Иммунологические тесты, которые характеризуют гуморальный иммунитет (в – звено).

Гуморальное звено иммунной системы оценивают по таким показателям:

• Количество В-лимфоцитов;

• Количество сывороточных иммуноглобулинов (классов A, M,G, E).

В настоящее время с целью идентификации лимфоцитов используют 3 группы методов: иммунофлюоресценция – проточная цитометрия, розеткообразование, иммуноферментный анализ.

Метод проточной цитометрии На клеточной мембране лимфоцитов находится множество гликопротеидов, которые можно обнаружить при проточной цитофлюориметрии с помощью моноклональных антител. Некоторые из этих гликопротеидов специфичны для определенного типа клеток, например T-, B- и NK-лимфоцитов, разных субпопуляций T-лимфоцитов, моноцитов, и даже для определенных стадий их созревания и дифференцировки. Эти молекулы принято обозначать CD. Определение B-лимфоцитов с помощью проточной цитофлюориметрии основано на выявлении иммуноглобулинов, фиксированных на поверхности клеток, CD19 и CD20. При оценке результатов исследования необходимо учитывать возраст больного. У детей старшего возраста и взрослых B-лимфоциты составляют 10—20% всех лимфоцитов крови, у детей младшего возраста их больше.

Метод розеткообразования основывается на наличии на мембране В – лимфоцита рецептора для Fc – фрагмента иммуноглобулинов и третьего компонента системы комплимента (С3). Они способны образовывать розетки лишь с эритроцитами миши, которые обработаны антителами и в присутствии комплемента (ЕМ–РУК). Показано, что Ем-рецепторы идентичны выявляемым моноклональными антителами CD22 и присутствуют на зрелых B-лимфоцитах. Таким образом, тест розеткообразования с эритроцитами мыши (ЕМ-РУК) используют для обнаружения В-лимфоцитов, имеющих рецепторы CD22.

Определение абсолютного количества В-лимфоцитов Абсолютное количество В-лимфоцитов в норме составляет 0,28 – 0,31 *10⁶ /л).

Повышение абсолютного количества В-лимфоцитов наблюдается при: острых бактериальных, грибковые, паразитарные заболеваниях, СПИД (начальный период), хронических заболевание печенки (цирроз, вирусный гепатит), аутоиммунных заболеваниях (ревматоидный артрит, СКВ, ревматизм, коллагенозы), саркоидозе, муковисцидозе, болезни Крона, болезни Вальденстрема, моноклональной гаммапатииії, инфекционном мононуклеозе, хроническому лімфолейкозі, в остром периоде повторной инфекции.

Снижение абсолютного количества В-лимфоцитов наблюдается при: физиологичной гіпогамаглобулінемії у детей (в возрасте 3 – 5 мисс), врожденной гіпогамаглобулінемії или агаммаглобулинемии, новообразованиях иммунной системы, лечении цитостатиками и иммунодепрессантами, состояниях после удаления селезенки, недостаточности гуморального звена иммунитета.

Определение IGG, IGA, IGM методом радиальной імунодифузії по Mancini et al основан на том, что образцы исследуемых сывороток поміщують в лунки агара, который содержит антитела к Ig одного из классов IGG, IgА, IgМ в известной концентрации. Иммуноглобулины, дифундуючи из лунок в агар, при взаимодействии с соответствующими антителами будут образовывать кольца преципитации, размер которых находится в тесной зависимости от содержания в сыворотке обследуемого Ig того или другого класса. Уровень сывороточных Ig отображает функциональное состояние В-клитинной звена иммунной системы в ответ на стимуляцию организма антигенными раздражителями.

Повышение концентрации IgА наблюдается при: острой и хронической бактериальной, грибковой, паразитарной инфекции, хронических заболеваниях печенки, циррозе, ревматоидном артрите, СКВ, хроническом лимфолейкозе, миеломной болезни, моноклональной гаммапатии, болезни Вальденстрема, эндотелиоме, остеосаркоме, кандидозе, муковисцидозе, заболеваниях дыхательных путей.

