Практическая работа

З а д а н и е №1

Выявить наличие спор в фиксированном препарате из 3-х суточной культуры спорообразующих бактерий Bacillus anthracoides (окраска по Ожешко). Препарат микроскопировать с объективом 90 и иммерсией. Обратить внимание на расположение спор, характер их окраски, диаметр спор по отношению к диаметру бактериальной клетки. Определить форму и расположение клеток. Препарат зарисовать, внести методику окраски по Ожешко в протокол.

М е т о д и ч е с к и е у к а з а н и я

Окраска по Ожешко

1. Приготовить толстый и равномерный мазок, без скоплений клеток на краю стекла.

2. Нанести на мазок несколько капель 0,5%-ного раствора соляной кислоты и подогреть 1-2 мин над пламенем горелки до закипания.

3. Слить кислоту, препарат промыть водой.

4. Высушить мазок на воздухе.

5. Зафиксировать жаром.

6. Окрасить мазок карболовым фуксином Циля с подогреванием до появления паров, но не доводя краситель до кипения, красить 3-5 мин.

7. Слить краситель и промывать препарат водой.

8. Погрузить препарат на 3-5 с в 5%-ный раствор серной кислоты.

9. Обильно промыть препарат водой.

10. Докрасить препарат метиленовым синим Леффлера в течение 3-5 мин.

11. Высушить препарат на воздухе.

З а д а н и е №2

Выявить наличие капсулы в фиксированном препарате из суточной культуры капсульных бактерий Klebsiella pneumoniaе (окраска по Бурри-Гинсу). Препарат микроскопировать с объективом 90 и иммерсией. Обратить внимание на бесцветную капсулу бактериальных клеток (определить морфологию). Препарат зарисовать, внести методику окраски по Бурри-Гинсу в протокол.

М е т о д и ч е с к и е у к а з а н и я

Окраска по Бурри-Гинсу

1. На предметное стекло налить каплю разведенной (1:9) черной туши.

2. Поместить в каплю туши исследуемую суспензию бактерий и перемешать.

3. Нанести на мазок каплю смеси Никифорова на 2-3 мин (фиксация).

4. Промыть препарат водой.

5. Окрасить фуксином Циля, разведенным 1:3, в течение 3-5 мин.

6. Промыть препарат водой и высушить

7. Докрасить препарат метиленовым синим Леффлера в течение 3-5 мин.

8. Высушить препарат на воздухе.

З а д а н и е №3

Выявить наличие внутриклеточных включений (зерна волютина) в фиксированном препарате из суточной культуры возбудителя дифтерии – Corynebacterium diphtheriae (окраска по Леффлеру). Препарат микроскопировать с объективом 90 и иммерсией. Определить форму и взаимное расположение бактерий, количество зерен волютина. Препарат зарисовать, внести методику окраски по Леффлеру в протокол.

М е т о д и ч е с к и е у к а з а н и я

Окраска по Леффлеру

1. Приготовить равномерный фиксированный мазок.

2. Окрасить мазок метиленовым синим Леффлера, красить 3-5 мин.

3. Слить краситель и промывать препарат водой.

4. Высушить препарат на воздухе.

З а д а н и е №4

Изучить подвижность бактерий в препарате «раздавленная капля» из суспензии маслянокислых бактерий. Микроскопировать препарат с объективами 8 и 40, при вогнутом зеркале и опущенном конденсоре. При исследовании живых микробов следует отличать характер подвижности бактерий – активный от пассивного (броуновского движения). Препарат зарисовать.

М е т о д и ч е с к и е у к а з а н и я

Прижизненный препарат «раздавленная капля»

1. Приготовить чистое и обезжиренное предметное стекло.

2. Взять стерильной пипеткой каплю суспензии микроорганизмов.

3. Нанести каплю в центр предметного стекла.

4. Опустить ребром на край капли покровное стекло под углом 45° (поместить на каплю так, чтобы в ней не образовывались пузырьки воздуха).

Внимание: каплю нужно брать такой величины, чтобы она заполняла все пространство между покровным и предметным стеклами и не выступала за края покровного стекла. Если жидкость будет нанесена в избытке, ее необходимо удалить при помощи полосок фильтровальной бумаги.

занятие №4

Питание, дыхание и размножение микроорганизмов

Бактериологический метод диагностики

Вопросы для подготовки

1. Питательные субстраты бактерий. Типы питания прокариот – автотрофы, гетеротрофы, прототрофы, ауксотрофы и т.д.

2. Механизмы транспорта питательных веществ в клетку – пассивная диффузия, облегченная диффузия и активный транспорт.

3. Механизмы транспорта веществ из бактериальной клетки. Системы секреции прокариот, строение и функции. Примеры.

4. Питательные среды, их классификация, состав и назначение. Примеры.

5. Принципы культивирования микроорганизмов в условиях лаборатории (температура, влажность, аэрация, окислительно-восстановительный потенциал, рН среды, освещенность). Факторы роста, их химическая природа.

6. Кривая роста бактериальной популяции на жидкой питательной среде, ее подробный анализ. Система проточного культивирования бактерий, ее использование в промышленной микробиологии.

7. Пигменты микроорганизмов. Классификация по химическому составу и растворимости. Биологический смысл пигментообразования.

8. Методы выделения чистых культур бактерий. Определение понятий: «чистая культура», «накопительная культура», «биовар», «штамм», «колония».

9. Бактериологический метод диагностики (I и II этапы/дни исследования). Цель и задачи. Морфолого-культуральные свойства бактерий.

10. Заполнить таблицу «Некоторые приемы выделения чистых культур микроорганизмов»:

Метод	Принцип метода	Область применения
Посев по Коху (серийные разведения)
Посев методом «истощения»
Посев по Дригальскому
Посев на элективные среды
Посев газоном
Обработка исследуемого материала кислотой или щелочью
Прогревание исследуемого материала при 80°С
Фильтрация исследуемого материала через мембранные фильтры
Посев по Шукевичу