- •Порядок проведения занятия
- •Техника безопасности
- •1. Цели занятия
- •2. Вопросы и задания для самоподготовки
- •3. Оборудование и материалы
- •4. Общие сведения
- •5. Ход работы
- •6. Литература по теме занятия
- •Содержание
- •Методы культивирования анаэробов. Выделение и культивирование сульфатвосстанавливающих бактерий
- •Дисц. «Частная микробиология и систематика микроорганизмов» Киров 2005
- •Порядок проведения занятия
- •Техника безопасности
- •1. Цели занятия
- •2. Вопросы и задания для самоподготовки
- •4. Общие сведения
- •5. Ход работы
- •6. Литература по теме занятия
- •Содержание
- •Цианобактерии. Методы исследований. Выделение. Микроскопирование. Изучение особенностей строения клеток.
- •Дисц. «Частная микробиология и систематика микроорганизмов» Киров 2005
- •Порядок проведения занятия
- •Техника безопасности
- •1. Цели занятия
- •2. Вопросы и задания для самоподготовки
- •5. Ход работы
- •6. Литература по теме занятия
- •Содержание
- •Изучение бактерий окисляющих органические вещества. Выделение уксуснокислых бактерий. Окрашивание. Микроскопия. Индикация уксусной кислоты.
- •Дисц. «Частная микробиология и систематика микроорганизмов» Киров 2005
- •Порядок проведения занятия
- •Техника безопасности
- •1. Цели занятия
- •2. Вопросы и задания для самоподготовки
- •4. Общие сведения
- •5. Ход работы
- •6. Литература по теме занятия
- •Содержание
- •Порядок проведения занятия
- •Техника безопасности
- •1. Цели занятия
- •2. Вопросы и задания для самоподготовки
- •3. Оборудование и материалы
- •Микроскоп биологический мбр-3 или аналогичный
- •Спиртовка.
- •4. Общие сведения
- •5. Ход работы
- •6. Литература по теме занятия
- •Содержание
- •Порядок проведения занятия
- •Техника безопасности
- •1. Цели занятия
- •2. Вопросы и задания для самоподготовки
- •3. Оборудование и материалы
- •4. Общие сведения
- •5. Ход работы
- •6. Литература по теме занятия
- •Содержание
- •Порядок проведения занятия
- •Техника безопасности
- •1. Цели занятия
- •2. Вопросы и задания для самоподготовки
- •5. Ход работы
- •6. Литература по теме занятия
- •Содержание
- •Выделение спорообразующих бактерий. Методы окраски спор
- •Дисц. «Частная микробиология и систематика микроорганизмов» Киров 2005
- •Порядок проведения занятия
- •Техника безопасности
- •1. Цели занятия
- •2. Вопросы и задания для самоподготовки
- •3. Оборудование и материалы
- •Микроскоп биологический мбр-3 или аналогичный
- •Спиртовка.
- •4. Общие сведения
- •5. Ход работы
- •6. Литература по теме занятия
- •Содержание
5. Ход работы
Морфологию бактерий изучают на изолированной колонии, выращенной на агаровой пластинке чашки Петри, колонию описывают по следующей схеме:
1. Величина колонии – точечные (D – меньше 1 мм), мелкие (D – 1-2 мм), средние (D – 2-4 мм), и крупные (D – 4-6 мм и более).
2. Форма колонии - округлая, амебовидная, ризоидная.
3. Оптические свойства – прозрачная, матовая, флуоресцирующая, полупрозрачная (просвечивает), непрозрачная, блестящая.
4. Цвет – отмечают цвет колонии и выделение пигмента в среду.
5. Поверхность – гладкая, шероховатая, складчатая, бугристая.
6. Профиль – плоский, выпуклый, кратерообразный, врастающий в агар и т. д.
7. Край колонии – ровный, волнистый, лопастной, ризоидный и т. д.
8. Консистенция – маслянистая, тестообразная, вязкая, пленчатая.
При описании края и структуры колонии чашки Петри, не открывая, помещают под микроскоп дном вверх.
Для описания физиологических и биохимических признаков определяемый микроорганизм из агаровой культуры (морфологически обособленная колония), соблюдая стерильность, засевают последовательно в шесть пробирок с диагностическими питательными средами: 1-МПБ, 2-МПА-прямой, 3-МПА-косой, 4-МПЖ, 5-молоко, 6-косяки картофеля. В пробирки 2 и 4 микроорганизм пересевают уколом, в остальные - микробиологической петлей. Посевы помещают в термостат при температуре 25-28 оС, исключая пробирку с МПЖ, которую оставляют при комнатной температуре (не выше 25 оС).
