Методы для выявления антител и антигенов

1. Методы, основанные на реакции преципитации - образования осадка из нерастворимых комплексов антиген-антитело в растворе, агаре, геле (нефелометрия; простая, двойная и радиальная иммунодиффузия; иммуноелектрофорез; непрямая преципитация). Таким образом в клинической иммунологии определяются уровни иммуноглобулинов по методу Манчини, происхождение крови или спермы в судебной медицине, количественные и качественные свойства белков в биохимических препаратах. В организме с помощью преципитации нейтрализуются вирусы и бактериальные (например, дифтерийный) токсины. В иммунопатологии за счет преципитации реализуется феномен Артюса (одно из проявлений гиперчувствительности), когда преципитат блокирует микроциркуляцию и тем самым приводит к локальному некрозу.

2. Методы, основанные на реакции агглютинации (прямая и непряма агглютинация) - осаждение клеток, нагруженных антигенами (эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов, сперматозоидов при диагностике бесплодия), иммуноглобулинами-аглютининами. Применяется в диагностике тифа и туберкулеза, иммунологического бесплодия, определении групп крови (ABO);

3. Методы, основанные на реакции лизиса бывают двух видов: а) реакция связывания комплемента (основывается на потреблении комплемента в двух конкурирующих парных системах антиген-антитело); бы) реакция комплементарной фиксации (основывается на потреблении комплемента в двух последовательно реагирующих парных системах антиген-антитело). Таким образом устанавливают уровень антител к вирусам полиомиелита, оспы, эпидемического паротита, герпеса, гриппа или бактерий гонореи, туберкулеза, сифилиса (реакция Васермана)

4. Методы, основанные на использовании меченых антител и антигенов подразделяются на:

а) иммунофлюоресцентный метод (иммунное окрашивание) - определение антигенов (прямая реакция) или антител (непряма) путем детекции флюоресцирующих (меченых) комплексов. Таким образом определяются популяции и субпопуляции иммуноцитов (метод моноклональных антител), антигены, антитела и потенциальные аллергены в сыворотке и тканях (иммуногистохимическое исследование);

б) иммуноферментный метод - определение антигенов (прямая реакция) или антител (непряма) путем их взаимодействия, соответственно, с антителом или антигеном, мечеными ферментами. С помощью этого метода можно качественно и количественно определять антигены и антитела, интерлейкины, интерфероны, иммуноглобулины, потенциальные аллергены. Модификациями этого метода является:

- ELISA-тест на ВИЧ - образование послойного "сендвича" антитело-антиген-антитело;

- вестерн-блот - проведение иммуноферментного анализа после предыдущего разделения антигенов в геле електроферезом и перенесение (блотинг) их на неподвижную бумагу.

Лабораторная диагностика аллергических заболеваний in vitro

Специфические методы аллергодиагностики направлены на:

— выявление свободных антител в сыворотке крови и секретах;

— обнаружение антител, связанных с лейкоцитами (базофилами, нейтрофилами, тромбоцитами и др.);

— определение Т-лимфоцитов, сенсибилизированных к аллергену.