ТАБЛ И ЦА 11 - 2. (Окончание)
Тест |
Нормальные |
Основное |
|
Количеств |
|
величины |
предназначение |
Метод |
о анализов, |
Возможные проблемы |
|
|
|
|
стоимость |
|
Пируваткиназа
(скрининговое определение активности в эритроцитах)
Основные
ферменты
эритроцитов
Нормальная ак- |
Диагностика врож- |
Гемолизат крови паци- |
тивность |
— |
денной недостаточно- |
ента смешивают с реа- |
ис-чезновен |
сти ПК, |
являющейся |
гентами, устраняющи- |
ие |
|
причиной |
гемолити- |
ми флюоресценцию |
флюоресцен- |
ческой анемии |
НАДФН в присутствии |
ции |
|
|
|
ПК |
(скрининго-вый |
|
|
|
Нормальная акДиагностика причин Большое разнообразие тивность около врожденной гемолиспецифических мето-
15 ферментов тической анемии |
дов; эти тесты доступ- |
эритроцитов |
ны для специализиро- |
тест Бетле-ра) |
ванных лабораторий |
|
< 1 в нед |
Скрининговый тест, выпол- |
(50-100 няемый эпизодически и не |
USD) |
обладающий высокой чув- |
ствительностью; при подозрительных результатах . следует провести исследование полностью
< 1 в нед |
Большинство этих тестов |
(100 USD) |
проводится редко, поэтому |
|
они не используются в не- |
|
больших лабораториях |
Для оценки анемии также могут оказаться важными следующие тесты: креатинин, ЛДГ, билирубин, гормоны щитовидной железы; железо сыворотки, железосвязывающая способность, ферритин (табл. 11-3); тест Кумбса, титр холодового агглютинина, метилмалоновая кислота в моче, антитела к парвовирусу, реже — выживаемость эритроцитов, меченых 51Сг (глава 3).
ТАБЛИЦА 11-3. Исследования для диагностики дефицита железа
|
Нормальные |
Основное |
|
Количеств |
|
Тест |
величины |
предназначение |
Метод |
о анализов, |
Возможные проблемы |
|
|
|
|
стоимость |
|
|
СОК |
80-95 мкм3 |
Один из критериев на- |
Импедансный метод и |
|
(табл. 11-1 и |
|
|
чального определения |
метод рассеивания ла- |
|
приложение 1) |
|
|
типа |
анемии: |
зерного пучка ("узко- |
|
|
|
|
макро-цитарная, |
угольный") |
являются |
|
|
|
|
нормоци-тарная, |
автоматизированными |
|
|
|
|
микроцитар-ная |
методами диагностики; |
|
|
|
|
|
|
в прошлом |
рассчиты- |
|
|
|
|
|
|
вался |
на |
основе |
|
|
|
|
|
|
гема-токрита |
и |
|
|
|
|
|
|
количества |
|
|
Распределе- |
13 ± 1 % |
Определение |
эритроцитов |
|
|
Как для СОК: импеданс- |
|
ниедиаметра |
|
|
анизо-цитоза, т. е. |
|
эритроцитов |
|
|
вариаций в размерах |
ный метод или метод |
|
(РДЭ) |
|
|
эритроцитов |
|
рассеивания лазерного |
|
Морфология |
Нормохромные |
Отклонения |
от нор- |
пучка |
|
|
|
эритроцита |
нормоцитарные |
мальной формы эрит- |
Капля крови помещает- |
|
(табл. 11-1; |
эритроциты; |
роцита выявляются |
ся на предметное стек- |
|
глава 3) |
например, цен- |
при разных анемиях; |
ло, размазывается и ок- |
|
|
тральная блед- |
например, расширен- |
рашивается |
по Райту. |
|
|
ная |
область |
ная центральная блед- |
Морфология эритроци- |
|
|
должна |
зани- |
ность, |
длинные |
тов оценивается под |
|
|
мать < |
1/з кле- |
эллип-тоциты |
|
микроскопом |
|
|
|
точного |
диа- |
(карандаше-образные |
|
|
|
|
|
метра |
|
формы) в сочетании с |
|
|
|
|
|
|
|
тромбо-цитозом |
|
|
|
|
|
|
|
характерны |
для |
|
|
|
|
|
|
|
дефицитажелеза |
|
|
|
> 100
вдень (часть
OAK)
см. СОК
> 100
вдень (часть
дифференциального анализа)