Через 5-7 дней культивирования из пробирки №3 (МПА) готовят параллельно два препарата: один — прижизненный (раздавленная или висячая капля), второй — постоянный (мазок), окрашенный по Граму. Прижизненный препарат микроскопируют, пользуясь объективом ВИ-40; мазок рассматривают с объективом МИ-90. Просматривая препараты, делают зарисовки микроорганизмов, обращая внимание на форму, взаимное положение клеток и на соотношение размеров бактерий при разном увеличении микроскопа; определяют отношение к окраске по Граму.
Для изучения характера движения бактерий прижизненный препарат желательно микроскопировать в темном поле микроскопа.
Для определения рода и вида изучаемых микроорганизмов, часто пользуются определителем или таблицей. При этом выбор информационного материала основывается на объекте или среде, из которого выделены микроорганизмы. В данном опыте мы изучаем воздушную микрофлору. Ниже в качестве примера приводится таблица для определения некоторых форм бактерий, наиболее часто выделяемых из воздуха (сокращенно по Ленису).
Таблица для определения некоторых форм бактерий
(сокращенно по Ленису)
|
А. Определение родов |
|
1. |
Кокки |
2 |
|
— Палочки |
3 |
2. |
В жидкой среде рост одиночными клетками, двойчатками или неправильными скоплениями. Микрококк (Micrococcus) |
|
|
— В жидкой среде рост пакетами, напоминающими тюки товаров Сарцина (Sarcina) |
|
|
— В жидкой среде рост длинными цепочками. Стрептококк (Streptococcus) |
|
3. |
Бесспоровые формы. Бактерии (Bacterium) |
|
|
— Споровые формы. Бациллы (Bacillus) |
|
|
Б. Род Микрококк (Micrococcus) |
|
1. |
На агаре и желатине белый, серый, желтый или оранжевый рост |
2 |
|
— На агаре и желатине рост розовый до ярко-красного |
11 |
|
— На агаре и желатине рост синий. М. cyaneus Cohn. |
|
2. |
Желатина разжижается |
3 |
|
— Желатина не разжижается |
6 |
3. |
Молоко свертывается |
4 |
|
— Молоко не свертывается |
5 |
4. |
Рост белый. М. acidi lactis Kruger. |
|
|
— Рост желтый. М. citreus Passet. |
|
|
— Рост оранжевый. М. aureus (Bosenb.) Migula. |
|
5. |
Рост белый. М. butyri Keith. |
|
|
— Рост желтый. М. chromoflavus Huss. |
|
|
— Рост серо-оранжевый. М. cremoides Zimmerm. |
|
|
— Рост буро-желтый. М. badius L. и N. |
|
6. |
Молоко свертывается |
7 |
|
— Молоко не свертывается |
8 |
7. |
Рост белый. М. lactis acidi Leichm. |
|
|
Рост желтый. М. lactis acidi Marpm. |
|
|
— Рост оранжевый. М. umbilicatus Weiss. |
|
8. |
Рост белый |
9 |
|
— Рост иного цвета |
10 |
9. |
Подвижные формы. М. agilis albus Catterina. |
|
|
— Неподвижные формы. М. candicans Flugge. |
|
10. |
Рост желтый. М. sulfureus Zimmerman. |
|
|
— Рост оранжевый. М. aurantiacus Cohn. |
|
|
— Рост буро-желтый. М. versicolor Lbs. |
|
|
— Рост прозрачный. М. concentricus Zimmerman. |
|
11. |
Подвижные формы. М. agilis All Cohen. |
|
|
— Неподвижные формы М. roseus L. и N. |
|
|
В. Род Сарцина (Sarcina) |
|
1. |
На агаре и желатине белый, серый, желтый или оранжевый рост |
2 |
|
— На агаре и желатине розовый или красный рост. Sarcina rosea Schroter |
|
2. |
Рост белый или серый. Sarcina alba Zimmerm. |
|
|
— Рост желтый. Sarcina lutea Flugge. |
|
|
— Рост оранжевый. Sarcina aurantiaca Flugge. |
|
|
— Рост буро-желтый. Sarcina fulva Stubenrath. |
|
|
Г. Род Стрептококк (Streptococcus) |
|
1. |
Желатина разжижается. Sir. gracilis L. и N. |
|
2. |
— Желатина не разжижается Молоко свертывается. Str. pyogenes Bosenbach. |
2 |
|
— Молоко не свертывается. Str. Kefir Migula. |
|
|
Д. Род Бактерии (Bacterium) |
|
1. |
