Риваноловым методом

У животного берут кровь (у крупного рогатого скота – 1 л крови на 100 кг веса; у лошадей – 13 % крови от массы тела или 800 мл на 50 кг веса; у других видов животных – тотальное взятие крови),

Затем получают сыворотку крови (отстаивание крови при комнатной температуре, рефракция кровяного сгустка, центрифугирование).

На каждые 100 мл сыворотки крови добавляют 30 мл 3 %-ного раствора риванола (этакридин лактат).

Проводят отстаивание сыворотки крови и риванола в течение 30 минут в условиях холодильника (4°С). При этом в осадок выпадают балластные белки, гамма-глобулин остается в растворе.

Затем к раствору добавляют поваренную соль из расчета 0,5-0,8% к объему сыворотки с риванолом и проводят фильтрацию через бумажные обеззоленные фильтры.

Полученный гамма-глобулин контролируется по следующим показателям:

- процентное содержание белка;

- стерильность;

- безвредность;

- специфичность.

Определение процентного содержания белка. Проводится реф­рактометрически, с использованием рефрактометра РДУ и др. (табл 3).

Показатель преломления 10 % раствора чистого гамма-глобулина ра­вен 1,35675.

Таблица 3. Пересчет показателей преломления рефрактометра

На показатель преломления и процент белка по Рейссу

№ п/п	Показа­тель преломления	Сыворотка крови		№ п/п	Показа­тель прелом­ления	Сыворотка крови
		Отсчет по шкале	Бе­лок, %			Отсчет по шкале	Бе­лок, %
1	1,33705	25	0,63	25	1,34612	49	5,90
2	1,33743	25	0,86	26	1,34650	50	6,12
3	1,33781	27	1,08	27	1,34687	51	6,34
4	1,33820	28	1,30	28	1,34724	52	6,55
5	1,33858	29	1,52	29	1,34761	53	6,77
6	1,33906	30	1,74	30	1,34798	54	6,98
7	1,33934	31	1,96	31	1,34836	55	7,20
8	1,33972	32	2,18	32	1,34873	56	7,42
9	1,34000	33	2,40	33	1,34910	57	7,63
10	1,34,048	34	2,62	34	1,34947	58	7,85
11	1,34086	35	2,84	35	1,34948	59	8,06
12	1,34124	36	3,06	36	1,35021	60	8,28
13	1,34162	37	3,28	37	1,35058	61	8,49
14	1,34199	38	3,50	38	1,35095	62	8,71
15	1,34237	39	3,72	39	1,35132	63	8,92
16	1,34275	40	3,94	40	1,35169	64	9,14
17	1,34313	41	4,16	41	1,35205	65	9,35
18	1,34350	42	4,38	42	1,35242	66	9,57
19	1,34388	43	4,60	43	1,35279	67	9,78
20	1, 34420	44	4,81	44	1,35316	68	9,99
21	1,34463	45	5,03	45	1,35352	69	10,20
22	1,34500	46	5,25	46	1,35388	70	10,41
23	1,34537	47	5,47	47	1,35425	71	10,62
24	1,34575	48	5,68	48	1,35461	72	10,76

Практически нужно доводить растворение гамма-глобулина до пока­зателя преломления – 1,357.

Определение стерильности препарата. Проводят путем высевов гамма-глобулина на питательные среды МПБ и МПА. Посевы выдержи­вают при 37⁰ С в течение 8 суток.

Определение безвредности препарата. Контроль на безвредность проводится с использованием лабораторных животных - морских свинок и белых мышей.

Морским свинкам весом 250-350 г вводят подкожно 3 мл, а белым мышам весом 15-20 г - 0,5 мл гамма-глобулина. За животными наблю­дают 5-7 дней. За это время у морских свинок не должно быть воспали­тельных реакций на месте введения препарата, мыши должны оста­ваться здоровыми.

Контроль на специфичность. Проводят в случаях получения спе­цифического гамма-глобулина от гипериммунизированных животных. Проводится так же, как и кон­троль соответствующей иммунной сыворотки. Дозы гамма-глобулина берут в 5-10 раз меньше доз исходной сыворотки.

Для определения специфичности гамма-глобулина проводят реакцию агглютинации на стекле, используя в качестве антигена микроорганизм, антитела против которого должны находиться в препарате. При положи­тельной реакции образуются хлопья, следовательно гамма-глобулин об­ладает специфичностью.

Также вводят белым мышам подкожно 0,01 мл гамма-глобулина и 500 млн микробных клеток возбудителя. Если изменений в общем состоянии

животных не наблюдается, препарат является специфичным.

Гамма-глобулин должен храниться при температуре 4⁰-10⁰С. Срок годности гамма-глобулина - 1,5-2 года с момента изготовления препа­рата.