Практическая работа
З а д а н и е №1
Определить бактерицидную активность кожи по Клемпарской (индекс бактерицидности). Оформить протокол в виде рисунков. Сделать заключение.
|
|
0 |
20 |
М е т о д и ч е с к и е у к а з а н и я
На поверхность кожи предплечья наносят культуру E. coli. Через определенные промежутки времени определяют количество жизнеспособных бактерий методом отпечатков. На основании полученных результатов рассчитывают индексы бактерицидности (ИБ) по формуле:
ИБ = (Ко – К20)/Ко 100%,
где Ко – количество колоний сразу после контаминации кожи;
К20 – количество колоний через 20 мин после контаминации кожи.
В норме ИБ > 95%.
З а д а н и е №2
Определить активность (титр) лизоцима в слюне. Учесть полученные результаты и данные занести в таблицу. Оформить протокол. Сделать заключение.
Ответить на вопросы:
1. Почему в качестве объекта использован Micrococcus luteus?
2. Зачем поставлен контроль культуры?
3. Что такое титр лизоцима в слюне?
Разведения слюны |
1 : 20 |
1 : 40 |
1 : 80 |
1 : 160 |
1 : 320 |
1 : 640 |
Контроль культуры |
Результат |
|
|
|
|
|
|
|
«+» – лизис культуры, «–» – отсутствие лизиса
М е т о д и ч е с к и е у к а з а н и я
В пробирках готовят десятикратные разведения слюны, начиная от 1:20 и заканчивая 1:640. В контрольную пробирку вместо слюны добавляют физиологический раствор. К каждому разведению добавляют 2-х млрд. взвесь микрококка (Micrococcus luteus) по 2 капли. Ставят в термостат на 20 мин. Определяют титр лизоцима по наличию просветления в среде (полный лизис микрококка). В норме титр лизоцима > 1:320.
З а д а н и е №3
Определить титр комплемента в сыворотках морской свинки и человека по реакции иммунного гемолиза. Учесть полученные результаты и данные занести в таблицу. Оформить протокол. Сделать заключение.
Сыворотка человека, мл |
0,5 |
0,4 |
0,3 |
0,2 |
0,1 |
К |
Физ. раствор, мл |
0,5 |
0,6 |
0,7 |
08 |
0,9 |
? |
Гемолитическая система, мл |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
? |
Инкубация 45, 37°С |
||||||
Результат |
|
|
|
|
|
|
|
||||||
Сыворотка морской свинки, мл |
0,5 |
0,4 |
0,3 |
0,2 |
0,1 |
? |
Физ. раствор, мл |
0,5 |
0,6 |
0,7 |
08 |
0,9 |
? |
Гемолитическая система, мл |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
? |
Инкубация 45, 37°С |
||||||
Результат |
|
|
|
|
|
|
«+» – гемолиз (лаковая кровь), «–» – отсутствие гемолиза
М е т о д и ч е с к и е у к а з а н и я
Сыворотки морской свинки и человека последовательно разводят физиологическим раствором (как указано в таблице). К каждому разведению сыворотки добавляют 3%-ную взвесь эритроцитов барана и инактивированную гемолитическую сыворотку (гемолитическая система). Пробирки ставят в термостат на 45 мин при 37°С. Учет производят по наличию полного гемолиза. Сыворотка человека используется неразведенная, а сыворотка морской свинки предварительно разводится в 10 раз.
Титром комплемента называется его минимальное количество, вызывающее полный гемолиз.
З а д а н и е №4
Определить фагоцитарную активность лейкоцитов периферической крови (фагоцитарный показатель и фагоцитарное число). Оформить протокол в виде рисунка. Сделать заключение.
М е т о д и ч е с к и е у к а з а н и я
Фагоцитирующие клетки смешивают с суспензией бактерий в соотношении 1 : 100 и инкубируют при 37°С в течение 30 мин при постоянном перемешивании. Затем пробирки центрифугируют и осадок ресуспендируют в капле сыворотки для приготовления мазка. Мазки фиксируют смесью Никифорова и окрашивают по Романовскому-Гимзе. Готовые окрашенные мазки микроскопируют с иммерсией. В разных полях зрения находят не менее 25 лейкоцитов и считают количество микробов, поглощенное каждым лейкоцитом. Для характеристики фагоцитарной активности крови подсчитывают фагоцитарное число и фагоцитарный показатель.
Фагоцитарный показатель – это процент активно фагоцитирующих лейкоцитов в расчете на 100 лейкоцитов.
Фагоцитарное число – среднее количество микробов, поглощенных одним фагоцитом (для этого общее число поглощенных микробов делят на количество подсчитанных клеток – 25).
Для лейкоцитов крови здоровых людей фагоцитарный показатель колеблется от 40 до 80%, а фагоцитарное число – от 1 до 5.
занятие №9
Антигены. Реакции иммунитета
Реакции простой агглютинации, преципитации и нейтрализации
Вопросы для подготовки
1. Антигены. Определение. Свойства. Классификация. Химическая природа. Гаптены и полугаптены.
2. Антигенная структура бактерий. Классификация бактериальных антигенов по специфичности. Значение для практической медицины.
3. Реакции антиген – антител в диагностике инфекционных заболеваний. Два принципа реализации этих реакций. Цели и задачи. Классификация реакций иммунитета. Стадии и механизм.
4. Реакция простой агглютинации, ингредиенты, механизм, применение.
5. Реакции преципитации (кольцепреципитации, микропреципитации, флоккуляции, реакция преципитации в геле, иммуноэлектрофорез), определение, ингредиенты, механизм, применение.
6. Реакции нейтрализации, классификация, ингредиенты, механизм, применение.
7. Анатоксины, преципитирующие и антитоксические иммунные сыворотки, получение, применение.
8. Микробные диагностикумы, состав, получение, применение.
9. Агглютинирующие иммунные сыворотки (комплексные и монорецепторные): определение, специфичность, получение, применение.
10. Схематично зарисовать антигенную структуру бактериальной клетки.