Контроли ингредиентов в рск*

№ п/п	Контроли	Ингредиенты
1	сыворотки	?
2	антигена	?
3	Гемолитической сыворотки	?
4	Гемолитической системы	?
5	Эритроцитов	?
6	Комплемента	К + Э + физ. раствор (образец)

*Обозначения: С – сыворотка; А – антиген; К – комплемент; Г – гемолитическая сыворотка; Э – эритроциты; ГС – гемолитическая система

М е т о д и ч е с к и е у к а з а н и я

РСК является сложной двухэтапной серологической реакцией, в которой участвуют две системы антиген + антитело и комплемент. Первая система – основная, содержит антиген, антитело и комплемент. В случае образования комплекса антиген + антитело происходит активация и связывание комплемента, но визуально этого не видно. В качестве индикаторной системы используется вторая система, содержащая в качестве антигена эритроциты барана, а антитела – гемолитическую сыворотку, содержащую антитела к эритроцитам барана, т. е. готовый иммунный комплекс. Если антиген и антитело в первой системе соответствуют друг к другу, то образующийся комплекс активирует и связывает комплемент, поэтому при добавлении индикаторной системы гемолиза не происходит (РСК положительная). Если в первой системе антиген не соответствует антителу, то комплекс не образуется и комплемент остается свободным, активируясь и связываясь второй системой, вызывая при этом гемолиз эритроцитов (РСК отрицательная).

Результаты РСК предварительно учитывают после извлечения пробирок из термостата и окончательно – спустя 15-18 ч после пребывания их при комнатной температуре или в холодильнике.

Интенсивность реакции выражают плюсами:

++++ – реакция резко положительная, характеризующаяся полной задержкой гемолиза (эритроциты оседают на дно, жидкость бесцветная);

+++ – реакция положительная, характеризующаяся частичным гемолизом (лизировано  25% эритроцитов, осадок меньше, жидкость розовая);

++ – реакция положительная, характеризующаяся гемолизом (лизировано 50% эритроцитов, осадок небольшой, жидкость розовая);

+ – реакция сомнительная (лизировано 75% эритроцитов, незначительный осадок, жидкость интенсивно окрашена);

– – реакция отрицательная (лизированы все эритроциты, жидкость интенсивно окрашена и прозрачна -лаковая кровь).

Положительная реакция с интенсивностью не меньше ++ при достоверных контролях свидетельствует о наличии антител и серологическом подтверждении клинического диагноза; отрицательная реакция при достоверных контролях свидетельствует о том, что антитела не выявлены и серологически клинический диагноз не подтвержден.

З а д а н и е №3

В бактериологическую лабораторию поступил исследуемый материал (отделяемое карбункула) от больного Р., клинический диагноз: «Сибирская язва. Кожная форма?». Учесть результаты прямой РИФ с отделяемым карбункула и люминесцирующей сибиреязвенной сывороткой. Зарисовать механизм реакции. Оформить протокол. Ответить на вопросы:

1. Какой метод диагностики применен?

2. Можно ли на основании РИФ поставить окончательный диагноз?

М е т о д и ч е с к и е у к а з а н и я

Готовят фиксированный препарат-мазок из исследуемого материала, на который наносят люминесцирующую сибиреязвенную сыворотку, содержащую антитела к бациллам сибирской язвы (Bacillus anthracis), меченые флюоресцентным красителем (ФИТЦ – флюоресцеина изотиоцианат). Препарат помещают во влажную камеру, инкубируют 30 мин при 37°С, после чего промывают водой и высушивают. Учет результатов реакции осуществляется с помощью люминесцентного микроскопа, позволяющего освещать препарат ультрафиолетом, что заставляет флюорохром светиться.

При положительной РИФ – в результате соединения специфических антител, меченых флюорохромом, с антигенами микробных клеток в препарате выявляют светящиеся микроорганизмы, сходные по морфологии, размерам и взаимному расположению с предполагаемым возбудителем.

Бациллы сибирской язвы – это крупные палочки длиной до 7-8 мкм, с отрубленными концами, располагающиеся в патологическом материале короткими цепочками, парами или одиночно.

З а д а н и е №4

В анонимный кабинет обратился гражданин Я. с просьбой проверить его на инфицирование ВИЧ. Проведено исследование с применением ИФА. Учесть результаты. Зарисовать механизм реакции. Оформить протокол. Ответить на вопросы:

1. Какой метод диагностики применен?

