- •Тема 2. Иммунологические методы исследований. Понятие об иммунограмме
- •Задания для проверки начального уровня знаний.
- •Источники учебной информации
- •Ориентировочная основа действия
- •Иммунологический анамнез
- •Данные клинического обследования
- •Тесты, которые проводятся на больном (in vivo)
- •Лабораторные исследования Исследование факторов естественной резистентности организма
- •Определение показателей фагоцитоза:
- •Иммунологические тесты, которые характеризуют клеточный иммунитет (т – звено).
- •Иммунологические тесты, которые характеризуют гуморальный иммунитет (в – звено).
- •Методы для выявления антител и антигенов
- •Определение уровня аллерген-специфичних IgE
- •Реакции, основанные на выделении сенсибилизированными лейкоцитами медиаторов, ферментов и других биологически активных веществ под влиянием аллергенов.
- •Определение антител, связанных с лейкоцитами
- •Иммунный статус
- •I. Анализ анамнеза:
- •II. Клиническое обследование:
- •Тесты і уровня:
- •Тесты II уровня:
- •Интерпретация иммунограмм
- •Пример 1. Пациентка л., 22 года. Диагноз: Острый фурункулез.
- •Задания для заключительного контроля знаний.
I. Анализ анамнеза:
II. Клиническое обследование:
III. Иммуно-лабораторное обследование.
-
Общий анализ крови, СОЭ, С-реактивный белок.
-
Оценка клеточного (Т-звена) иммунитета:
а) количество популяций и субпопуляций Т-лимфоцитов (CD2, CD3, CD4, CD8); соотношение CD4+/CD8+ клеток;
б) кожные тесты со столбнячным и дифтерийным анатоксинами, туберкулином и др.;
в) пролиферативная активность в реакциях бласттрансформации с ФГА.
3. Оценка гуморального (В-звена) иммунитета:
а) количество В-лимфоцитов (CD19, CD20, CD23);
б) уровень сывороточных Ig M, Ig G, Ig A, Ig E, секреторного Ig A.
4. Оценка системы фагоцита:
а) количество фагоцитирующих нейтрофилов и моноцитов;
б) активность фагоцитоза;
в) кислородзависимый метаболизм по НСТ-тесту.
5. Оценка системы комплемента:
а) определение количества СЗ;
б) определение количества С4;
в) определение общего комплемента по СН50.
При необходимости более глубокого изучения иммунного статуса определяют:
1. Количество и функцию NK-клеток (CD16/CD56);
2. HLA-фенотип;
3. Продукцию провоспалительных цитокинов (IL-2, гамма-интерферона, альфа-ФНО, IL-8, IL-12);
4. Продукцию противовоспалительных цитокинов (IL-4, IL-5, IL-10, IL-13);
-
Наличие специфических аутоантител;
-
Наличие специфической клеточной сенсибилизации;
-
Наличие Т- и В-клеток с признаками активации (DR, CD25, CD71).
Учитывая разнонаправленность иммунологических тестов, различную диагностическую прогностическую значимость, степень сложности набор унифицированных иммунологических методик разделен на 2 уровня.
Тесты і уровня:
• общее число лейкоцитов;
• абсолютное и относительное содержание лимфоцитов;
• число Т- и В-лимфоцитов;
• фагоцитарная активность лейкоцитов;
• содержание иммуноглобулинов классов А, М, G;
• титр комплемента.
• число NK-клеток;
После анализа определенных показателей и сопоставления их с клинико-анамностичними данными врач обосновывает необходимость продлить иммунологическое обследование пациента или признать его иммунологически здоровым.
Тесты II уровня:
• субпопуляции Т-лимфоцитов (Т-хелперов, Т-супрессоров, их соотношения);
• число Т-активных лимфоцитов;
• активность бластной трансформации лимфоцитов на митогены (с фитогемаглютинином - ФГА) и антигены;
• число В-лимфоцитов, которые несут на поверхности иммуноглобулины различных классов;
• активность NK-клеток;
• компонентов комплемента;
• концентрация иммуноглобулина Е общего;
• уровень естественных антител (гетерофильных аглютининов, напряженность гуморального иммунитета).
• соотношение классов Т-хелперов (Th1/Th2) и продукции ими цитокинов;
• експрессия рецепторов к цитокинам;
• маркеров HLA-DR;
• активность популяции лимфоцитов после преинкубации их с растворами стандартных иммунотропных препаратов.
Благодаря иммунологическим тестам, клинический иммунолог, имеет возможность оценить функционирование основных звеньев иммунитета, сделать заключение о состоянии иммунного статуса пациента и аргументированно назначить иммунокоррегирующую терапию, а также проконтролировать ее результаты в динамике наблюдения за иммунологическими показателями. Диапазоны нормальных значений иммунного статуса приведены в таблице 6.
