Министерство образования и науки,

молодёжи и спорта Украины

Харьковский национальный университет имени В. Н. Каразина

Биологическая

химия

Методические указания к лабораторному практикуму

для студентов

медицинского факультета

Харьков – 2012

УДК 577.1 (075.8)

ББК 28.072 я 73, авт. Знак Б63

Рецензенты: В. В. Давыдов – доктор биологических наук, профессор, зав. лабораторией возрастной эндокринологии и обмена веществ ГО «Институт охраны здоровья детей и подростков АМН Украины»;

Т. В. Горбач – кандидат биологических наук, доцент,

доцент кафедры биохимии Харьковского национального медицинского университета

Биологическая химия: методические указания к лабораторному практикуму для студентов медицинского факультета / сост. Седова К. В., Ганусова Г. В., Князева М. В.– Х: ХНУ имени В. Н. Каразина, 2012. – 141 с.

Указания содержат основные данные о структуре, свойствах и путях обмена биомолекул, принципы качественных и количественных методов их исследования, а также пояснения к выполнению лабораторных работ и контрольные вопросы. Указания предназначены для активизации самостоятельной подготовки студентов к занятиям, конкретизации знаний, получаемых при изучении теоретической части общего курса биологической химии.

Біологічна хімія: методичні вказівки до лабораторного практикуму для студентів медичного факультету / укл. Сєдова К. В., Ганусова Г. В., Князєва М. В.– Х: ХНУ імені В. Н. Каразіна, 2012. – 141 с.

Вказівки містять основні дані про структуру, властивості та шляхи обміну біомолекул, принципи якісних та кількісних методів їх дослідження, а також пояснення до виконання лабораторних робіт і контрольні питання. Вказівки призначені для активізації самостійної підготовки студентів до занять, конкретизації знань, що отримуються при вивченні теоретичної частини загального курсу біологічної хімії.

Утверждено к печати решением Научно – педагогического совета Харьковского национального университета имени В. Н. Каразина (протокол № 0501- 1/ 199 от 16.01.2012 р.)

©Харьковский национальный университет имени В. Н. Каразина, 2012

© К. В. Седова, Г. В. Ганусова, М. В. Князева, сост.,2012

© , макет обложки, 2012

ВВедение

На современном уровне развития медицины биохимия приобретает все более важное практическое значение. Это связано как с увеличением объема накопленной научной информации, так и с совершенствованием технической и методической базы клинических биохимических лабораторий. Клиническая биохимия, как и другие клинические методы обследования больных, используется в сложном процессе постановки врачом диагноза заболевания. Результаты анализов биохимических показателей в динамике клеточном, органном уровнях. Биохимические исследования необходимы для своевременного и правильного мониторинга состояния пациента и оценки степени эффективности проводимой терапии.

Настоящие методические указания составлены в соответствии с типовой программой по биохимии для студентов медицинских вузов и включают как традиционные, так и новые унифицированные методы биохимических исследований, необходимых для работы современных клинико-диагностических лабораторий.

Цель лабораторного практикума по общему курсу биологической химии – ознакомление студентов с задачами и методами работы в биохимической лаборатории; освоение принципов качественного и количественного биохимического анализа; конкретизация знаний о структуре, свойствах и метаболизме основных классов биомолекул; изучение биохимических механизмов возникновения патологий, принципов их диагностики и мониторинга. Подведение итогов выполненных работ призвано научить студентов грамотно интерпретировать данные биохимического анализа.

ПРАВИЛА РАБОТЫ В БИОХИМИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРИИ

Работа в лаборатории требует строгого соблюдения правил техники безопасности, нарушение которых может быть причиной несчастных случаев.

К работе допускаются студенты, прошедшие инструктаж по технике безопасности и расписавшиеся в журнале по технике безопасности.

Работа в химической лаборатории производится в спецодежде с использованием индивидуальных средств защиты в соответствии с нормами: халат из хлопчатобумажной ткани, застегивающийся спереди (в случае необходимости его легко сбросить), тонкие резиновые перчатки (при работе с концентрированными растворами). Без спецодежды студенты не допускаются к выполнению лабораторной работы.

На лабораторном практикуме запрещается:

• Курить, шуметь, принимать пищу, использовать для питьевой воды и пищевых продуктов химическую посуду.

• Нюхать и пробовать на вкус реактивы, набирать ртом в пипетку жидкие реактивы, брать реактивы руками. Использовать реактивы и производить операции, не предусмотренные методическими указаниями к лабораторной работе.

• Переносить на лабораторные столы сосуды с концентрированными растворами, которые находятся в вытяжном шкафу.

• Самостоятельно включать любое оборудование, зажигать газовые горелки, искать в шкафах реактивы.

• Оставлять открытыми банки с летучими реактивами, подносить их к открытому огню.

• Нагревать пробирки без пробиркодержателей, охлаждать раскаленные пробирки или другую посуду под струей холодной воды.

• Пользоваться треснутой и битой химической посудой.

Требования безопасности при работе в лаборатории:

• Разлитые на столах и полу кислоты и щелочи, одежда, на которую попала кислота или щелочь, нейтрализовать: в случае кислоты – 2 % раствором соды, в случае щелочи – 2 % раствором уксусной кислоты – и далее промыть водой. Большие объемы разлитых реактивов засыпать песком, нейтрализовать, а затем смыть водой.

