- •1. Принципы и современная классификация вирусов.
- •2. Вирион. Ультраструктура, химический состав, типы симметрии капсида.
- •3. Репродукция вирусов. Стадии взаимодействия вирусов с клеткой.
- •4. Методы культивирования вирусов
- •5. Способы индикации вирусов. Цпд, рга, га, внутриклеточные включения.
- •6. Методы идентификации вируса. Ртга, рн, цветная реакция.
- •7. Вирусы, их строение, биологические свойства, размножение вирусов, культивирование в живых системах. Классификация вирусов.
- •8. Вирусологический метод исследования. Средства индикации и идентификации вирусов.
- •9. Вирус бешенства. Культивирование, внутриклеточные включения. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика.
- •§ 2. Род Flavivirus.
- •11. Пикорнавирусы. Классификация. Характеристика вирусов полиомиелита, Коксакки и есно. Паттогенез, иммунитет. Лабораторная диагностика, специфическая профилактика полиомиелита.
- •§ 1. Характеристика семейства.
- •§ 2. Род Enterovirus.
- •12. Вирусы гриппа. Антигены. Классификация. Изменчивость. Патогенез заболевания. Лабораторная диагностика. Эксперсс - диагностика. Специфическая профилактика и терапия гриппа.
- •§ 1. Характеристика семейства.
- •§ 2. Род Influenzavirus a.
- •§ 3. Род Influenzavirus в.
- •§ 4. Род Influenzavirus с.
- •13. Вирус парагриппа человека: свойства, заболевания, которые вызываются. Лабораторная диагностика и профилактика.
- •§ 1. Характеристика семейства.
- •§ 2. Подсемейство Paramyxovirinae.
- •§ 1. Характеристика семейства.
- •§ 2. Род Orthohepadnavirus.
- •§ 3. Род Hepacivirus.
- •15. Вирус иммунодефицита человека (вич). Свойства, классификация. Источники инфекции, пути передачи. Патогенез.
- •§ 1. Характеристика семейства.
- •16. Вирус гепатита а, пути передачи возбудителей человеку. Характеристика вирусов. Патогенез. Лабораторная диагностика гепатита а, лечение и профилактика.
- •17. Вирусы гепатитов е, пути передачи возбудителей человеку. Характеристика вирусов. Патогенез. Лабораторная диагностика гепатита е, лечение и профилактика.
- •18. Лабораторная диагностика, профилактика и лечение вич - инфекций.
- •19. Этиология внутрибольничных инфекций.
- •20. Профилактика внутрибольничных инфекций. Методы микробиологического котроля за внутрибольничными инфекциями, их значение. Профилактика внутрибольничных инфекций
- •21. Задачи клинической микробиологии, разновидности и свойства условно - патогенных организмов.
- •22. Вирус герпеса
- •23. Онкогенные вирусы
- •24. Аденовирусы
7. Вирусы, их строение, биологические свойства, размножение вирусов, культивирование в живых системах. Классификация вирусов.
Вирусы — мельчайшие микробы, не имеющие клеточного строения, белоксинтезирующей системы, содержащие только ДНК или РНК. Относятся к царству Vira. Явл. облигатными внутриклеточными паразитами, вирусы размножаются в цитоплазме или ядре клетки. Они — автономные генетические структуры. Отличаются особым — разобщенным (дисъюнктивным) способом размножения (репродукции): в клетке отдельно синтезируются нуклеиновые к-ты вирусов и их белки, затем происходит их сборка в вирусные частицы. Сформированная вирусная частица называется вирионом.
-
В основу классификации вирусов положены следующие категории:
-
тип нуклеиновой кислоты (ДНК или РНК), ее структура, количество нитей;
-
размер и морфология вирионов, количество капсомеров и тип симметрии;
-
наличие суперкапсида;
-
чувствительность к эфиру и дезоксихолату;
-
место размножения в клетке;
-
антигенные свойства и пр.
Морфологию вирусов изучают с помощью электронной микроскопии,т.к. их размеры малы (18-400 нм).
По формам вирионы мб: палочковидные, пулевидные(вирус бешенства), сферической (вирусы полиомиелита, ВИЧ), нитевидной, в виде сперматозоида (многие бактериофаги). Различают просто устроенные и сложно устроенные вирусы.
Простые, или безоболочечные, вирусы состоят из нуклеиновой кислоты и белковой оболочки, называемой капсидом. Капсид состоит из повторяющихся морфологических субъединиц — капсомеров. Нуклеиновая кислота и капсид взаимодействуют друг с другом, образуя нуклеокапсид.
Сложные, или оболочечные, вирусы снаружи капсида окружены липопротеиновой оболочкой (суперкапсидом, или пеплосом). Эта оболочка является производной структурой от мембран вирус-инфицированной клетки. На оболочке вируса расположены гликопротеиновые шипы, или шипики (пепломеры). Под оболочкой некоторых вирусов находится матриксный М-белок.
Тип симметрии. Капсид может иметь спиральный, кубический или сложный тип симметрии. Икосаэдрический тип симметрии обусловлен образованием изометрически полого тела из капсида, содержащего вирусную нуклеиновую кислоту (например, у вирусов гепатита А, герпеса, полиомиелита). Спиральный тип симметрии обусловлен винтообразной структурой нуклеокапсида.
Методы культивирования вирусов
Для культивирования вирусов используют культуры клеток, куриные эмбрионы и чувствительных лабораторных животных. Т.к. вирусы е растут на искусственных средах.
Культуры клеток. готовят из тканей животных или человека. Культуры подразделяют на первичные (неперевиваемые), полуперевиваемые и перевиваемые.
Приготовление первичной культуры клеток складывается из нескольких последовательных этапов: измельчения ткани, разъединения клеток путем трипсинизации, отмывания полученной однородной суспензии изолированных клеток от трипсина с последующим суспендированием клеток в питательной среде, обеспечивающей их рост, например в среде 199 с добавлением телячьей сыворотки крови.
Перевиваемые культуры в отличие от первичных адаптированы к условиям, обеспечивающим им постоянное существование invitro, и сохраняются на протяжении нескольких десятков пассажей. Перевиваемые однослойные культуры клеток приготовляют из злокачественных и нормальных линий клеток, обладающих способностью длительно размножатьсяinvitro в определенных условиях. К ним относятся злокачественные клетки HeLa, первоначально выделенные из карциномы шейки матки, Нер-3 (из лимфоидной карциномы), а также нормальные клетки амниона человека, почек обезьяны и др.
К полуперевиваемым культурам относятся диплоидные клетки человека. Они представляют собой клеточную систему, сохраняющую в процессе 50 пассажей (до года) диплоидный набор хромосом, типичный для соматических клеток используемой ткани. Диплоидные клетки человека не претерпевают злокачественного перерождения и этим выгодно отличаются от опухолевых.
О размножении (репродукции) вирусов в культуре клеток судят по цитопатическому действию (ЦПД), которое может быть обнаружено микроскопически и характеризуется морфологическими изменениями кл. Характер ЦПД вирусов используют как для их обнаружения (индикации), так и для ориентировочной идентификации, т. е. определения их видовой принадлежности.
Один из методов индикации вирусов основан на способности поверхности клеток, в которых они репродуцируются, адсорбировать эритроциты — реакция гемадсорбции. Для ее постановки в культуру клеток, зараженных вирусами, добавляют взвесь эритроцитов и после некоторого времени контакта клетки промывают изотоническим раствором хлорида натрия. На поверхности пораженных вирусами клеток остаются прилипшие эритроциты.
Другой метод — реакция гемагглютинации (РГ). Применяется для обнаружения вирусов в культуральной жидкости культуры клеток либо хорионаллантоисной или амниотической жидкости куриного эмбриона.
Количество вирусных частиц определяют методом титрования по ЦПД в культуре клеток. Для этого клетки культуры заражают десятикратным разведением вируса. После 6—7-дневной инкубации их просматривают на наличие ЦПД. За титр вируса принимают наибольшее разведение, которое вызывает ЦПД в 50 % зараженных культур. Титр вируса выражают количеством цитопатических доз.
Более точным количественным методом учета отдельных вирусных частиц является метод бляшек.
Некоторые вирусы можно обнаружить и идентифицировать по включениям, которые они образуют в ядре или цитоплазме зараженных клеток. Куриные эмбрионы. Куриные эмбрионы по сравнению с культурами клеток значительно реже бывают контаминированы вирусами и микоплазмами, а также обладают сравнительно высокой жизнеспособностью и устойчивостью к различным воздействиям. Для получения чистых культур риккетсий, хламидий и ряда вирусов в диагностических целях, а также для приготовления разнообразных препаратов (вакцины, диагностикумы) используют 8—12-дневные куриные эмбрионы. О размножении упомянутых микроорганизмов судят по морфологическим изменениям, выявляемым после вскрытия эмбриона на его оболочках. О репродукции некоторых вирусов, например гриппа, оспы, можно судить по реакции гемагглютинации (РГА) с куриными или другими эритроцитами. К недостаткам данного метода относятся невозможность обнаружения исследуемого микроорганизма без предварительного вскрытия эмбриона, а также наличие в нем большого количества белков и других соединений, затрудняющих последующую очистку риккетсий или вирусов при изготовлении различных препаратов. Лабораторные животные. Видовая чувствительность животных к определенному вирусу и их возраст определяют репродуктивную способность вирусов. Во многих случаях только новорожденные животные чувствительны к тому или иному вирусу (например, мыши-сосунки — к вирусам Коксаки). Преимущество данного метода перед другими состоит в возможности выделения тех вирусов, которые плохо репродуцируются в культуре или эмбрионе. К его недостаткам относятся контаминация организма подопытных животных посторонними вирусами и микоплазмами, а также необходимость последующего заражения культуры клеток для получения чистой линии данного вируса, что удлиняет сроки исследования.
Репродукция вирусов. Стадии взаимодействия вирусов с клеткой.
Размножение вирусов происходит особым, ни с чем не сравнимым способом. Сначала вирионы проникают внутрь клетки, и освобождаются вирусные нуклеиновые кислоты. Затем «заготавливаются» детали будущих вирионов. Размножение заканчивается сборкой новых вирионов и выходом их в окружающую среду.
Встреча вирусов с клетками начинается с его адсорбций, то есть прикрепления к клеточной стенки, плазматической мембране клетки. Причём каждый вирион способен прикрепляться лишь к определённым клеткам, имеющие специальные рецепторы. На одной клетке могут адсорбироваться десятки и даже сотни вирионов. Затем начинается внедрение или проникновение вириона в клетку, которое осуществляет она сама. Этот процесс называется виропексисом.
Клетка как бы «втягивает» прикрепившихся вирионов внутрь. Более просто устроены бактерии не способны сами захватывать вирионы из окружающей среды. Этим, по-видимому, и можно объяснить наличие у поражающих их вирусов сложного и совершенного аппарата, подобно шприцу, впрыскивающего нуклеиновые кислоты.
В зараженной клетке бактериальные ферменты репликации синтезируют комплементарную ей цепь, которая служит матрицей для образования фаговых ДНК. Они соединяются с фаговыми белками, также синтезированные бактериальными ферментами, и новые фаги покидают клетку-хозяина.
Вирусы не способны размножаться на питательных средах - это строгие внутриклеточные паразиты. Более того, в отличие от риккетсий и хламидий, вирусы в клетке хозяина не растут и не размножаются путем деления. Составные части вируса - нуклеиновые кислоты и белковые молекулы синтезируются в клетке хозяина раздельно, в разных частях клетки - в ядре и в цитоплазме. При этом клеточные белоксинтезирующие системы подчиняются вирусному геному, его НК.
Репродукция вируса в клетке происходит в несколько фаз:
-
Первая фаза - адсорбция вируса на поверхности клетки, чувствительной к данному вирусу.
-
Вторая фаза - проникновение вируса в клетку хозяина путем виропексиса.
-
Третья фаза - «раздевание» вирионов, освобождение нуклеиновой кислоты вируса от суперкапсида и капсида.
У ряда вирусов проникновение нуклеиновой кислоты в клетку происходит путем слияния оболочки вириона и клетки-хозяина. В этом случае вторая и третья фазы объединяются в одну.