2. Можно ли на основании ИФА поставить окончательный диагноз?

М е т о д и ч е с к и е у к а з а н и я

Для определения специфических антител используют специальные панели из полистирола, в лунках которых фиксирован инактивированный вирус или его антигены. В лунки вносят сыворотки обследуемых и инкубируют. При этом гомологичные антигену антитела прикрепляются к нему. Не прикрепившиеся антитела удаляют промыванием буферным раствором. Затем в лунки вносят антитела против иммуноглобулинов (антител) человека, меченые пероксидазой хрена. Если в исследуемой сыворотке присутствовали искомые антитела, то на данном этапе они, выступая в качестве антигена, прореагируют с мечеными античеловеческими антителами. Добавление после отмывки субстрата (пероксида водорода) и индикатора (хромоген) позволяет учесть результаты реакции. Образование продукта, окрашенного в желто-коричневый цвет, оценивается как положительная реакция.

Критерием достоверности являются контроли: с сывороткой, заведомо содержащей антиВИЧ – ИФА «+» и сывороткой, заведомо не содержащей анти-ВИЧ – ИФА «-».

З а д а н и е №5

Классифицировать набор предложенных иммунобиологических диагностических препаратов. Результаты представить в виде схемы.

Название (Н):

Классификационное положение (КП):

Действующее начало (ДН):

Получение (П):

Применение (Пр):

Способ применения (СП):

занятие №11

ФОРМЫ ИММУННОГО ОТВЕТА. Иммунопрофилактика

иммунотерапия. ИММУННЫЙ СТАТУС

Оценка иммунного статуса

Вопросы для подготовки

1. Иммунная система организма человека: центральные и периферические органы, строение и функции.

2. Клетки иммунной системы, классификация, CD номенклатура. Субпопуляции Т-лимфоцитов, рецепторы, функции.

3. Субпопуляции В-лимфоцитов, рецепторы, функции. Определение Т- и В-лимфоцитов. Реакция Е- и ЕАС-розеткообразования.

4. Система главного комплекса гистосовместимости (МНС/НLA) I, II и III класса, определение понятия, строение и функции.

5. Механизм представления Ag МНС и феномена двойного распознавания.

6. Механизм развития клеточного иммунного ответа. Роль и механизм действия Т-киллеров.

7. Механизм развития гуморального иммунного ответа (Т-зависимого и Т-независимого).

8. Медиаторы иммунного ответа (цитокины), химическая природа и классификация. Аутокринная и паракринная система регуляции.

9. Гиперчувствительность немедленного типа. Механизм возникновения. Роль в патологии человека.

10. Гиперчувствительность замедленного типа. Механизм возникновения. Роль в инфекционной патологии человека.

11. Аллергены, классификация. Кожно-аллергические пробы. Примеры.

12. Аллергический метод диагностики инфекционных заболеваний, используемые аллергены (действующее начало, механизм действия). Примеры.

13. Иммунологическая память и толерантность. Механизм развития.

14. Вакцины. Виды. Получение, показания для применения.

15. Сыворотки и иммуноглобулины лечебные, профилактические. Получение, показания для применения.

16. Противобактериальный, антитоксический и противогрибковый иммунитет (общая схема развития иммунного ответа).

17. Иммунный статус человека, методы его оценки. Понятие об иммунодефицитах, причины, методы коррекции.

18. Заполнить таблицу «Различия ГЗТ и ГНТ»:

Характеристика	ГНТ	ГЗТ
Механизм
Время развития
Десенсибилизация
Применение в микробиологических методах диагностики

19. Заполнить таблицу «Функции цитокинов»:

Распределить следующие цитокины по функциональному назначению и роли в иммунном ответе: IL-1, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-12, CXCL-8, TNF-α, β, IFN-α, IFN-γ, TGF-β

Активность цитокинов	Представители
Провоспалительные
Противовоспалительные
Активация фагоцитов
Подавление активности фагоцитов
Активация В-лимфоцитов
Активация Т-лимфоцитов
Подавление иммунного ответа

20. Заполнить таблицу «Приобретенные иммунодефициты»:

Этиологический фактор	Механизм действия	Примеры
Ионизирующая радиация
Интоксикации
Лекарственные препараты
Гормонотерапия
Патогенные вирусы
Патогенные бактерии
Дистрофия
Стресс
Соматические болезни