Уменьшение концентрации IgА наблюдается при: физиологичной гипогаммаглобулинемии у детей (в возрасте 3 – 5 мисс), врожденной гипогаммаглобулинемии или агаммаглобулинемии, новообразованиях иммунной системы, лечении цитостатиками и иммунодепрессантами, состояниях после удаления селезенки, кишечных и почечных синдромах потери белка, острых вирусных, хронических бактериальных инфекциях.

Повышение концентрации IgM наблюдается при: острых и хронических бактериальных, грибковых, паразитарных инфекциях, острых вирусных гепатитах, циррозе, ревматоидном артрите, СКВ, остром и хроническом лимфолейкозе, миеломной болезни, макроглобулинемии Вальденстрема, эндотелиоме, остеосаркоме, кандидозе, муковисцидозе, заболеваниях дыхательных путей.

Уменьшение концентрации IgM наблюдается при: физиологичной гипогаммаглобулинемии у детей (в возрасте 3 – 5 мисс), врожденной гипогаммаглобулинемии или агаммаглобулинемии, новообразованиях иммунной системы, лечении цитостатиками и иммунодепрессантами, облучение ионизирующей радиацией, состояниях после удаления селезенки, кишечных и почечных синдромах потери белка, хронической вирусной инфекции, недостаточности гуморального звена иммунитета.

Повышение концентрации IgG наблюдается при: острых и хронических бактериальных, грибковых, паразитарных инфекциях, острых и хронических заболевание печенки, циррозе, вирусном гепатите, аутоиммунних заболеваниях, ревматоидном артрите, СКВ, саркоидозе, муковисцидозе, хроническом лимфолейкозе, миеломной болезни, инфекционном мононуклеозе, моноклональной гаммапатии, болезни Вальденстрема, реконвалесценции первичной бактериальной инфекции, при остром периоде повторной инфекции, СПИДе.

Уменьшение концентрации IgG наблюдается при: физиологичной гипогаммаглобулинемии у детей (в возрасте 3 – 5 мес), врожденной гипогаммаглобулинемии или агаммаглобулинемии, новообразовании иммунной системы, лечении цитостатиками и иммунодепрессантами, состояниях после удаления селезенки, кишечных и почечных синдромах потери белку, при хронической вирусной инфекции, гемоглобинопатии.

Иммуноглобулин Е (IgE) – класс иммуноглобулинов, обнаруженный в норме в незначительном количестве в сыворотке крови и секретах слизистых оболочек и эндокринных желез. Основная биологическая роль IgE связана с его способностью связываться с поверхностью тучных клеток и базофилов человека. Только эти клетки несут высокоафинный гликопротеиновый рецептор к IgE.

IgE принимает участие в аллергический реакциях I (немедленного) типа, а также принимает участие в защитном противогельминтном иммунитете, что обусловленно наличием перекрестного связывания между IgE и антигеном гельминтов.

Определение IgE имуноферментним методом (ELISA-тест). Аллерген, например экстракт пыльцы, иммобилизируют на сорбенте, который потом инкубируют с сывороткой больного. Количество связанного с сорбентом специфического IgE определяют с помощью антител к IgE, которые иммобилизированы в лунках на специальных планшетах.

В норме IgE составляет менее 0,001% от всего иммуноглобулина сыворотки крови. Его концентрация в сыворотке крови взрослого человека составляет не менее 0,05% г/л (приблизительно 100 кЕ/л), что в 1000 раз выше концентрации IgE специфического в сыворотке (приблизительно 10 граммов/л). Диапазон содержания IgE в сыворотке крови здоровых людей в зависимости от возраста представлен в таблице 5.

Таблица 5. Значения нормальных уровней концентрации иммуноглобулина E в сыворотке крови в зависимости от возраста.

Возрастные группы	Содержание IgE (кЕ/л)
Новородженные	0 – 2
Дети: 3 – 6 мес	3 – 10
1 год	8 – 20
5 лет	10 - 50
10 лет	15 – 60
Взрослые	20 - 100

IgE можно обнаружить в организме человека уже на II-й неделе внутриутробного развития. Содержание IgE в сыворотке крови растет постепенно с момента рождения человека к подростковому возрасту. В пожилом возрасте уровень IgE может снижаться.