Реакции, основанные на выделении сенсибилизированными лейкоцитами медиаторов, ферментов и других биологически активных веществ под влиянием аллергенов.

Определение уровня сульфидо-лейкотриенов (CAST ELISA). После инкубации лейкоцитов с аллергеном определять прирост в надосадочной жидкости уровня сульфидо-лейкотриенов (ЛТС4).

Определение антител, связанных с лейкоцитами

Прямой тест дегрануляции базофилов (ТДБ) основан на дегрануляции базофилов больных аллергией, сенсибилизированных антителами класса IgE под влиянием специфического аллергена. Натощак у больного получают 10 - 15 мл (1 мл – 1 аллерген) крови из вены в пробирку с гепарином (20 ЕД/мл). В лунки планшет для иммунологических исследований вносят по 0,05 мл суспензии лейкоцитов, в опытные лунки - равный объем аллергенов, в контрольные - растворитель. Инкубируют 15 мин при 37 °С и добавляют в каждую лунку по 0,05 мл раствора толуидинового синего. Суспензией заполняют камеру Горяева и подсчитывают количество окрашенных базофилов. В контроле должно содержаться не менее 30 кл. Реакция считается положительной, если число окрашенных клеток в опыте уменьшалось на 30% и более.

Тест активации базофилов - basotest Оценка количества активированных базофилов по уровню экспрессии Cd63 IgE. Оценка результатов теста проводится с помощью метода проточной цитометрии. Интерпретация результатов: в негативном контроле уровень активированных базофилов не превышает 5%.

Реакция бласт-трансформации лимфоцитов (РБТЛ), основывается на том, что при наличии повышенной чувствительности Т-лимфоцитов к аллергенам они трансформируются в молодые клетки - бласты. Если индекс РБТЛ с аллергеном повышается более, чем на 3 % то имеем сенсибилизацию к данному аллергену.

Аллергию замедленного типа на лекарства определяют по наличию сенсибилизации Т-лимфоцитов.

Сенсибилизацию Т-клеток выявляют:

1) по выделению ими цитокинов в реакциях подавления (ингибиции) миграции лейкоцитов, угнетения прилипаемости лейкоцитов;

2) по изменению Т-активного розетко-образования;

3) по усилению пролиферации Т-клеток под влиянием аллергенов - реакция бласттрансформации.

Весь этот набор лабораторных тестов позволяет подтвердить диагноз аллергического заболевания, как в стадии обострения так и в стадии ремиссии.

Иммунный статус

Иммунный статус – это совокупность количественных и качественных характеристик, отражающих состояние иммунной системы человека в конкретный момент времени.

При оценке иммунной системы необходимо знать о существовании индивидуальной вариабельности показателей иммунитета, учитывать, что изменение одного показателя вызывает компенсаторные реакции других показателей. Дефект части компонентов или звеньев иммунной системы, как врожденный, генетически предопределенный, так и приобретенный, может быть достаточно полно компенсирован другими компонентами иммунной системы. Если адаптация такой дефектной системы происходит в благоприятных физиологических условиях, то гомеостаз может достаточно полно стабилизироваться, создав необходимый баланс имеющихся компонентов. Подобная сбалансированная система может работать достаточно эффективно даже в экстремальных условиях, хотя риск ее срыва все же может быть несколько выше, чем у системы, все компоненты которой полноценны.

Функциональная активность иммунокомпетентных клеток находится под постоянным влиянием нейроэндокринных факторов (нейро-єндокринно-иммунная ось). Существуют возрастные различия показателей иммунного статуса.

Обнаружены сезонных колебаний функциональной активности иммунной системы. Так установлено, что максимальное значение показателей Т- и В-звеньев иммунитета наблюдается в зимнее время. Снижение количества и функциональной активности Т-лимфоцитов происходит весной, а В-лимфоцитов – летом. Обнаружены также суточные ритмы изменения показателей иммунного статуса: максимальное количество лимфоцитов наблюдается в 24 ч, наименьшее – при пробуждении.

Дефекты иммунной системы проявляются в период ее активной работы. Обобщенно можно выделить три основных типа активного функционирования иммунной системы.

Первый тип - это нормальное в своей основе функционирование, которое встречается при большинстве заболеваний (острых, хронических, рецидивирующих). В пределах этого нормального функционирования может развиваться недостаточность работы иммунной системы, однако она является проходящей, временной и при устранении соответствующих причин система возвращается в состояние нормальной работы.

Второй тип - патологическое функционирование, связанное с поломками какого-либо специфического звена иммунной системы в реакции на определенный антиген. Ненормальность функционирования иммунной системы в этом случае связана с тем, что специфическое звено неправильно направляет ход иммунного ответа. Это может проявляться как в бесконтрольном усилении иммунной реакции (аллергия) или срыве толерантности к своему антигену (аутоиммунные заболевання), так и в ослаблении отвечаемости на чужое (онкологические заболевания).

Третий тип - патологическое функционирование, связанное с дефектом какого-либо звена или компонента иммунной системы, когда механизмы компенсации в силу каких-либо причин (например, слишком большого дефекта, неблагоприятных условий жизни и др.), не сработали, система осталась несбалансированной и не может адекватно реагировать на чужеродное. Дефект компонентов может быть врожденным (врожденные иммунодефекты) или приобретенным (болезни кроветворения, связанные со злокачественным перерождением иммунокомпетентных клеток; СПИД, связанный с избирательным уничтожением вирусом Т-хелперов).

Иммунологическое обследование преследует решение следующих задач: 1. подтвердить наличие нарушений в иммунной системе (иммунодефицит, аутоиммунный процесс, аллергия и т. д.); 2. определить степень тяжести нарушений в иммунной системе; 3. выявить нарушенное звено; 4. оценить возможности подбора иммунокорректора; 5. оценить прогноз эффективности иммунотерапии.

Для постановки диагноза иммунопатологии или заключения о роли иммунных нарушений в патогенезе различных заболеваний рекомендуется проведение следующих этапов исследований: