§ 2. Род Orthohepadnavirus.

Название рода происходит от латинского слова orthos – правильный и английской аббревиатуры ДНК – DNA. Род включает гепаднавирусы млекопитающих, у которых геномные ДНК содержат 3,2-3,3_*10³ пар нуклеотидов и имеют правильную циркулярную форму. ДНК ВГВ наименьшая среди ДНК вирусов животных.

ВГВ

История открытия. Поверхностный антиген ВГВ был обнаружен Б. Блюмбергом в 1964 г. в крови австралийского аборигена, в связи с чем этот антиген длительное время называли «австралийским». Сам вирус гепатита В впервые обнаружен и описан Д. Дейном в 1970 г. Синоним полных вирионов ВГВ – «частицы Дейна».

Особенности вируса. Полный вирион сферической формы, диаметром 42-45 нм, имеет суперкапсид липидной природы толщиной 7 нм. Капсид икосаэдрического типа симметрии, диаметром 27 нм, толщиной 2 нм, состоит из 240 капсомеров, содержит геном (рис. 1).

Наряду с полными вирионами, встречаются в гораздо большем количестве частицы, состоящие лишь из фрагментов наружной оболочки. Они могут быть сферическими с диаметром 16-25 нм и нитевидными с диаметром 10-20 нм и длиной до 200 нм. Нитевидные структуры являются агрегатами сферических частиц. Частицы содержат поверхностный антиген вируса и накапливаются в результате избыточной продукции поверхностного компонента частицы Дейна.

Геном ВГВ гаплоиден, представлен кольцевой двухниточной ДНК, состоящей из 3,2_*10³ пар нуклеотидов. ДНК имеет 4 открытых рамки считывания, кодирующих структурные, функциональные и регуляторные белки вируса. В составе генома ВГВ имеется минимум 7 генов, в том числе S, С, Р и Х, которые сильно перекрываются. Ген S (вторая рамка считывания) кодирует главный белок оболочки ВГВ и содержит всю информацию об НВs-антигене. Гену S предшествуют две зоны: пре-S₁ и пре-S₂. Эти зоны ДНК берут вместе с геном S участие в синтезе других белков суперкапсида. Ген S и участок пре-S₂ кодируют средний белок суперкапсида, ген S, участки пре-S₂ и пре-S₁ кодируют большой белок суперкапсида. В зоне пре-S₂ заложена информация об участке связывания с альбуминовым рецептором. В зоне пре-S₁ кодируются структуры, обеспечивающие проникновение ВГВ в гепатоцит. Ген С (третья рамка считывания) кодирует белок капсида, в который входят HBcAg и HbeAg. Гену С предшествует небольшая зона пре-С, которая кодирует белок, принимающий участие в синтезе HbcAg. Кроме того, гидрофобный белок, кодированный зоной пре-С, участвует в композиции вирионов. Ген Р (первая рамка считывания) – самый большой ген, в него входят участки почти всех других генов. Ген Р кодирует ферменты, участвующие в репликации вируса гепатита В. Ген Х (четвертая рамка считывания) находится в так называемых липучих концах вирусной ДНК. Ген Х кодирует белок с трансактивирующим действием, то есть белок активирует деятельность всех вирусных генов. ДНК кодирует ДНК-полимеразу и протеинкиназу.

В составе ВГВ обнаружено 4 антигена: НВs, HBc, Hbe, HBx. НВs-антиген (ранее именовался “австралийским антигеном”) представляет собой гликопротеин с липидным компонентом, который содержится во внешней оболочке вириона. НВs-антиген имеет 2 полипептидных фрагмента: 1) пре-S2 – полиглобулиновый рецептор, ответственный за адсорбцию вируса гепатита В на аналогичных рецепторах гепатоцитов. 2) пре-S1 – обладает выраженными антигенными свойствами. НВs-антиген обнаруживается в крови. НВс-антиген является нуклеопротеином; содержится в капсиде вирионов, находящихся в ядрах гепатоцитов, не поступает в кровь. НВе-антиген отщепляется от НВс-антигена при его прохождении через мембрану гепатоцитов, вследствие чего обнаруживается в крови. НВх-антиген наименее изучен, участвует в опухолевой трансформации гепатоцитов. НВх-антиген является многофункциональным регуляторным протеином. Он может как стимулировать апоптоз гепатоцитов за счет усиления экспрессии белков гена FAS, так и подавлять апоптоз путем ингибиции белков гена р53. НВх-антиген способен стимулировать транскрипцию и подавлять репаративную систему гепатоцитов. В организме больных ВГВ синтезируются антитела к 3 антигенам: НВs, НВс, Нве.

Внутри вириона содержится связанная с геномной ДНК ДНК-полимераза, обладающая свойствами обратной транскриптазы и эндогенной полимеразы.

Резистентность. ВГВ обладает необыкновенно высокой устойчивостью к высоким температурам: при 98˚С сохраняется 2 минуты, а при 60˚С - несколько часов. Инфекционные и антигенные свойства вируса сохраняются при ультрафиолетовом облучении плазмы крови и ее хранении при –20˚С. Вирус чувствителен к глютаральдегиду, детергентам, эфиру, формальдегиду.

Культивирование. ВГВ не репродуцируется в куриных эмбрионах и культурах клеток, за исключением первичных культур гепатоцитов эмбриона и взрослого человека. К ВГВ чувствительны человекообразные обезьяны (особенно шимпанзе), пекинские утки и трансгенные мыши.

