Работа 2. Количественное определение витамина а в рыбьем жире

Витамин А (ретинол) принимает участие в окислительно-восстановительных процессах, тканевом дыхании, процессах биосинтеза белков, окислительного фосфорилирования, фоторецепции входит в состав простетической группы белка родопсина), в регуляции проницаемости клеточных мембран, синтезе нуклеиновых кислот, кортикостероидов, гликозаминогликанов, росте костной ткани, обмене минеральных веществ (а именно кальция), увеличивает сопротивляемость организма к инфекционным болезням, тормозит процессы кератинизации эпителиальных клеток.

При недостатке витамина А наблюдают три вида нарушений: гемералопия, или ночная слепота; ксерофтальмия (пересыхание роговицы глаза, нарушение слёзообразования); кератомаляция (оболочка глаза размягчается и теряет прозрачность, как следствие – полная потеря зрения); ороговение и слущивание эпителия дыхательных путей, пищеварительного тракта, мочеполовых путей.

Принцип метода. Метод основан на реакции витамина А с треххлористой сурьмой StCl₃ в присутствии уксусного ангидрида, в результате чего развивается синяя окраска. Интенсивность окраски, прямо пропорциональную ко­личеству витамина А в пробе, определяют колориметрически.

Ход работы. 2,5 мл рыбьего жира растворить в 25 мл хлороформа в мерной колбе (разведение в 10 раз). В одну из кювет ФЭКа поместить 0,4 мл хлороформного раствора рыбьего жира, прибавить 1–2 капли уксусного ангидрида (для предупреждения появления мути) и 4 мл раствора треххлористой сурьмы. Через 10 секунд фотометрировать при 620 нм (красный светофильтр) против треххлористой сурьмы. Концентрацию витамина А в исследуемом растворе найти по калибровочному графику, на котором каждому значению найденной экстинкции соответствует определенное содержание витамина А в 0,4 мл раствора.

Построение калибровочного графика произвести по стандартному раствору витамина А в рыбьем жире, содержание в котором витамина А 500 ИЕ (интернац. единиц) в мл. Из этого раст­вора готовят серию разведений с таким расчетом, чтобы в 0,4 мл получаемых растворов содержалось от 20 до 100 ИЕ витамина А (см. таблицу).

Из приготовленных растворов отобрать по 0,4 мл, обработать треххлористой сурьмой и измерить оптическую плотность. Полученные данные использовать для построения калибровочного графика. По графику определить количество витамина А в 0,4 мл раствора, затем найти количество витамина А в 1 мл с учётом разведения.

Проба	Объем в мл		Содержание витамина А		Экстинкция раствора
	Стандарт	Хлороформ	в 1 мл (ИЕ)	в 0,4 мл (ИЕ)
1	0,5	0,5	250	100
2	0,5	0,75	200	80
3	0,5	1,15	150	60
4	0,5	2,0	100	40
5	0,5	4,5	50	20

Контрольные вопросы по теме «Биохимия питания человека. Витамины как компоненты питания»:

1. Биохимия питания человека: компоненты нормального питания, биологическая ценность отдельных нутриентов.

2. Механизмы преобразования питательных веществ (белков, углеводородов, липидов) в пищеварительном тракте. Ферменты желудка и кишечника.

3. Нарушение переваривания отдельных нутриентов в желудке и кишечнике; наследственные энзимопатии процессов пищеварения.

4. Микроэлементы в питании человека. Биологические функции отдельных микроэлементов; проявление микроэлементной недостаточности.

5. Витамины в питании человека. Водорастворимые и жирорастворимые витамины; экзогенные и эндогенные причины витаминной недостаточности.

6. Характеристика витаминов: строение, биологические свойства, механизм действия, источники, суточная потребность.

   1. Витамин В₁ (тиамин).

   2. Витамин В₂ (рибофлавин).

   3. Витамин РР (никотиновая кислота, никотинамид).

   4. Витамин В₆ (пиридоксин).

   5. Витамин В₁₂ (кобаламин).

   6. Витамин В_с (фолиевая кислота).

   7. Витамин Н (биотин).

   8. Витамин В₃ (пантотеновая кислота).

   9. Витамин С (аскорбиновая кислота).

   10. Витамин Р (флавоноиды).

   11. Витамин А (ретинол, ретиналь, ретиновая кислота).

   12. Витамин К (филлохинон, менахинон).

   13. Витамин Е (-токоферол).

   14. Витамин D₃ (холекальциферол).