5. Ход работы

Окраска спор у бактерий по методу Пешкова

На предметное стекло микробиологической петлей наносят мазок из культуры микроорганизма. Мазок высушивают на воз­духе, фиксируют в пламени гарелки изаливают его раствором метиленового синего по Леффлеру. Краситель доводят до кипения, держа стекло над пламенем гарелки. По мере испарения красителя добавляют его новые порции. Продолжительность окраски с момента закипания – 20 с. Затем предметное стекло охлаждают, препарат промывают водой, что вызывает обесцвечивание цитоплазм, и докрашивают 30 с 0,5%-ным водным раствором нейтрального красного. Вновь промывают водой, подсушивают и микроскопируют под иммерсией, пользуясь объективом МИ-90. При правильном окрашивании клетки имеют красный, а споры – синий цвет. Микроскопическую картину зарисовывают.

Окраска спор у бактерий по методу Циля

На предметное стекло микробиологической петлей наносят мазок из культуры микроорганизма. Мазок высушивают на воз­духе и обрабатывают протравой, заливая его 5%-ным раство­ром хромовой кислоты на 5 мин.

Мазок промывают водой, покрывают квадратиком фильтро­вальной бумаги и заливают раствором карболового фуксина. Окрашивают мазок 6—8 мин при нагревании до образования паров, держа стекло высоко над пламенем горелки. По мере испарения краситель периодически добавляют, не давая препа­рату подсохнуть.

Далее мазок тщательно промывают водой и дифференциру­ют в 1%-ном растворе серной кислоты 30—60 секунд до приобрете­ния им слабо-розовой окраски. Краситель вымывается серной кислотой и полностью уходит из цитоплазмы вегетативных кле­ток. Зона проспоры в клетках - спороносцах и высыпавшиеся споры остаются окрашенными.

После дифференциации мазок немедленно промывают водой и докрашивают раствором метиленового синего 10—15 мин. Затем мазок окончательно промывают водой, высушивают на воздухе и микроскопируют под иммерсией, пользуясь объективом МИ-90. На препаратах высыпав­шиеся споры и зона проспоры в клетках - спороносцах окра­шиваются в красный цвет, а вегетативные клетки и концы клеток - спороносцев — в синий или голубой (рисунок).

Рисунок. Спорообразование у Bacillus mesentericus. Окраска по Цилю. Кар­боловый фуксин. Метиленовая синяя.

Просматривая препараты, делают зарисовки микроорганизмов, обращая внимание на форму, взаимное положение клеток и спор и их окрашивание.

6. Литература по теме занятия

1. Гусев М.В., Минеева Л.А. Микробиология. - М.: Академия, 2003.

2. Определитель бактерий Берджи. – Под ред. Дж. Хоулта, в 2-х томах. - М.: Мир, 1997.

3. Асонов Н.Р. Микробиология. – М.: Колос, 2001.

4. Градова Н.Б., Бабусенко Е.С. Лабораторный практикум по общей микробиологии. - М.: РХТУ, 1998.

5. Бакулин М. К. Получение накопительных культур микроорганизмов различных таксономических групп. - Киров, 1997.

Содержание

1.	Цели занятия….…………………………………………........	3
2.	Вопросы и задания для самоподготовки.……………..........	3
3.	Оборудование и материалы………..…………………..........	4
4.	Общие сведения………...………………………………........	4
5.	Ход работы………...……………………………….................	5
6.	Литература по теме занятия……………………………........	7