Электрофорез белков плазмы.

Метод электрофореза белков был введен в 1930 году Тизелиусом. Принцип метода электрофореза заключается в том, что белки, находящиеся в среде с определенной концентрацией ионов водорода, приобретают электрический заряд. Скорость движения белков зависит от молекулярной массы белка, величины заряда белковой молекулы, ее формы, степени гидратации, а также от вязкости раствора, ионной мощности буфера и других физико-химических свойств. Методом Тизелиуса было получено 6 белковых фракций плазмы крови и 5 классических фракций сыворотки. Метод Тизелиуса - это метод свободных или подвижных границ (использовался буфер, в который вносили смесь белков). Вместо свободного электрофореза в настоящее время используют зональный или электрофорез на различных средах-носителях. В качестве сред-носителя используется:

• хроматографическая бумага;

• ацетат-целлюлезные пленки;

• различные гели: крахмальный, агаровый, полиакриламидный гель.

С помощью хроматографической бумаги, ацетат-целлюлезной пленки было выделено 5 обычных фракций белков.

На крахмальном геле и геле агарозе 7-12 фракций белков, а полиакриламидном геле 18-20, а по некоторым данным, и до 30 белковых фракций.

В 1964 году Грабаром открыт метод иммуноэлектрофореза. Это сочетание мотода электрофореза с иммунохимическим методом, при котором, помимо физико-химических свойств, белки разделяются и по иммунологическим свойствам, т. е. по их антигенной специфичности. Проводится на геле агара или агарозе. Благодаря этому методу удалось выделить свыше 20 белков.

Основные электрофоретические фракции.

1. Альбумин - наиболее подвижная фракция и является однородной. Однако, описаны случаи, когда фракция альбумина делится как бы на 2 части. Тогда говорят: «альбумин - А и альбумин - В» - бисальбуминемия. Это наследственный полиморфизм, но иногда наблюдается у больных, получающих большие дозы антибиотиков.

Этот белок быстро обновляется. Период его полураспада 7 дней. Это гидрофильный белок, молекула которого в воде увеличивается в 2 раза. Альбумин играет важнейшую роль в поддержании коллоидно-осмотического давления.

Ему также принадлежит важная транспортная и защитная роль. Связываясь с билирубином, гормонами, ионами кальция, железа, меди, альбумин транспортирует эти вещества и обезвреживает их токсическое действие.

Некоторые ферменты (холинэстераза, щелочная фосфатаза) проявляют свою активность только при участии альбумина.

Местом синтеза альбумина являются гепатоциты. При тяжелых заболеваниях печени (острые, а также хронические гепатиты, агрессивные гепатиты, циррозы печени, злокачественные опухоли и метастазы в печень) наблюдается гипоальбуминемия (менее 45 г/л), что объясняется нарушением его синтеза.

Гипоальбуминемия наблюдается также:

• при хронических заболеваниях ЖКТ;

• при сердечной недостаточности;

• сахарном диабете;

• ожогах, кровопотерях;

• травмах;

• шоковых состояниях;

• заболеваниях почек с нефротическим компонентом;

• гипертиреозе;

• гиперкортицизме;

• накоплении экссудатов и транссудатов;

• действии ионизирующей радиации;

• при недостаточном белковом питании;

• при нагноительно-воспалительных заболеваниях.

Физиологическая гипоальбуминемия проявляется у детей до 3 месяца жизни, у женщин в 3 триместре беременности.

При гипоальбуминемии у новорожденных в тканях накапливается жирорастворимый билирубин, что может привести к ядерной желтухе новорожденных.

При гипоальбуминемии может наблюдаться токсический эффект длительно применяемых лекарственных препаратов, в том числе салицилатов, пенициллина, гликозидов и др.

При гипоальбуминемии может не контрастироваться желчный пузырь при даче пероральных контрастных веществ.

Гиперальбуминемия встречается лишь при гипергидратации