Чувствительность СОК при результате < 78 для дефицита железа составляет около 50 %; специфичность — около 60 % внутри нашей популяции (так же определяются талассемия, анемия при хронических заболеваниях)
УвеличениеРДЭнеявляется чувствителым или специфичным по отношению кдефицитужелеза(спорно)
Оценка гипохромии субъективна; могут мешать артефакты
ТАБЛИЦА 11-3. (Продолжение)
Тест |
|
Нормальные |
Основное |
|
|
Метод |
|
Количеств |
Возможные проблемы |
|
величины |
предназначение |
|
|
о анализов, |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
стоимость |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Кровь в кале |
Отрицательный |
Диагностика |
потери |
Образец кала помеща- |
Часть |
Тест очень |
чувствителен; |
Hemoccult® |
(кровь не обна- |
крови из ЖКТ, являю- |
ется |
на |
бумагу, |
общего |
реакция может быть иници- |
и пр. |
|
ружена; стул ко- |
щейся |
обычной |
при- |
импрег-нированную |
физикаль-н |
ирована |
растительной |
|
|
ричневый) |
чиной |
дефицита |
же- |
гваяковой |
смолой |
ого обсле- |
пе-роксидазой. |
|
|
|
|
леза. (Дефицит желе- |
(например, |
Hemoccult), |
дования: |
Кровотечение из |
ЖКТ |
|
|
|
за у мужчин |
обычно |
и |
обрабатывается |
>100 вдень; |
часто |
|
носит |
|
|
|
связан с потерей кро- |
перекисью. |
Синее |
может |
интер-миттирующий |
|
|
|
|
ви через ЖКТ и требу- |
окрашивание |
|
выполняться |
характер |
|
|
|
|
|
ет проведения эндо- |
указывает |
на присут- |
у постели |
|
|
|
|
|
|
скопии и/или скани- |
ствие крови (актив- |
больного, а |
|
|
|
|
|
|
рования, не взирая на |
ность |
пероксидазы |
не в лабора- |
|
|
|
|
|
|
результаты |
данного |
крови) |
|
|
|
тории |
|
|
|
|
|
|
исследования.) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Протопорфи-р |
100-280 мкг/л |
Применяется для вы- |
|
|
|
|
10-100 |
|
|
|
ин эритроци- |
цельной крови |
явления |
отравления |
Экстракция |
ПЭ |
и |
вдень |
|
|
|
тов (ПЭ) |
|
|
свинцом |
и дефицита |
флюо-риметрия; ЦПЭ |
(10-20 USD) |
Уровень умеренно |
повы- |
(табл. 11-2) |
|
железа |
|
|
|
|
измеряется проточным |
|
шен при анемии, связанной |
|
|
|
|
|
|
|
|
флюориметром |
|
|
с хроническими заболева- |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
ниями. Заметное повыше- |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
ние у незначительного чис- |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
ла пациентов с дефицитом |
Железо |
|
Железо |
Определение дефици- |
|
|
|
|
1-10 вдень |
железа. Значительный раз- |
|
Автоматический |
инст- |
брос результатов |
|
сыворотки |
500-1800 мкг/л |
та железа(низкий уро- |
(10-20 USD) |
|
Железосвязы- |
ЖСС |
вень железа, |
высокая |
рументальный анализ; |
|
Уровень железа сыворотки |
вющая |
спо- |
2500-4500 |
ЖСС, низкий % насы- |
определение по изме- |
|
и % насыщения постепенно |
собность |
сы- |
мкг/л |
щения) или перегруз- |
нению цвета после до- |
|
снижаются у |
пациентов с |
воротки |
|
|
ки железом (высокий |
бавления |
хромогена |
|
лихорадкой или воспалени- |
(ЖСС) % |
|
|
уровень железа, высо- |
Феррозим |
|
|
|
ем; уровень железа сыво- |
насыщения |
20-40 % |
кий % насыщения) |
|
|
|
|
|
|
ротки колеблется в преде- |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
лах суток; ЖСС повышается |
при беременности
ТАБЛИЦА 11-3. (Окончание)
Тест |
Нормальные |
Основное |
|
