Содержание отчета

Приведите расчетные данные по выполнению задания 1. Проанализируйте диагностическое значение полученных результатов.

Приведите заключения по предложенным для решения задачам.

Контрольные вопросы

1. Система комплемента, состав, особенности биосинтеза.

2. Пути активации системы комплемента. Функции компонентов и субкомпонентов комплемента. Регуляция активности системы комплемента.

3. Физиологическая и патофизиологическая роль системы комплемента.

Литература

1. Лабораторный практикум по иммунологии для студентов 3 курса факультета экологической медицины: практикум.// Романовская Т.Р., Пивень Н.В., Мельникова Я.И. и др. – МГЭУ им. А.Д. Сахарова, 2006 – 44 с.

2. Лабораторный практикум по гематологии ля студентов 3 курса факультета экологической медицины: практикум.// Тарасова Е.Ф и др. – МГЭУ им. А.Д. Сахарова, 2007– 44 с.

3. Kirschfinr M. /DMW: Dtsch. Med. Wochenschr. – 1994 – 119 - №9 – p. 307-310

4. Kabat, E.A. and Mayer, M.M., Experimental Immunochemistry, 2nd ed, pp. 149-153 (1961).

5. Ляликов Ю. С., Физико-химические методы анализа, 5 изд., М., 1974.

Лабораторная работа № 3. Методы исследования уровня иммуноглобулинов в биологическом материале

Цель работы: закрепление теоретического материала по изучаемой теме, освоение методов исследования и определения количественных параметров иммуноглобулинов

Оборудование, приборы, принадлежности: холодильник, термостат, ИФА-ридер, одноканальные и многоканальные автоматические дозаторы и наконечники к ним, 96-луночные полистироловые платы, буферные растворы, ортофенилендиамин, 50% серная кислота, 30% раствора H₂O₂, анти- IgG1 антитела, конъюгат (анти-IgG1 –пероксидаза хрена), исследуемые образцы сыворотки крови.

Сведения из теории

Методы исследования Ig включают в себя определение уровня Ig разных классов и подклассов и АТ к определенным АГ. Классические методы иммунохимического анализа основаны на регистрации образованного антителами в присутствии АГ преципитата, однако для визуальной регистрации процесса преципитации необходимы высокие концентрации компонентов и длительное время проведения реакции. Результаты такого анализа не всегда можно однозначно интерпретировать и, кроме того, в большинстве случаев они носят качественный или полуколичественный характер. Кроме того, для многих одновалентных АГ (гаптенов), например гормонов, лекарственных соединений, эти методы непригодны.

Индикация образовавшегося комплекса АГ-АТ в растворе может быть осуществлена, если в один из исходных компонентов реакционной системы ввести метку - изотопную, ферментную, флуоресцентную, парамагнитную,- которая легко детектируется соответствующим физико-химическим методом.

Условно методы иммунохимического анализа можно разделить на четыре большие группы: 1) прямые (непосредственные) методы определения реакции АГ-АТ. Образующийся при этом комплекс АГ-АТ идентифицируется визуально в процессе постановки реакции агглютинации (бактериальных клеток и простейших) и гемагглютинации (реакции агглютинации эритроцитов антителами или вирусами) либо при помощи простых оптических устройств (методами нефелометрии и турбодиметрии);

2) реакции пассивной агглютинации, т.е. агглютинации частиц, с поверхностью которых связаны АГ или АТ. К этим методам относятся реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) и непрямой геммагглютинации (РНГА), латексагглютинации, коагглютинации, агглютинации частиц бентонита, желатиновых капсул, частиц сефарозы и др.;

3) индикаторные методы, основанные на использовании различного рода меток для выявления реакции АГ-АТ. Наиболее распространены иммуноферментный, иммунофлуоресцентный, радиоиммунологический анализ;

4) иммуносенсоры.