Эпидемиология. ВГВ распространены по всему миру. Источник инфекции – люди, больные острыми и хроническими формами гепатитов, циррозом и первичной карциномой печени. Механизм передачи – перкутанный, реализуемый половым, парентеральным, трансплацентарным и трансплантационным путями.

Патогенез. Выделяют следующие фазы патогенеза вирусного гепатита В: 1) внедрение возбудителя; 2) первичная вирусемия; 3) гепатогенная фаза (паренхиматозная диффузия); 4) фаза нестойкой локализации и повторной генерализации инфекции (вторичная вирусемия); 5) иммуногенез и освобождение организма от возбудителя. При ациклическом течении заболевания освобождение организма от возбудителя не наступает, поскольку геном ВГВ интегрирует в ДНК гепатоцитов.

Последовательность событий в патогенезе вирусного гепатита В такова: ВГВ проникают в гепатоциты и начинают в них размножаться, не приводя к гибели. Поражение печени происходит под действием НК-, К-, Т-киллеров и антител. Разрушение гепатоцитов сопровождается повышением в крови трансаминаз и реже – билирубина. Выраженность иммунной атаки макроорганизма зависит от фенотипа НLА и экспрессии генов апоптоза FAS. Элиминация инфицированных вирусом гепатоцитов приводит к выздоровлению. Дефектность в системе интерфероногенеза замедляет саногенез при вирусных гепатитах.

Развитие первичной карциномы печени при инфекции, вызванной ВГВ, является следствием 3 событий: 1) инактивации гена апоптоза р53 при взаимодействии НВх-антигена с белков р53; 2) блокады НВх-антигеном репаративной системы клеточной ДНК, что увеличивает частоту инактивирующих мутаций в гене р53; и 3) активации клеточного протоонкогена cis вследствие близкой к нему интеграции ДНК ВГВ.

Клиника. Инкубационный период при остром вирусном гепатите В составляет 6-24 недели в зависимости от инфицирующей дозы. Преджелтушный период характеризуется возникновением умеренной лихорадки, слабости, недомогания, снижением аппетита, болями в мышцах и крупных суставах. Желтушный период характеризуется развитием желтухи кожи, слизистых оболочек и склер, ахолией кала, потемнением мочи, увеличением печени и селезенки. Исходом вирусного гепатита В может быть: выздоровление, переход в хронический гепатит и цирроз печени, развитие гепатоцеллюлярной карциномы, летальный исход в случае молниеносного тяжелого течения болезни.

Иммунитет. При циклическом течении вирусного гепатита В иммунитет стерильный, длительный или пожизненный, обусловленный антигенспецифическими Т-киллерами и антителами. При ациклическом течении вирусного гепатита В иммунитет нестерильный: наряду с циркуляцией в крови защитных антител и Т-киллеров имеет место продукция вирусных антигенов и инфекционных вирионов.

Лабораторная диагностика. Основным методом диагностики является серологический (табл.). Возможно применение электронной иммунной и люминесцентной микроскопии, а также молекулярно-генетического метода. Материалом для исследования является преимущественно кровь больного. При серологической диагностике используются ИФА и РИА, позволяющие выявлять как специфические антитела к антигенам ВГВ, так и сами антигены. Возможно определение HВsAg методом РПГА.

Диагностическое значение имеет выявление в сыворотке больных HВsAg, который появляется в инкубационном периоде и исчезает при благоприятном течении острого гепатита через 6-8 месяцев после начала заболевания. При развитии хронических форм вирусного гепатита В HВsAg циркулирует в крови длительное время.

Динамика синтеза антител против различных антигенов неодинакова: в продромальном периоде вирусного гепатита В появляются НВс-антитела, затем – НВе-антитела и лишь в последнюю очередь после исчезновения HвsAg из крови, появляются анти-HВs-антитела (рис. 2). По специфике антител к вирусным антигенам можно судить о периоде заболевания. При остром вирусном гепатите В в крови обнаруживаются HВsAg и анти-HВc-Ig М; при хронических формах – HВsAg, НВеAg, анти-HВc-Ig G, анти-НВе-Ig G.

О выздоровлении при ВГВ свидетельствует наличие в сыворотке крови анти-HВs-Ig G. Напротив, раннее появление анти-HВs-Ig М в остром периоде вирусного гепатита В является неблагоприятным симптомом развития печеночной комы.

В последние годы для диагностики вирусного гепатита В применяется ПЦР, позволяющая выявлять ДНК ВГВ в сыворотке крови и других объектах исследования.

Лечение. В качестве противовирусных препаратов используются интерфероны (реаферон, лаферон, роферон и др.), а так же индукторы продукции эндогенного интерферона (амизон, мефенаминовая кислота).

Профилактика. Неспецифическая профилактика вирусного гепатита В включает: 1) выявление, локализацию и санацию источников инфекции - больных острыми, хроническими гепатитами и циррозами печени; 2) разрыв механизма и путей передачи ВГВ, согласно противоэпидемических мероприятий, применяемых при ликвидации инфекций наружных кожных покровов (см главу «Эпидемиология вирусных инфекций»).

Специфическая профилактика вирусного гепатита В проводится генно-инженерной вакциной, содержащей HВsAg. В Украине вакцинация против вирусного гепатита В входит в календарь обязательных прививок детского населения, утвержденного Приказом №14 МОЗ Украины. Вакцинация трехкратная: первое введение вакцины – в 1 месяц, второе введение – через 1 месяц после первого, третье введение – через 5-6 месяцев после второго. Разовая доза вакцины для новорожденных и для лиц моложе 20 лет – 0,5 мл; для лиц старше 20 лет – 1 мл.