Фармакогностическое изучение растений рода тимьян (Thymus L.) как перспективного источника получения фитопрепаратов

Фракции 7-18, содержащие вещество 3.06, объединяли, упариваи кристаллизовали из этилового спирта. Получали вещество 3.06 (24 мг).

Фракции 27-43 также объединяли, упаривали до сухого остатка, в котором хроматографически было установлено, что основную массу остатка составляет вещество 3.09 с примесью веществ 3.06 и 3.07. Для получения вещества 3.09

сухой остаток растворяли в теплой воде очищенной и приготовленный раствор помещали в подготовленную колонку (диаметр 2 см, высота 40 см, сорбент сефадекс LH-90 в воде). Колонку промывали водой очищенной, собирая водные элюаты. Водные элюаты объединяли, упаривали при 600С под вакуумом до сухого остатка в результате получали вещество 3.09 (74 мг).

Вещество 3.07 было выделено препаративно из фракций 19-26 с

использованием метода хроматографии на бумаге в системе растворителей 2%

кислоты уксусной. Пятна вещества 3.07 вырезали, элюировали спиртом этиловым 70%, упаривали досуха и остатки кристаллизовали из спирта этилового.

Выделение скутеллярина

Выделение скутеллярина проводили из 100,0 г измельченной травы тимьяна Маршалла, экстрагировали сырье на кипящей водяной бане. В качестве экстрагента использовали горячую воду очищенную. Полученное водное извлечение оставляли на 24 часа, фильтровали, упаривали до небольшого объема и подкисляли кислотой хлористоводородной 18%, при этом выпадал осадок вещества 3.22 (скутеллярин) с примесью вещества 3.20. Вещество 3.22

очищали от примеси методом бумажной хроматографии в системе растворителей кислота уксусная 30%. В итоге препаративно получали вещество

3.22(73 мг).

3.2.3Идентификация выделенных фенольных соединений

Идентификацию выделенных фенольных соединений проводили,

ферментативный гидролизы, ацетилирование, щелочное расщепление,

метилирование, дезметилирование), результаты исследования дифференциальной УФ-спектроскопии, ИК-спектров, а также сравнением со стандартными и известными образцами исследуемых соединений [глава 2,

раздел 2.2.2.3].

В результате была установлена структура 20 фенольных веществ.

Вещество 3.03 – белый кристаллический порошок, имеющий приятный запах. Т.пл. 210-2120 С (таблица 9).

УФ-спектр вещества 3.03 показывает максимум поглощения при длине волны 290 и 260 нм. В УФ-спектре вещества 3.03 при взаимодействии с натрия гидроксидом отсутствует гипсохромный сдвиг в длинноволновой области, что говорит о том, что в молекуле данного соединения имеется гидроксильная группа.

С8Н8О4 Рисунок 23 – Структурная формула и УФ – спектр вещества 3.03

ИК-спектр вещества 3.03 демонстрирует полосы поглощения в области

3790 см-1 (спиртовый гидроксил), в области 2910 см-1 (метоксильная группа), в

области 1600 см-1 (бензольное кольцо), полосу поглощения в области 950 см-1

(тризамещенное бензольное кольцо).

В результате щелочной деструкции вещества 3.03 образуется протокатеховая кислота.

При сравнении вещества 3.03 с известным образцом ванилиновой кислоты установлена их идентичность. Проведенные исследования позволили

132

охарактеризовать вещество 3.03 как 3-метокси-4-оксибензойную или

ванилиновую кислоту [1].

Вещество 3.04 –кристаллический порошок белого цвета.Т.пл. 209-2110 С

(таблица 9).

УФ спектр вещества 3.04 показывает максимум поглощения в области

255 нм, что характерно для бензойных кислот.

С7Н6О3

Рисунок 24 – Структурная формула и УФ – спектр вещества 3.04

ИК-спектр вещества 3.04 демонстрирует полосы поглощения при 860см-1,

840 см-1, 775 см-1, что свидетельствует о пара замещении в бензольном кольце.

Результаты сопоставления физико-химических констант, УФ, ИК-

спектров вещества 3.04, с известным образцом n-оксибензойной кислоты,

позволили охарактеризовать вещество 3.04 как n-оксибензойную кислоту [1].

Вещество 3.05 – аморфный порошок, имеющий темно-желтую окраску.

Т. пл. 254-2560С (таблица 9). При взаимодействии с 1% железа хлорида (III)

раствором вещество 3.05 дает синюю окраску, что характерно для кислоты галловой и ее эфиров [27].

УФ-спектр соединения показывает максимум поглощения в области 272 нм.

С7Н6О5

Рисунок 25 – Структурная формула и УФ – спектр вещества 3.05

133

ИК-спектр вещества 3.05 демонстрирует полосы поглощения при 3400-

3300 см-1, характерные для фенольных оксигрупп, 1623, 1548, 1456 см-1 ,

характеризующие бензольное кольцо, 1710 см-1 (С=О, СООН группы).