Количеств |
|
|
|
величины |
|
предназначение |
Метод |
о анализов, |
Возможные проблемы |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
стоимость |
|
|
|
Аспират |
В норме железо |
Подтверждение нали- |
Окрашивания берлинс- |
< 1 вдень |
Исследование |
костного |
и/или |
присутствует |
в |
чия запасов |
железа |
кой лазурью. Стандарт- |
(выполняет- |
мозга — болезненный и до- |
биоптат |
умеренном |
ко- |
(обычно рассматрива- |
ное гистологическое |
ся при |
рогостоящий метод.Встре- |
костного |
личестве в гис- |
ется в качестве опре- |
окрашивание |
исследова- |
чаются |
|
|
мозга; |
тиоцитах |
кост- |
деляющего теста). У |
|
нии аспира- |
ложноположитель-ные |
и |
окраска |
ного |
|
мозга, |
пациента не развива- |
|
та и/или |
ложноотрицательные |
|
на железо |
большинство из |
ется |
|
|
|
биоптата |
результаты. Чувствитель- |
|
которых |
разру- |
железодефицит-ная |
|
костного |
ность и специфичность не |
|
шается во вре- |
анемия, пока |
запасы |
|
мозга без |
идеальны |
|
|
|
мя взятия про- |
железа |
в |
костном |
|
отдельной |
|
|
|
|
бы, |
оставляя |
мозге не |
исчерпаны. |
|
оплаты) |
|
|
|
|
гранулы |
раз- |
Наличие |
железа в |
|
|
|
|
|
|
личных |
разме- |
костном мозге в лю- |
|
|
|
|
|
|
ров |
|
|
|
бой форме свидетель- |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
ствует о том, что де- |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
фицит железа не явля- |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
ется причиной анемии |
|
|
|
|
|
* Стоимость медикаментов и последующих измерений гематокрита и уровня ретикулоцитов.
ТАБЛИЦА 11 -4. Тесты для определения аномальных гемоглобинов
Тест |
Нормальные |
Основное |
Метод |
Количеств |
|
|
|
величины |
предназначение |
о анализов, |
Возможные проблемы |
|
|
|
|
|
стоимость |
|
|
|
Электрофорез |
Гемоглобины А, |
Диагностика гемогло- |
Эритроциты отмывают- |
1-10 вдень |
Если появляются |
полосы, |
гемоглобина |
F и А2 обычно |
бинопатии, способных |
ся в солевом растворе, |
(< 10 USD) |
свидетельствующие о при- |
щелочная среда |
наблюдаются |
вызывать гемолиз, ци- |
подвергаются лизису в |
|
сутствии аномального НЬ, |
(рН 8,6), |
именно в таком |
аноз, полицитемию |
среде вода-толуол; ге- |
|
необходимо |
дальнейшее |
ацетатцеллю-л |
порядке в виде |
|
моглобин отделяется от |
|
исследование |
|
(включая |
озный,агароз-н |
отдельных по- |
|
клеточных |
мембран в |
|
функциональные |
тесты). |
ый или |
лос |
|
ходе центрифугирова- |
|
Проблемы могут |
возник- |
акри-ламидный |
|
|
ния, наносится на гель, |
|
нуть в том случае, когда об- |
гель |
|
|
помещенный в буфер- |
|
наруживается |
несколько |
|
|
|
ный раствор, и подвер- |
|
гемоглобинопатии, многие |
|
|
|
гается воздействию по- |
|
из которых клинически не- |
|
|
|
стоянного |
электричес- |
|
значимы |
|
|
|
|
|
кого поля в течение 20 и |
|
|
|
|
|
|
|
более минут. Гемоглоби- |
|
|
|
|
|
|
|
ны перемещаются по |
|
|
|
|
|
|
|
направлению к положи- |
|
|
|
|
|
|
|
тельному |
электроду. |
|
|
|
|
|
|
|
Полосы измеряются с |
|
|
|
|
|
|
|
помощью денситометра |
|
|
|
|
|
Обнаруживают- |
2-й этап исследова- |
Гемолизат, |
приготов- |
< 1 в день |
Электрофорез |
ся гемоглобины |
ния аномальных ге- |
ленный, |
как |
это было |
(20-50 USD) |
гемоглобина |
F, А и А2. |
моглобинов после ще- |
описано выше, нано- |
|
кислая среда |
|
лочного электрофоре- |
сится на гель агарозы и |
|
(рН6,2), |
|
за. Отделение HbS от |
подвергается |
воздей- |
|
агарозный гель |
|
D и G; С от Ей О Араб. |
ствию |
электрического |
|
|
|
Выявление отличий |
поля. Гемоглобины в |
|
|
|
между AS и SS у ново- |
кислой |
среде переме- |
|
|
|
рожденных |
щаются |
к отрицатель- |
|
|
|
ному полюсу |
|
|
|
|
|
|
|
В нашем госпитале групповое тестирование (отсроченное); точная идентификация HbS и НЬС достигается лишь после двукратного тестирования
ТАБЛИЦА 11-4. (Продолжение)
|
Нормальные |
Основное |
|
Количеств |
|
Тест |
величины |
предназначение |
Метод |
о анализов, |
Возможные проблемы |
|
|
|
|
стоимость |
|
Количественное определениеНЬА2 с помощью метода микроколонок
Количественное определение HbS с помощью метода микроколонок
Определение
серповидных
клеток
|
<3,8% |
|
Повышение |
уровня |
Подготовленная |
колон- |
< 1 вдень |
Умеренно трудоемкое руч- |
от общего |
НЬА2 |
— |
один из |
ка |
|
устанавливается |
(20-50 USD) |
ное исследование. Недо- |
гемоглобина |
характерныхпризнаков |
вертикально. НЬ нано- |
|
статок гемоглобина свиде- |
|
|
|
р-та-лассемии |
|
сится |
|
сверху и |
затем |
|
тельствует о микроцитозе |
|
|
|
|
|
|
|
последовательно |
нали- |
|
нежелезодефицитной |
при- |
|
|
|
|
|
|
|
вают буферы; собирают |
|
роды (дефицит железа вы- |
|
|
|
|
|
|
|
фракции |
гемоглобина; |
|
зывает ложнонизкие уров- |
|
|
|
|
|
|
|
уровни НЬ определяют, |
|
ни НЬА2). Вместе с НЬА2 |
|
|
|
|
|
|
|
используя |
раствор |
|
элюируется НЬС |
|
|
|
|
|
|
|
|
Драбкина; |
вычисляют |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
процент НЬА2 |
|
|
|
|
|
|
"Нормой" явля- |
Отслеживание |
уровня |
Аналогично методу оп- |
< 1 вдень |
При |
колоночном способе |
ется отсутствие |
HbS у |
пациентов с |
ределения НЬА2 |
|
(50-100 |
воспроизводимость резуль- |
HbS; |
у пациен- |
серпов |
|
|
и |
|
|
|
|
|
USD) |
татов хуже, нежели при при- |
тов |
|
с |
дно-клеточной |
|
|
|
|
|
|
менении электрофореза |
серповид-но-к |
анемией, |
получающих |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
леточной |
|
гемотрансфузии |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
анемией |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
гемо-трансф |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
узии обычно |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
проводятся |
до |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
тех |
пор, |
пока |
|
|
|
|
Эритроциты смешива-. |
2 в неделю |
Ложноположительные |
и |
HbS < 50 % |
|
Определение |
серпо- |
Нет |
серповид- |
ются с сильным окисли- |
(стоимость |
ложноотрицательные |
ре- |
видных |
эритроцитов |
телем |
|
— |
не опреде- |
зультаты обычны до тех пор, |
ных клеток |
|
(HbS; |
|
реже |
— |
метабисуль-фитом |
лена) |
пока |
не будет наработан |
|
|
|
НЬС-Гарлем) |
|
натрия, |
и |
про- |
|
опыт |
использования |
этого |
|
|
|
|
|
|
|
сматриваются время от |
|
метода. Эхиноциты в дли- |
|
|
|
|
|
|
|
времени (закрытые на 1 |
|
тельно хранившихся образ- |
|
|
|
|
|
|
|
час |
покровным |
стек- |
|
цах крови могут создавать |
|
|
|
|
|
|
|
лом) на предмет появ- |
|
путаницу. В случае положи- |
|
|
|
|
|
|
|
ления |
характерной |
|