• При разбавлении концентрированных кислот (особенно серной) водой выделяется большое количество тепла, поэтому следует наливать кислоту в воду или крепкую кислоту в слабую, осторожно перемешивая. Разбавление производить только в термостойкой посуде.

• При наличии запаха газа не включать освещение и электроприборы до устранения утечки газа и полного проветривания помещения.

• Следить за сохранением чистоты реактивов, не путать пробки от банок с реактивами, не доставать реактив из банки грязным шпателем.

• При центрифугировании точно уравновешенные центрифужные пробирки установить друг против друга в специальные гнезда, после чего закрыть крышку центрифуги. Запрещается включать центрифугу без разрешения преподавателя.

• Все работы с летучими, ядовитыми и легковоспламеняющимися веществами (аммиак, бром, диэтиловый эфир, хлороформ, ледяная уксусная кислота, концентрированные кислоты и т. п.) выполнять в вытяжном шкафу.

После выполнения лабораторной работы дежурный должен навести порядок в лаборатории и вымыть использованную посуду.

Оказание первой помощи:

При работе в химической лаборатории могут быть случаи пореза рук стеклом, термические и химические ожоги, а также ингаляционные поражения парами токсических веществ. Доврачебная помощь должна быть оказана пострадавшему коллегами по работе.

При порезах рук стеклом прежде всего необходимо пинцетом, промытым спиртом, удалить из раны осколки стекла, промыть 2 % раствором перманганата калия, смазать 5 % раствором йода и забинтовать.

При термических ожогах вначале сделать примочки из 2 % раствора перманганата калия или этилового спирта (96 %), затем смазать обожженный участок мазью от ожогов и наложить повязку.

При химических ожогах необходимо прежде всего удалить вызывающее ожог вещество и обработать пораженный участок нейтрализующим раствором. Если на кожу попадет кислота, то после смывания сильной струёй воды (при слабой струе воды может быть термический ожог) пораженный участок в течение 10 минут промывать 3 % раствором питьевой соды (чайная ложка на стакан воды). При ожоге щелочью пораженный участок обильно промыть водой, затем 2 % раствором борной или уксусной кислоты.

При попадании на кожу агрессивных органических веществ (фенол и т.п.) пораженный участок быстро промыть этиловым спиртом (96 %), а затем смазать мазью от ожогов.

При химических ожогах глаз до обращения в медпункт промыть пострадавшему глаза большим количеством воды, затем 2 % раствором питьевой соды (при попадании кислоты) или 2 % раствором борной кислоты (при попадании щелочи). Эти растворы должны быть в лабораторной аптечке.

При ингаляционных поражениях пострадавшего немедленно вывести на свежий воздух.

Чрезвычайно опасно для организма вдыхание паров брома. Кроме того, он вызывает сильные ожоги кожи. При работе с бромом необходимо для нейтрализации иметь рядом 5 % раствор бисульфита натрия.

Чтобы предотвратить опасность отравления, категорически запрещается работать с ядовитыми летучими и газообразными веществами на лабора­торных столах, а только в вытяжных шкафах при включенной вентиляции.

При поражениях электрическим током, если пострадавший остается в соприкосновении с источником тока, необходимо немедленно выключить электричество. К пострадавшему, находящемуся под напряжением, не прикасаться незащищенными (без резиновых перчаток) руками. Если пострадавший потерял сознание, после отключения тока немедленно, не дожидаясь прибытия врача, сделать искусственное дыхание.

Пожароопасность и средства пожаротушения

В случае воспламенения горючих жидкостей или других веществ следует быстро погасить горелку, выключить электронагревательные приборы, отставить сосуды с огнеопасными веществами и принять меры к пожаротушению. Горящую жидкость надо накрыть асбестовым одеялом, а за­тем, если необходимо, засыпать песком.

Вода может служить средством огнетушения при воспламенении жид­костей, смешивающихся с ней.

Воду нельзя применять для тушения горящих жидкостей, не смешивающихся с ней (например: бензола, эфира и т. п.). Горение при этом может усилиться.

Водой нельзя тушить электроустановки и элект­ропроводку, находящиеся под напряжением.

Ни в коем случае нельзя тушить водой вещества, способные вступать с ней в химическую реакцию (щелочные металлы, гидриды металлов, карбид кальция и др.), так как это может привести к взрыву.

Для тушения пожара в химических лабораториях используют ручные огнетушители: пенные (ОП-б, ОП-М) и углекислотные.

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ. ПРИНЦИПЫ ЗАБОРА МАТЕРИАЛА ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ

Целью лабораторных исследований является оценка функционального состояния органов. С учетом ограниченных возможностей непосредственного исследования органов, их оценка обычно проводится через биохимические показатели в доступном для забора биологическом материале.

В лабораторных биохимических исследованиях используют кровь, мочу, кал, спинно-мозговую жидкость, желудочное и дуоденальное содержимое, отфильтрованные жидкости (экссудаты, транссудаты), пот, слюну, амниотическую жидкость и др.

Полученные во время обычных исследований данные указывают на состояние организма на момент забора материала. Дополнительную информацию дают наблюдения биохимических изменений во времени, например, суточное изменение содержания глюкозы. Очень полезны также функциональные исследования (в условиях определённых нагрузок).

Получение биологического материала для исследования состоит из нескольких основных этапов:

1. Стандартная подготовка больного. Чаще всего забор материала проводят у больного натощак (не употребляет еду в течение 12 часов), с 6.00 до 8.00.