Контрольные вопросы.

1. Что такое химиотерапия и химиотерапевтические препараты (ХТП)? Назовите основные группы ХТП.

2. Перечислите требования, предъявляемые к ХТП.

3. Что такое спектр, бактерицидное и статическое действие ХТП?

4. Назовите источники и методы получения антибиотиков. Примеры.

5. Какие Вы знаете механизмы действия (точки приложения) антибиотиков на микроорганизмы?

6. Как классифицируют виды побочного действия антибиотиков?

7. Назовите основные виды лекарственной устойчивости микроорганизмов.

8. Какими методами определяют чувствительность микробов к антибиотикам?

Выполнение лабораторной работы

(время - 70 мин)

1. Изучить материал учебных таблиц, стендов

2. Провести постановку опыта по определению чувствительности микроорганизмов к антибиотикам диско-диффузионным методом.

3. Провести учет опыта по определению чувствительности микробов к антибиотикам диско-диффузионным методом.

4. Провести учет опыта по определению МИК (минимальной ингибирующей концентрации антибиотика) методом серийных разведений.

5. Познакомиться с набором экзаменационных антибиотиков

6. Оформить отчет о работе.

Правила оформления отчета.

1. Ответить письменно на контрольные вопросы.

2. Записать схему постановки опыта по определению чувствительности микроорганизмов к антибиотикам диско-диффузионным методом

3. Дать оценку чувствительности штамма микроорганизма к антибиотикам при использовании диско-диффузионного метода.

4. Определить МИК антибиотика методом серийных разведений.

5. Записать характеристику по 2 экзаменационным препаратам.

Дополнительный материал в помощь студенту.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ АНТИБИОТИКОВ

Перед выпуском в широкую медицинскую практику лекарственные формы антибиотиков подвергаются строгой проверке их биологической активности. Показатель биологической активности занимает ведущее место в оценке качества лекарственной форма антибиотика. Биологической активностью называют способность антибиотиков подавлять рост и размножение микроорганизмов. Количественно биологическая активность выражается в единицах действия (ЕД/мл). Для определения биологической активности вновь синтезированной лекарственной формы антибиотика применяется метод диффузии в агар. Метод основан на сравнении степени угнетения роста стандартной культуры микроорганизма (тест-микроба) в присутствии известной концентрации рабочего стандарта антибиотика и раствора антибиотика, биологическую активность которого необходимо определить. Рабочие стандарты антибиотиков готовятся и выпускаются в запаянных ампулах Государственным институтом Контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А.Тарасевича. Это специально изготовленные и очищенные образцы антибиотиков, которые хранят при температуре не выше 0 градусов по Цельсию. В качестве тест-микроба используют непатогенные или условно-патогенные штаммы, наиболее чувствительные к данному антибиотику. Например, для определения биологической активности антибиотиков группы пенициллинов используется штамм Staphylococcus aureus N209, для определения биологической активности антибиотиков группы аминогликозидов – штамм Bacillus cereus.

Методика определения. В чашки Петри, установленные строго на горизонтальной поверхности, разливают расплавленную и остуженную питательную среду, в которую предварительно вносят тест-культуру в определенной концентрации. После застывания питательной среды, на ее поверхности с помощью трафарета (подложенного под дно чашки Петри) расставляют 6 стерильных цилиндриков диаметром 6-8 мм или специальным пробойником делают лунки такого же диаметра. В три цилиндрика (лунки) через один пипеткой вносят 0,1 мл испытуемого раствора антибиотика, в остальные, 0,1 мл рабочего стандарта антибиотика известной концентрации. Чашки выдерживают при комнатной температуре в течение 2 часов (за это время происходит диффузия антибиотика в агар). Затем чашки инкубируют в термостате при t +37⁰C в течение 16-18 часов, после чего измеряют зону задержки тест-микроба вокруг цилиндрика (лунки). При определении биологической активности каждого образца антибиотика готовят не менее 2-х разведений препарата и для каждого разведения используется 2 чашки. На каждой чашке измеряют зоны задержки роста тест-микроба и рассчитывают среднюю арифметическую величину для испытуемого образца и рабочего стандарта антибиотика. Определяют разницу между полученными средними арифметическими величинами первого и второго разведений и по специальной таблице разности диаметров зон определяют биологическую активность испытуемого раствора антибиотика. Полученный показатель биологической активности умножают на показатель разведения и получают активность основного раствора испытуемого антибиотика.