Таблица 6. Показатели иммунного статуса
Наименование показателей |
Ед. нзм. |
Норма |
Показатели фагоцитарной и киллерной активности фагоцитов |
||
Количество лейкоцитов |
109 /л |
4,4-11,0 |
Количество нейтрофилов |
% |
40-70 |
Количество моноцитов |
% |
3-8 |
Количество эозинофилов |
% |
1-5 |
Фагоцитарное число (ФЧ) |
Абс. число |
5-10 |
Фагоцитарный показатель (ФП) |
% |
65-95 |
Индекс завершенности фагоцитоза (ИЗФ) |
Ед |
>1,0 |
Количество активных фагоцитов (КАФ) |
109 /л |
1,6-5,0 |
Активированный НСТ-тест |
% |
40-80 |
Спонтанный НСТ-тест |
% |
до 10 |
Лизосомально-катионный (ЛКТ)-тест |
Ед |
1,2-1,8 |
Тест окислительного метаболизма гранулоцитов |
Ед |
141-212 |
Активированная хемилюминисценция фагоцитов (Бурст-тест с E. Coli и ФМА) |
% Ед |
95-100 600-1800 |
Спонтанная хемилюминисценция фагоцитов |
% |
1-20 |
Количество натуральных киллеров (CD16) |
% |
6-26 |
Количество NK-киллеров (CD56) |
% |
9-19 |
Количество активированных гранулоцитов (CD16) |
% |
65-95 |
Количество нейтрофилов с негативной активацией (CD95) |
% |
5-10 |
Количество моноцитов с негативной активацией (CD95) |
% |
5-7 |
Уровень Интерлейкина-1 |
пг/мл |
30-50 |
Уровень Интерлейкина-6 |
нг/мл |
30-500 |
Уровень колониестимулируюшего фактора |
пг/мл |
0-4,0 |
Уровень TNF |
нг/мл |
0-87 |
Показатели гуморального звена неспецифической резистентности |
||
Уровень С-3 компонента комплемента в сыворотке |
г/л |
0,9-1,8 |
Уровень С-4 компонента комплемента в сыворотке |
г/л |
0,1-0,4 |
Титр комплемента в сыворотке |
ЕдСН50 |
35-60 |
Уровень С-реактивного белка в сыворотке |
мг/л |
<5 |
Уровень лизоцима в крови |
м к г/мл |
7-14 |
Уровень ЦИК (иммунных комплексов) |
Ед |
30-90 |
Уровень ЦИК с Clq комплементом |
мг/мл |
0-40 |
Показатели гуморального звена иммунннтета |
||
Уровень иммуноглобулина А в сыворотке |
г/л |
0,7-4,0 |
Уровень иммуноглобулина М в сыворотке |
г/л |
0,4-2,3 |
Уровень иммуноглобулина G в сыворотке |
г/л |
7,0-16,0 |
Уровень общего иммуноглобулина Е |
МЕ/мл |
0-100 |
Наименование показателей |
Ед. изм. |
Норма |
Уровень специфических антител (по показаниям при выявлении возбудителя для оценки силы иммунного ответа) |
- |
- |
Уровень онкомаркёров (по показаниям при подозрении на злокачественное новообразование) |
- |
- |
Уровень антистрептолизина-0 в сыворотке |
МЕ/мл |
<200,0 |
Уровень ревматоидного фактора в сыворотке |
МЕ/мл |
<14,0 |
Количество Т-хелперов 2 типа (CD4/29) |
% |
1-3 |
Уровень Интерлейкина-4 |
- |
- |
Уровень Интерлейкина-8 |
нг/мл |
50-500 |
Количество В-лимфоцитов (CD20) |
% |
8-19 |
Абсолютное количество В-лимфоцитов (CD20) |
109/л |
0,19-0,38 |
Количество активированных В-лимфоцитов (CD20/69) |
% |
6-12 |
Количество активированных В-лимфоцитов (CD23) |
% |
6-12 |
Количество В-лимфоцитов (CD5+) |
% |
- |
Количество В-лимфоцитов TgA+ |
% |
1-3 |
Количество В-лимфоцитов IgM+ |
% |
3-10 |
Количество В-лимфоцитов lgG+ |
% |
2-6 |
Количество В-лимфоцитов IgD+ |
% |
- |
Показатели клеточного звена иммунитета |
||
Количество лимфоцитов |
% |
25-39 |
Количество Т-лимфоцитов (CD3) |
% |
58-76 |
Абсолютное количество Т-лимфоцитов (CD3) |
109 /л |
1,1-1,7 |
Количество Т-хелперов (CD4) |
% |
36-55 |
Абсолютное количество Т-хелперов (CD4) |
109 /л |
0,4-1,1 |
Количество Т-супрессоров (CD8) |
% |
17-37 |
Абсолютное количество Т-супрессоров (CD8) |
109/л |
0,3-0,7 |
Иммуно-регуляторный индекс Th/Tc |
Ед |
1,5-2,5 |
Показатель дифференцировки Т-лимфоцитов |
Ед |
0,9-1,0 |
Количество Т-хелперов 1 типа (CD45 Ra) |
% |
32-45 |
Количество Т-лимфоцитов «памяти» (CD45 Ro) |
% |
- |
Количество активированных Т-лифоцитов (HLA-DR) |
% |
12-20 |
Количество Т-лифоцитов с рецепторами к Интерлейкину-2 (CD25) |
% |
13-24 |
Количество нулевых (недифференцированных) лимфоцитов |
% |
5-27 |
Спонтанная бластная трансформация (РБТЛ) лимфоцитов |
% |
до 10 |
Активированная бластная трансформация (РБТЛ) лимфоцитов с фитоггемагглютинином (ФГА) |
% |
36-54 |
Количество активированных Т-хелперов (CD4/69) |
% |
40-70 |
Количество активированных Т-супрессоров (CD8/69) |
% |
40-70 |
Количество лимфоцитов с негативной активацией (CD95) |
% |
5-10 |
Активность Т-лимфоцитов в РТМЛ с ФГА |
% |
20-80 |
Уровень рецепторов к Интерлейкину-2 |
нг/мл |
700-5000 |
Уровень Интерлейкина-2 |
Ед/мл |
0-0,5 |
Уровень Интерлейкина-12 |
пг/мл |
30-100 |
Уровень ИФН-у |
пг/мл |
30-50 |
Чувствительность лимфоцитов к иммуномодуляторам |
% |
20-80 |