тельного результата необ- |
|
|
|
|
|
|
|
формы |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
ТАБЛИЦА 11 -4. (Окончание)
Тест |
Нормальные |
Основное |
Метод |
|
Количеств |
Возможные проблемы |
величины |
предназначение |
|
о анализов, |
|
|
|
|
|
|
стоимость |
|
Тельца Гейнца, |
Нет телец |
Поиск нестабильных |
Эритроциты смешива- < 1 в нед ют с |
Для интерпретации резуль- |
суправиталь-н |
Гейнца |
гемоглобинов (напри- |
кристаллическим |
|
(<10USD) |
татов, равно как и для про- |
ое окраши- |
|
мер, НЬ Кёльн) или |
фиолетовым |
в |
пробирке |
и |
ведения контроля, необхо- |
вание эри- |
|
механизмов |
окисли- |
инкубируют. Затем проверяют на |
дим соответствующий |
троцитов |
|
тельного |
гемолиза |
наличие телец Гейнца. Положи- |
опыт. Ретикулоцитоз обус- |
|
|
при обнаружении де- |
тельный контроль производится при |
ловливает |
|
|
натурированных телец |
обработке нормальных эритроцитов |
ложнопозитив-ный |
|
|
НЬ в эритроцитах |
ацетил-фенилгидразином |
|
результат |
Включения НЬН,супра-ви тальное окрашивание
Тесты на нестабильный гемоглобин: изопропанольная или тепловая
преципитация
НЬ
|
|
|
|
|
Эритроциты смешива- |
< 1 в нед ют с |
|
|
|
|
|
красителем брил- (< 10-20 |
|
|
|
|
|
лиантовым крезиловым |
USD) |
Нет включений |
Подтверждение |
нали- |
голубым, |
инкубируют, |
проверяют |
|
|
чия включений |
НЬН |
на наличие характерных включений |
|
|
(или НЬ Барт) |
|
Гемолизат смешивают с |
< 1 внед |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
изопропанолом или ин- |
(< 20-50 |
|
|
|
|
|
кубируют при 50 °С в те- |
USD) |
|
|
Поиск одного из 50 ге- |
чение 3 часов; оценивают |
Преципитация |
преципитацию НЬ. Обработанный |
отсутствует; |
те- |
моглобинов, |
являю- |
гемолизат |
центрифугируют; |
стируемый |
|
щихся |
причиной |
содержание НЬ в супер- |
:: натанте |
су-пернатант |
тран-зиторной |
|
сранивают с базовым уровнем |
содержит |
тот |
анемии |
|
при |
|
|
|
же НЬ, что и |
эпизодическом |
гемо- |
|
|
|
необ- |
|
лизе (см.также тест на |
|
|
|
работанный |
|
определение |
телец |
|
|
|
ге-молизат (в |
Гейнца) |
|
|
|
|
|
тех |
же |
|
|
|
|
|
|
количествах) |
|
|
|
|
|
|
|
Позитивные результаты в нашей лаборатории достаточно редки; возможны проблемы с интерпретацией результатов
Положительные результаты редки; строма эритроцитов может давать запутанную картину нестабильных НЬ
Сродство |
Гемоглобин |
Определение |
ано- |
Гемолизат, цельный или |
< 1 в нед |
гемоглобина |
насыщен 02 |
мальных |
гемоглоби- |
разделенный |
|
(стоимость |
к кислороду |
на 50 % |
нов с высоким |
или |
хромато-графически на |
не опреде- |
"р50" |
при рО2, равном |
низким |
сродством к |
соответствующие |
|
лена) |
|
26 ± 1 мм рт. ст. |
кислороду, вызываю- |
фракции гемоглобина, |
|
|
|
щих полицитемию или |
выдерживают |
при |
|
|
|
выраженную анемию |
различных уровнях О2. |
|
|
|
соответственно |
|
Насыщение НЬ |
О2 |
|
|
|
|
|
|
определяют для каждого |
|
|
|
|
|
|
уровня рО2 |
|
|
Слишком редкое исследование для того, чтобы быть легко выполнимым
Прочие исследования: изоэлектрическое фокусирование гемоглобинов, Sickledex® — определение серповидного гемоглобина, окончательная идентификация аномальных гемоглобинов с определением аминокислотных последовательностей, пренатальная диагностика с помощью ДНК-анализа.