Рост белый до серого, субстрат не окрашивается |
2 |
|
— Рост белый до серого, субстрат окрашивается в зеленый, синий или темно-бурый цвет |
7 |
|
— Рост желтый до оранжевого |
9 |
|
— Рост розовый, красный до буро-красного |
12 |
|
— Рост синий до фиолетового |
13 |
2. |
Колонии с ровным, зазубренным или лопастным краем |
3 |
|
— Колонии с неправильными выростами или лучами. В. vulgare L. и N. |
|
3. |
Неподвижные формы |
4 |
|
— Подвижные формы |
6 |
4. |
Молоко свертывается |
5 |
|
— Молоко не свертывается. В. lactis innocuum Lbs. |
|
5. |
Газообразование на молоке. В. acidl lactici Нпрре |
|
|
— Газообразования на молоке нет. В. limbatum Marpmann |
|
6. |
Молоко свертывается, газообразования нет. В. colt Esch. |
|
|
— Молоко не свертывается, газообразования нет. В. Stutzeri L. и N. |
|
7. |
Желатина разжижается, субстрат зеленый. В. fluorescens Flugge |
|
|
— Желатина не разжижается |
8 |
8. |
Субстрат окрашивается в зеленый, реже бурый цвет. В. putidum Fl. |
|
|
— Субстрат окрашивается в синий до черного цвета. В. syncyaneum Fl. |
|
9. |
Рост ярко-желто-зеленый; очень маленькие палочки, подвижные, медленно разжижающие желатину. В. turcosutn Zimm. |
|
|
— Рост лимонно- и золотисто-желтый. Палочки неподвижны, желатина не разжижается. В. luteum Fl. |
|
|
— Рост желтовато-белый до оранжево-бурого |
10 |
|
— Рост лимонно-желтый с красным прокрашиванием субстрата. В. erythrogenes L и N. |
|
|
— Рост оранжевый до кирпично-красного |
11 |
10. |
Желатина не разжижается, неподвижные палочки. В. crenoides |
|
|
— Желатина разжижается, подвижные формы. В. ochraceum pimm. |
|
11. |
Неподвижные формы. В. fulvum Zimmerm. |
|
|
— Подвижные формы. В. chrysogloea Zopp. |
|
12. |
Желатина не разжижается, неподвижные формы. В. latericium L. и N. |
|
|
— Желатина разжижается, подвижные формы. В. prodigiosum L. и N. |
|
13. |
Рост фиолетовый. В. violaceum Schroter |
|
|
— Рост синий. В. coeruleum L. и N. |
|
|
Е. Бациллы (Bacillus) |
|
1. |
Аэробные формы |
2 |
|
— Строго анаэробные формы |
8 |
2. |
Укол в желатине с боковыми ответвлениями |
3 |
|
— Укол в желатине без ответвлений |
4 |
3. |
Ответвления тонкие, длинные, похожие на корневые мочки. Слабоподвижный бацилл. Вас. mycoides Fl. |
|
|
— Ответвления очень короткие. Неподвижный бацилл. Вас. ellenbachensis Caron |
|
4. |
Рост на картофеле в виде тонкой, просвечивающей пленки. Вас. tumescens Zopp. |
|
|
— Рост на картофеле в виде белого выпуклого налета. Вас. охаlaticus Zopp. |
|
|
— Рост на картофеле сероватый, плоский, мучнистый. Вас. subtilis Cohn |
|
|
— Рост на картофеле желтовато-бурый |
5 |
|
— Рост на картофеле с морщинистыми складками |
7 |
5. |
Медленно двигающиеся формы. Вас. megaterium De Bary |
7 |
|
— Быстро двигающиеся формы |
6 |
6. |
На агаре и желатине серый прозрачный рост; очень крупные споры с ребрышками. Вас. asterosporus A. M. |
|
|
— Желтый рост; маленькие палочки с цилиндрическими спорами. Вас. parvus A. M. |
|
7. |
Рост беловато-серый. Вас. mesentericus vulgatus Fl. |
|
|
— Рост желтоватый. Вас. mesentericus fuscus Fl. |
|
|
— Рост розовый до розовато-бурого. Вас. mesentericus ruber Fl. |
|
|
— Рост серо-синий до черно-бурого. Вас. mesentericus niger Lunt |
|
8. |
Образования масляной кислоты нет; энергичное разложение белков; спорообразование плектридиальное. Вас. putrificus Bienstov |
|
|
— Масляная кислота образуется, белки не разлагаются, спорообразование клостридиальное |
9 |
9. |
Подвижные формы. Вас. amylobacter mobilis A. M. |
|
|
— Неподвижные формы. Вас. anylobacter immobilis A. M. |
|