы и учреждения государственного санитарного надзора наделены широкими полномочиями. Распоряжения и указания представителей санитарной службы являются обязательными для администрации предприятия. Их невыполнение несет за собой административную ответственность руководителей предприятий, цехов и отделов, отдельных работников.

Внутриведомственный санитарный контроль осуществляют ведомственная санитарная служба и заводская лаборатория. Они контролируют выполнение требований СанПиНа для предприятий, регулярно следят за санитарным состоянием производства, за профилактическими обследованиями работников цехов и -со

4

блюдением ими правил личной гигиены. Результаты проведения санитарно-гигиенического контроля фиксируются в специальном журнале.

Проводятся следующие мероприятия.

1.Оценка санитарного состояния воздуха производственных помещений: общей бактериальной обсемененности(КМАФАнМ или ОМЧ – количество мезофильных аэробных и факуль-

тативно-анаэробных микроорганизмов, способных образовывать колонии на питательном агаре при 37 оС в течение 24 ч) и содержания санитарно-показательных микроорганизмов – гемолитических стрептококков и стафилококков.

2.Оценка санитарного состояния воды: общее микробное число воды (КМАФАнМ или ОМЧ).

3.Контроль оборудования, трубопроводов, посуды, инвентаря, вспомогательных и упаковочных материалов, рук работников.

Ход работы

1. Контроль оборудования, трубопроводов, посуды, инвентаря, вспомогательных и упаковочных материалов, рук работ-

ников (на БГКП). Проводят непосредственно после мойки, дезинфекции и пропаривания перед началом работы.

Для проведения исследования готовят ватные или марлевые тампоны, которые закрепляют на деревянном или металлическом стержне и помещают в пробирки с 10 см3 воды. Пробирки с тампонами стерилизуют в автоклаве при 0,1 МПа в течение 2030 мин. Смывы с крупного оборудования и аппаратов берут с помощью нержавеющих металлических трафаретов с вырезанной серединой (площадь выреза 10, 25 или 100 см3). Перед взятием пробы трафарет смачивают спиртом, обжигают и накладывают на исследуемую поверхность. Ограниченную поверхность промывают смоченным тампоном, затем тампон погружают в пробирку с водой и содержимое хорошо перемешивают. В смывной воде

определяют общую бактериальную обсемененность и наличие кишечной палочки (путем посева на МПА и среду Кесслера соответственно). В смывах с хорошо вымытого оборудования общее количество микроорганизмов в смывной воде не должно превы-

5

шать их содержания в чистой воде, поступающей на мойку. Кишечные палочки должны в смыве отсутствовать. Количество слизеобразующих бактерий должно быть не более0-5 ед. в 1 см3 смыва.

Наличие кишечной палочки можно определить, используя среду Кода. В этом случае тампоном, смоченным в среде Кода, промывают исследуемую поверхность. Далее тампон погружают в среду, а пробирку помещают в термостат с температурой 42 оС на 18-24 ч. О наличии кишечной палочки судят по изменению цвета среды с зеленого до желтого.

2. Исследование смывов с поверхности помещений и обору-

дования на Salmonella. В производственных лабораториях бактериологическое исследование микробной обсемененности поверхностей помещений и оборудования проводится с целью проверки эффективности их дезинфекции и направлено на обнаружение общих и термотолерантных колиформных бактерий.

Исследование проводят перед работой методом смыва, не реже одного раза в месяц. Смывы берут с поверхности рабочих столов на каждом рабочем месте, с дверных ручек, наружных деталей приборов, со стен бокса.

Микробиологические исследования – это целый комплекс лабораторных анализов. Количество и кратность проведения определяется программой производственного контроля. Смывы в помещениях точно определяют наличие патогенных и не патогенных микроорганизмов, таких, как:

Escherichia coli – (кишечная палочка); Staphylococcus aureus – (стафилококк);

Salmonella – (сальмонеллез).

Отбор проб смывов осуществляют стерильными ватными или ватно-марлевыми тампонами. Тампоны монтируют на деревянной палочке или проволоке, пропущенной через пробку, помещают в пробирку и стерилизуют30 мин. при температуре 120 °С. Затем в каждую пробирку наливают 2 см3 предварительной среды обогащения - пептонной воды pH 7,0. Непосредственно перед взятием смыва тампон увлажняют, наклоняя пробирку, излишек влаги отжимают о стенку пробирки.

6

Смывы берут подготовленным тампоном с площади не менее 100 см2, если нет специальных указаний для данного объекта.

Контрольные смывы инкубируют при температуре (37±1) °С в течение 18 - 24 ч. В пробирку с контрольным смывом добавляют 10 см3 стерильной селенитовой среды и оставляют при

(37±1) °С в течение 18 - 24 ч.

После инкубации проводят посев на среду Плоскирева в чашки Петри. Оставляют на 24 ч при температуре (37±1) °С. По истечении времени инкубирования просматривают колонии микроорганизмов, выросших на среде Плоскирева.

Если наблюдается рост Salmonella, пересеивают колонии в пробирку на среду Клиглера (косяк со столбиком), оставляют на 24 ч при температуре (37±1) °С и проверяют биохимическую активность микроорганизма. Учет биохимических свойств сальмонелл на указанных средах проводят визуально.

Появление желтой окраски в скошенной части агара характеризует ферментацию лактозы, в столбике - глюкозы.

Газообразование устанавливают по появлению пузырьков, разрывам агара или его отслоению от стенок пробирки. Об образовании сероводорода судят по почернению среды, обычно в середине столбика.