Представленный ИК-спектр позволяет отнести вещество 3.05 к оксибензойным кислотам.

Для идентификации вещества 3.05 получали производное его метилового эфира. Полученный метиловый эфир кислоты по физико-химическим свойствам, хроматогрфическим характеристикам показал полную идентичность с достоверным образцом метилового эфира галловой кислоты. Его температура плавления составила 156-157ºС. Полученный метиловый эфир при добавлении

1% раствора железа хлорида (III) образует окрашивание синего цвета. После хроматографирования (пластинки «Sorbfil») данное соединение проявляется реактивом, в состав которого входят анилин и ксилоза, что свидетельствует об отсутствии в данном веществе свободной карбоксильной группы.

При расщеплении вещества 3.05 в автоклаве получали продукт деструкции, который по физико-химическим свойствам, результатам хроматографического исследования был охарактеризован как пирогаллол.

В результате смешения соединения 3.05 с кислотой галловой не наблюдали депрессии температуры плавления. Проведенные исследования позволили охарактеризовать вещество 3.05 как триоксибензойную или

галловую кислоту [43, 137].

134

Таблица 9 - Характеристика выделенных фенольных соединений

ФЛАВОНОИДЫ (АГЛИКОНЫ)

Оксикоричные кислоты

Вещества 3.06, 3.07, 3.08, 3.09 по качественным цветным реакциям и окраске флуоресценции в УФ-свете после хроматографирования были отнесены производным кислоты коричной (таблица 9) [91].

УФ-спектры (таблица 10) исследуемых веществ также подтвердили предположение, что данные соединения являются производными кислоты коричной, т.к. их максимумы поглощения находятся при длине волны 228-245

нм и 287-327 нм.

Вещество 3.06 – порошок светло-желтого цвета. Т. пл. 193-195оС

(таблица 9).

УФ-спектр (таблица 10) исследуемого соединения позволил отнести его к кислоте оксикоричной, т.к. в нем имеются максимумы поглощения в области

325, 299 плечо и 245 нм.

С9Н8О4

Рисунок 26 – Структурная формула и УФ – спектр вещества 3.06

Таблица 10 - Дифференциальная спектроскопия выделенных оксикоричных кислот в УФ-области, нм

В УФ-спектре вещества 3.06 наблюдался батохромный сдвиг на 35 нм при взаимодействии с натрия гидроксидом в спирте этиловом, что говорит о наличии оксигруппы в молекуле данного вещества. При взаимодействии с раствором циркония оксихлорида происходит батохромный сдвиг максимума поглощения длинноволновой полосы на 35 нм, что свидетельствует о наличии в структуре вещества 3,4-диоксигруппировки [91].

При щелочном плавлении вещества 3.06 происходит образование

3,4-диоксибензойной кислоты, что подтверждает наличие в структуре вещества

3.06 3,4-диоксигруппировки.

Сравнение физико-химических свойств вещества 3.06 со стандартным образцом кислоты кофейной (Fluka) показали их идентичность, на основании чего вещество 3.06 охарактеризовано как 3,4-диоксикоричная или кофейная кислота [39, 43].

Вещество 3.07 – кристаллический порошок розоватого цвета. Т. пл. 1671690С (таблица 9).

УФ-спектр вещества 3.07 (таблица 10) имеет максимумы поглощения при длине волны 320, 296 пл, 235 нм, характеризующие оксикоричные кислоты

[91]. При взаимодействии с натрия ацетатом наблюдается гипсохромный сдвиг длинноволновой полосы на 14 нм, что объясняется ионизацией натрия ацетатом карбоксильной группы вещества 3.07, что приводит к уменьшению вклада карбоксильной группы в резонанс системы, что и вызывает гипсохромный сдвиг. По данным молекулярной массы исследуемого вещества определили одну метоксильную группу.

139

С10Н10О4

Рисунок 27 – Структурная формула и УФ – спектр вещества 3.07

При щелочном плавлении вещества 3.07 образуется кислота ванилиновая

[Драник, 1967]. Результаты сравнения физико-химических свойств вещества

3.07 и стандартного образца кислоты феруловой (Acros) показали на их идентичность. Проведенные исследования позволили установить, что вещество

3.07 является 4-окси, 3-метоксикоричной или феруловой кислотой [39, 43].

Вещество 3.08 – бесцветное кристаллическое вещество. Т.пл. 212-214 0С

(таблица 9).

УФ-спектр вещества 3.08 имеет максимумы поглощения при длине волны

310, 228 нм (таблица 10). Батохромный сдвиг максимума поглощения длинноволновой полосы на 20 нм при взаимодействии с натрия гидроксидом свидетельствует о присутствии свободной гидроксикоричной группы в данном соединении.

С9Н8О3

Рисунок 28 – Структурная формула и УФ – спектр вещества 3.08

В ИК – спектре наблюдается полоса поглощения при 1310 см-1

(ароматическое кольцо), а полосы поглощения в области 1640 см-1 и 1705 см-1

свидетельствуют о наличии коричного фрагмента в молекуле вещества 3.08.

140