- •1. Принципы и современная классификация вирусов.
- •2. Вирион. Ультраструктура, химический состав, типы симметрии капсида.
- •3. Репродукция вирусов. Стадии взаимодействия вирусов с клеткой.
- •4. Методы культивирования вирусов
- •5. Способы индикации вирусов. Цпд, рга, га, внутриклеточные включения.
- •6. Методы идентификации вируса. Ртга, рн, цветная реакция.
- •7. Вирусы, их строение, биологические свойства, размножение вирусов, культивирование в живых системах. Классификация вирусов.
- •8. Вирусологический метод исследования. Средства индикации и идентификации вирусов.
- •9. Вирус бешенства. Культивирование, внутриклеточные включения. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика.
- •§ 2. Род Flavivirus.
- •11. Пикорнавирусы. Классификация. Характеристика вирусов полиомиелита, Коксакки и есно. Паттогенез, иммунитет. Лабораторная диагностика, специфическая профилактика полиомиелита.
- •§ 1. Характеристика семейства.
- •§ 2. Род Enterovirus.
- •12. Вирусы гриппа. Антигены. Классификация. Изменчивость. Патогенез заболевания. Лабораторная диагностика. Эксперсс - диагностика. Специфическая профилактика и терапия гриппа.
- •§ 1. Характеристика семейства.
- •§ 2. Род Influenzavirus a.
- •§ 3. Род Influenzavirus в.
- •§ 4. Род Influenzavirus с.
- •13. Вирус парагриппа человека: свойства, заболевания, которые вызываются. Лабораторная диагностика и профилактика.
- •§ 1. Характеристика семейства.
- •§ 2. Подсемейство Paramyxovirinae.
- •§ 1. Характеристика семейства.
- •§ 2. Род Orthohepadnavirus.
- •§ 3. Род Hepacivirus.
- •15. Вирус иммунодефицита человека (вич). Свойства, классификация. Источники инфекции, пути передачи. Патогенез.
- •§ 1. Характеристика семейства.
- •16. Вирус гепатита а, пути передачи возбудителей человеку. Характеристика вирусов. Патогенез. Лабораторная диагностика гепатита а, лечение и профилактика.
- •17. Вирусы гепатитов е, пути передачи возбудителей человеку. Характеристика вирусов. Патогенез. Лабораторная диагностика гепатита е, лечение и профилактика.
- •18. Лабораторная диагностика, профилактика и лечение вич - инфекций.
- •19. Этиология внутрибольничных инфекций.
- •20. Профилактика внутрибольничных инфекций. Методы микробиологического котроля за внутрибольничными инфекциями, их значение. Профилактика внутрибольничных инфекций
- •21. Задачи клинической микробиологии, разновидности и свойства условно - патогенных организмов.
- •22. Вирус герпеса
- •23. Онкогенные вирусы
- •24. Аденовирусы
6. Методы идентификации вируса. Ртга, рн, цветная реакция.
Реакция нейтрализации основана на способности АТ нейтрализовать инфекционную активность вирусов в культурах ткани, РКЭ, чувствительных лабораторных животных.
Из вирус-содержащего материала готовят десятикратные разведения и добавляют к ним специфическую сыворотку в разведении в соответствии с титром, указанным на этикетке ампулы. Смеси вирус-сыворотка инкубируют 30 — 60 мин при 37 °С для обеспечения связывания антигенов с антителами, после чего смесью заражают культуру ткани, куриные эмбрионы или лабораторных животных.
Реакция считается положительной в случае нейтрализации ЦПД в культуре клеток, а также при отсутствии патологических изменений в куриных эмбрионах или в организме животных.
По результатам РН высчитывается индекс нейтрализации ( отношение титра вируса в контроле к титру вируса в опыте). При индексе нейтрализации менее 10 реакция расценивается как отрицательная, от 11 до 49 — сомнительная, от 50 и выше — положительная.
Другим вариантом РН является цветная проба. Положительный результат пробы в случае соответствия вируса противовирусным антителам проявляется блокадой репродукции вируса, клетка при этом остается жизнеспособной, вырабатывая кислые продукты метаболизма, под влиянием которых цвет индикатора (фенолового красного) меняется с красного на желтый.
Для постановки пробы в пробирки вносят по 0,25 мл рабочего разведения вируса и соответствующую антисыворотку. Смесь выдерживают при комнатной температуре 30-60 мин, добавляют в каждую пробирку по 0,25 мл клеточной суспензии и закрывают их резиновыми пробками. Пробирки инкубируют в термостате при 370 С 6-8 дней, результаты реакции учитывают по изменению цвета индикатора (красный цвет индикатора соответствует щелочному характеру рН - 7,4 указывая на репродукцию вируса и подавление метаболизма клеток; желтый цвет свидетельствует о кислом рН - ниже 7,2 в результате нейтрализации вируса антителами и активном метаболизме клеток с выработкой кислых продуктов обмена).
Реакция торможения гемаггяютинации (РТГА) является одним из вариантов РН и основана на нейтрализации гемагглютинирующих свойств вирусов специфическими антителами, что проявляется отсутствием агглютинации чувствительных эритроцитов с формированием на дне пробирки или лунки компактного осадка вместо «зонтика». РТГА используется как для определения антител в качестве метода серологической диагностики, так и для идентификации вирусов, обладающих гемагглютининами. Перед постановкой РТГА сыворотки обрабатывают периодатом калия, каолином, бентонитом, ацетоном или другими веществами для удаления неспецифических ингибиторов гемагглютинации. После этого к двукратным разведениям сыворотки добавляют равное количество вируссодержащей жидкости с активностью 4 ГЕ, смесь инкубируют 30-60 мин при оптимальной для данного вируса температуре (40, 200, 370 С), а затем добавляют равный объем 0,5-1,0% взвеси эритроцитов. Смесь снова инкубируют 30-45 мин и производят учет результатов реакции. Титром сыворотки считают ее наибольшее разведение, которое вызывает торможение гемагглютинации.
Индикация вирусов по цветной пробе. Принцип метода основан на определении кислых продуктов метаболизма, накаливающихся в клетке в процессе ее жизнедеятельности с помощью индикатора фенолового красного, меняющего свой цвет с красного в щелочной среде на оранжево-желтый в кислой среде. При заражении культуры клеток вирусами, вызывающими ЦПД (например, аденовирусы, энтеровирусы и др.), метаболизм клеток подавляется, рН среды не меняется и она остается окрашенной в красный цвет.