При росте культуры, гидролизующей мочевину, среда Олькеницкого приобретает красно-малиновый цвет. При росте культур, образующих большое количество сероводорода или гидролизующих мочевину, учет ферментации углеводов в большинстве случаев невозможен.

Фосфатно-буферный раствор

Состав:

калия дигидрофосфат (KH2PO4)………….0,45 г натрия гидрофосфат безводный………….5,34 г вода дистиллированная………….…..….1000 см3

Приготовление. Ингредиенты смешивают, разливают в пробирки или флаконы, стерилизуют в автоклаве30 мин при температуре 121 °С.

7

Селенитовая среда

Состав:

натрия гидроселенит (NaHSeO3 )

без примеси теллура.………….………………….4 г

пептон………….………….………….…..….…...5 г

натрия гидрофосфат безводный…………………7 г натрия дигидрофосфат безводный (NaH2PO4) …3 г

лактоза………….………….……...………………4 г

вода дистиллированная…………...…..……1000 см3

Приготовление. Среду готовят из двух основных растворов. Раствор 1. Определяют пропорцию натрия гидрофосфата и натрия дигидрофосфата с используемым образцом пептона и натрия гидроселенита для установленияpH 6,9-7,1. С этой целью регулируют соотношение фосфатов. Подтитровка нужна всегда при изменении серии любого из входящих в среду основных ингредиентов. После установления соотношения фосфатов к рас-

твору добавляют пептон и лактозу. Разливают во флаконы по 50 см3 и стерилизуют текучим паром по30 мин два дня. Количество фосфатов в рецепте среды дано в расчете на безводные препараты. При отсутствии таковых заранее заготовленные навески "выветривают" 15-16 сут в термостате.

Раствор 2. Раствор натрия гидроселенита с массовой долей 10 % готовят на стерильной дистиллированной воде перед -ис пользованием.

Перед началом работы во флакон с 50 см3 раствора 1 добавляют 2 см3 раствора 2, разливают по 5-7 см3 в стерильные пробирки с соблюдением правил асептики и закрывают плотно пробками. Дальнейшая стерилизация не требуется.

Основной раствор (первый) для среды можно хранить в холодильнике 1-2 мес. При приготовлении среды следует использовать высококачественный пептон (желательно "Рихтер", "Спофа" или жидкий аминопептид - отечественный заменитель импортного пептона).

8

3. Исследование микробной обсемененности поверхностей,

смывов с рук. При взятии смывов с рук протирают тампоном ладонные поверхности обеих рук, проводя не менее 5 раз по каждой ладони и пальцам, затем протирают межпальцевые пространства, ногти и подногтевые пространства.

Взятие смывов производится с помощью стерильных -ув лажненных ватных тампонов. Стерильные ватные тампоны на стеклянных, металлических или деревянных палочках, вмонтированных в пробирки с ватными пробками, заготавливают заранее в лаборатории. В день взятия смывов в каждую пробирку с тампоном наливается (в условиях бокса над горелкой) по 5 см3 стерильного водного раствора пептона с массовой долей 1 % (далее - пептонная вода) или изотонического раствора хлорида натрия таким образом, чтобы ватный тампон не касался жидкости.

Подготовительный этап. Для контроля используют: пробирки с 5 см3 стерильной пептонной воды, в пробки которых вмонтированы стерильные ватные тампоны на палочках. Тампоны не должны смачиваться питательной средой.

Пептонную воду предварительно проверяют на стерильность. Для этого 2 пробирки от приготовленной партии среды инкубируют при температуре 37 °С в течение 24 ч. Учитывают наличие (отсутствие) пророста среды.

В качестве нейтрализатора используют стерильный раствор тиосульфата натрия с массовой долей0,5 %. Препарат может быть добавлен в раствор пептонной воды с массовой долей 1 %.

Проведение испытания. Стерильный тампон, вмонтированный в пробку пробирки, погружают в пептонную воду. Смоченным тампоном тщательно протирают исследуемую поверхность.

При контроле мелких предметов смывы проводят с поверхности всего предмета. При контроле предметов с большой поверхностью смывы проводят с площади не менее100 см2. После взятия смыва тампон помещают на 10-15 мин в пробирку с раствором нейтрализатора, затем переносят в пробирку с питательной сре-

(37±1) °С в течение 18 - 24 ч. После инкубации проводят высев из

9

пептонной воды с массовой долей 1 % на среду Эндо. Посевы на среде Эндо и незасеянную чашку среды этой же партии инкубируют при температуре (37±1) °С в течение 18-24 ч.

При отсутствии роста на контрольной чашке и наличии роста в посевах смывов дальнейшее исследование проводят -со

гласно «Методическим указаниям по - санитарн микробиологическому анализу питьевой воды». Результат заносят в журнал по регистрации микробной обсемененности поверхностей и заверяют подписью исполнителя.

Обнаружение микроорганизмов в смывах с исследуемых поверхностей свидетельствует об их неадекватной дезинфекции.

В этом случае извещают руководителя подразделения и выясняют возможные причины неэффективной дезобработки поверхностей.

Контрольные вопросы

1. После какой процедуры проводят контроль оборудования, трубопроводов, посуды, инвентаря, вспомогательных и упаковочных материалов, рук работников?

2. О чем свидетельствует присутствие микроорганизмов в смывах с поверхностей и какие действия предпринимают в связи с этим?

3.Каким образом производят смыв с рук?

4.Как производится оценка санитарного состояния воздуха производственных помещений: общей бактериальной обсемененности?

5.Как производится оценка санитарного состояния -во ды: общее микробное число воды?

Лабораторная работа № 2.

Определение сырой клетчатки и уреазы в соевом шроте

Цель работы: освоить методы определения сырой клетчатки и уреазы в соевом шроте.

10