5. Ход работы

Для ознакомления с бактериями молочнокислого брожения можно воспользоваться готовыми молочнокислыми продукта­ми (простокваша, ацидофилин, кефир) и рассолом квашеной капусты и огурцов. Указанные продукты наносят петлей на предметное стекло и делают тонкий мазок. Мазок фиксируют и одновременно обезжиривают смесью Никифорова (10 мин).

Окрашивают в течение 3—5 мин водным раствором метиленового синего, промывают водой, высушивают и микроскопируют с объективом МИ-90. Препараты рассматривают и зарисовывают, выделяя доминирующие формы бактерий.

Для доказательства образования молочной кислоты прово­дят качественную реакцию одним из способов.

Для проведения реакции «серебряного зеркала» молочную кислоту превращают в уксусный альдегид. Реакция происходит в кислой среде при температуре кипения в присутствии КМпО₄. Результатом взаимодействия уксусного альдегида с аммиачным раствором серебра является образование металлического серебра (серебристое окрашивание).

Последовательность проведения этой качественной реак­ции на молочную кислоту следующая. В коническую колбу на 100 мл набирают пипеткой 5 мл фильтрата (кисломолочный продукт предварительно фильтруют через складчатый фильтр), добавляют 2 мл концентрированной серной кислоты и нагревают на асбесто­вой сетке до начала кипения, периодически взбалтывая. Затем, продолжая кипячение и помешивание, пипеткой по каплям приливают 5 мл 5%-ного раствора КМпО₄, который при этом обесцвечивается. В результате молочная кислота превращается в уксусный альдегид.

Для распознавания уксусного альдегида горлышко колбы без промедления накрывают фильтровальной бумагой, смочен­ной аммиачным раствором AgNO₃.

Аммиачный раствор нитрата серебра готовят следующим образом: к 1—2 мл 10%-ного раствора AgNO₃ в пробирке до­бавляют по каплям аммиак: сначала появляется осадок Ag₂O, который затем растворяется в избытке аммиака.

Аккуратно, чтобы не разорвать, фильтровальную бумагу прижимают к краям горла колбы, продолжая нагревание. Ук­сусный альдегид улетучивается и, реагируя с аммиачным рас­твором AgNO₃, вызывает почернение бумаги, имеющее сереб­ристый оттенок, — это выделяется металлическое серебро.

Другой качественной реакцией на молочную кислоту служит реакция с тиофеном. Один из молочнокислых продуктов фильтруют через складчатый фильтр. В пробирку к 2 мл филь­трата добавляют 5 мл концентрированной серной кислоты и 10 капель насыщенного раствора медного купороса. Нагрева­ют при потряхивании на водяной бане при 100°С в течение 5 мин. После охлаждения добавляют 3—5 капель 0,2%-ного раствора тиофена в спирту. В присутствии молочной кислоты возникает вишнево-красное окрашивание. Реакция очень чувствительна и специфична.

6. Литература по теме занятия

1. Гусев М.В., Минеева Л.А. Микробиология. - М.: Академия, 2003.

2. Определитель бактерий Берджи. – Под ред. Дж. Хоулта, в 2-х томах. - М.: Мир, 1997.

3. Асонов Н.Р. Микробиология. – М.: Колос, 2001.

4. Градова Н.Б., Бабусенко Е.С. Лабораторный практикум по общей микробиологии. - М.: РХТУ, 1998.

5. Бакулин М. К. Получение накопительных культур микроорганизмов различных таксономических групп. - Киров, 1997.

6. Теппер Е.З. Практикум по микробиологии: Учебное пособие для вузов.- М.: Дрофа, 2004.