Работа 6. Реакции на витамин р (рутин)

Под термином витамин Р объединяется группа веществ – катехины, флавины, флавононы и др., которые проявляют сходную биологическую активность: повышают резистентность капилляров, участвуют в окисли­тельно­-восстановительных реакциях, функционально связаны с витамином С.

1. Реакция с хлоридом железа (III). Хлорид железа образует с рутином комплексные соединения, окрашенные в зеленый цвет.

Ход работы. К 1–2 мл насыщенного водного раствора рутина добавить несколько капель 1 % раствора хлорида железа. Развивается окраска вследствие образования комплексного соединения хло­рида железа с рутином.

2. Реакция с концентрированной H₂SO₄. Концентрированная серная кислота образует с флавонами и флавонолами соли, растворы которых имеют ярко-желтую окраску.

Ход работы. К 1–2 мл насыщенного водного раствора рутина осторожно по стенке пробирки добавить 1 мл концентрированной H₂SO₄. На границе раздела возникает окрашенное в желтый цвет кольцо.

Работа 7. Реакция на витамин А (ретинол)

Витамин А участвует в процессах фоторецепции (входит в состав простетической группы хромопротеина, родопсина), участвует в регуляции проницаемости биомембран, в окислительно-восстановительных реакциях, обладает антиоксидантными свойствами.

Серная кислота отнимает от витамина А воду с образованием цветных продуктов реакции. Аналогичную реакцию дает провитамин А – каротин.

Ход работы. В сухую пробирку внести 1 каплю рыбьего жира в хлороформе, добавить 1 каплю концентрированной H₂SO₄. Развивается синее окрашивание, переходящее в буро-красное.

Для обнаружения провитамина А взять кусочки мякоти ягод шиповника, добавить хлороформ (1/3 пробирки), встряхивать несколько минут. К нескольким каплям экстракта добавить 1 каплю концентрированной H₂SO₄.

Работа 8. Бромхлороформная проба на витамин D (кальциферолы)

Витамин D участвует в регуляции транспорта кальция и фосфатов через биологические мембраны.

Ход работы. В сухую пробирку внести 1–2 капли рыбьего жира и 2–4 капли раствора брома в хлороформе. Раствор витамина D с раствором брома в хлороформе приобретает зелено-голубой цвет.

Работа 9. Реакция на викасол (водорастворимый аналог витамина К)

Витамин К участвует в биосинтезе протромбина и других факторов свертывания крови.

Ход работы. К 5 каплям спиртового раствора викасола добавить 5 капель раствора цистеина и 4 капли NаОН. Раствор викасола в щелочной среде при добавлении цистеина окрашивается в желто-оранжевый цвет.

Работа 10. Качественная реакция на витамин Е (токоферол)

Витамин Е обладает антиоксидатным действием, участвует в окислительно-восстановительных реакциях, входит в состав биомембран, у многих животных является «витамином размножения».

Ход работы. В сухую пробирку внести 5 капель 0,1 % спиртового раствора витамина Е и прибавить 10 капель концентрированной HNO₃. При встряхивании образуется эмульсия, которая постепенно окрашивается в красный цвет. При стоянии эмульсия расслаивается и окраска остается в верхнем масляном слое. Реакция обусловлена окислением токоферола до продукта, имеющего хиноидную структуру красного цвета. Цветную реакцию с HNO₃ используют для количественного определения витамина Е.

Особенности структуры и функций некоторых витаминов вместе с результатами работ занести в таблицу:

Витамин, название	Структура	Функции	Качественная реакция
			Реактивы	Цвет, вид	Чем обусловлена
В1 (тиамин)
В2 (рибофлавин) и т. д.

Лабораторная работа 2. Количественное определение витаминов

Работа 1. Количественное определение витамина С (аскорбиновой кислоты)

Витамин С (аскорбиновая кислота) выполняет коферментные функции в реакциях гидроксилирования, в том числе необходим для созревания коллагена, метаболизма тирозина, а также является водорастворимым антиоксидантом, вместе с рутином необходим для поддержания эластичности и прочности кровеносных сосудов.

Принцип метода. Аскорбиновая кислота способна к окислительно-восста­новительным превращениям. В качестве восстанавливающегося компонента используется какое-либо вещество, например, 2,6-дихлорфенолиндофенол (2,6-ДХФИФ), изменяющий окраску при переходе из окисленной формы в восстановленную и наоборот.

Ход работы. В колбу налить 1 мл яблочного сока или другой исследуемой жидкости, добавить 4 мл 2 % раствора НCl и титровать смесь раствором красителя до слабо-розовой окраски, не исчезающей в течение 30 сек.

Рассчитать количество аскорбиновой кислоты (г/л) в исследуемом растворе по формуле, принимая во внимание, что концентрация раствора красителя 0,01 N, грамм-эквивалент аскорбиновой кислоты – 88:

С= N × V × Э,

где N – концентрация раствора красителя;

Э – грамм-эквивалент аскорбиновой кислоты (равен 88 г);

V – количество раствора красителя, затраченного на титрование (л).