kr1

10.Актиномикоз. Вызываемые инфекции. Диагностика. Принципы лечения.

Actinomyces (Лучистые грибы)-бактерии,относятся к отд.Fermicutes сем. Actynomycetaceae..При своем росте образуют структуры, напоминающие мицелий грибов, т.е. они являются промежуточной формой микроорганизмов. С грибами их роднит мицелиообразование и спорообразования (бласто- , артро- и хламидоспоры). С бактериями - обитают в почве, Гр+, видны под световым микроскопом с иммерсией. Имеют ядерный материал,(но не имеют оформленного ядра), ЦПМ, клеточную стенку. Размножение:распад нитей на отдельные клетки или спорами ,которые образуются на концах воздушных гиф. На питательных средах образуют нечто похожее на субстратный мицелий. Выделяют 3 группы:

1)Псевдоактиномицеты - некоторые бактериальные формы, например микобактерии туберкулеза, бифидобактерии. Для этой группы характерна удлиненная форма и специфическое деление.

2)Проактиномицеты. У этих микроорганизмов сохраняется мицелий, образуют артроспоры. К ним относятся Nocardiaвызывают нокардиоз.

3)Эуактиномицеты - истинные лучистые грибки. Представитель - род Sthreptomyces. Образуют истинный мицелий, артроспоры. Могут образовывать спорангии (стрептоспорангии), экзоспоры по типу высших грибов. Эта группа дает до 95% антибиотиков.

Актиномикоз является подострым или, скорее, хроническим гранулематозным заболеванием, которое обычно вызывает нагноение и формирование абсцесса, а также имеет тенденцию образовывать свищевые ходы. Заболевание встречается у человека и животных. В дополнение к классическим патогенам A. bovis и A. israelii, актиномикотические поражения может вызвать разнообразное число видов других ферментативных актиномицетов. Большинство этих агентов принадлежит роду

Actinomyces, но некоторые - члены рода Propionibacterium или Bifidobacterium. Кроме того,

все типичные актиномикотические поражения, в дополнение к патогенным актиномицетам, содержат разнообразные бактерии.

Клинические проявления актиномикоза

Начальные актиномикотические поражения развиваются обычно в тканях, смежных со слизистыми оболочками, которые являются естественными средами обитания причинных агентов. Наиболее часто поражаются следующие участки: шейно-лицевой, грудной и

абдоминальный. Редко - кожа, кости, или ЦНС, которая также может быть вовлечена в патологический процесс. После проникновения возбудителя в ткани инфекция имеет тенденцию медленно прогрессировать вне зависимости от естественных границ органа. Иногда наблюдают гематогенное распространение, при котором может быть вовлечена ЦНС (мозговой абсцесс) или естественные полости (эмпиема).Характерна тенденция к ремиссии и к обострению симптомов вне зависимости от проведения антибактериальной терапии. В связи с тем, что актиномикозы у человекаэндогенные инфекции, то трудно или невозможно определить их инкубационный период. Полагают, что до появления первых клинических признаков проходит приблизительно 4 недели.

Патология и патогенез. Начальная стадия острого заболевания - воспалительный процесс, который ведет к формированию абсцесса или, если течение хроническое, развивается тканевая пролиферация и формируются множественные маленькие абсцессы. Более развитые процессы характеризуются рубцовой тканью в центре и с грануляциями на периферии, которая может включать множественные гнойные очаги или полости с множеством свищевых ходов. В гнойном очаге могут быть обнаружены друзы актиномицетов. Их обнаруживают в содержимом абсцесса или в выделениях из свищей приблизительно в 25% случаев, что имеет большую диагностическую ценность. Друзы имеют размеры до 1 мм в диаметре и видимы невооруженным глазом. Это желтоватые (с красноватым или с коричневатым оттенком) частички, напоминающие при небольших увеличениях цветную капусту. Под микроскопом после легкого сдавления между предметным и покровным стеклом можно видеть, что они составлены из различного числа сферических долей, которые представляют нитевидные актиномикотические микроколонии, сформированные in vivo и в целом образуют структуру типа цветной капусты. Ткани вокруг обычно инфильтрированы полиморфоядерными лейкоцитами. Диагностика. Диагноз человеческого актиномикоза основан на выделении и идентификации причинных агентов, потому что клинические симптомы часто вводят в

заблуждение и гистопатология и серология низкоспецифична и низкочувствительна. Присутствие друз, которые иногда придают гною внешний вид манной каши, должно инициировать поиск актиномицетов. Однако учитывая, что только 25% образцов актиномикотического гноя содержит эти гранулы, их отсутствие не исключает диагноз актиномикоза. Подходящий для бактериологического анализа актиномикоза патматериал - гной, выделения из свищей. Исследование мокроты является недостоверным, поскольку она обычно содержит актиномицеты полости рта, включая патогенные разновидности. Трансторакальная чрескожная пункционная биопсия или чрескожная пункция подозрительных абдоминальных абсцессов - часто единственные средства получения удовлетворительных образцов патматериала для диагностики.

Микроскопическое исследование. Когда присутствуют друзы, это позволяет быстро и сравнительно надежно поставить предварительный диагноз после осмотра при малом увеличении актиномикотической гранулы, помещенной под покровное стекло и с внесенным в каплю 1% р-ром метиленового синего. Актиномикотические друзы проявляются как частички, подобные цветной капусте с неокрашенным центром и синей периферией, в которых лейкоциты и короткие нити, иногда с "дубинками", исходят от центра гранулы. Окрашенные по Граму мазки, полученные сдавлением гранул между двумя стеклами, показывают нитевидные, ветвящиеся, грам-положительные структуры, которые представляют патогенные актиномицеты, а также разнообразие других грамотрицательных и грам-положительных бактерий, которые указывают на присутствие сопутствующих микроорганизмов. Наличие этих бактерий необходимо, чтобы отличить актиномикотические друзы от гранул, сформированных различными аэробными актиномицетами (Nocardia, Actinomadura, Streptomyces), которые никогда не содержат сопутствующую микрофлору. Прямая и непрямая иммунофлюоресценция для обнаружения специфических антител также может быть использована для определения разновидностей актиномицетов, находящихся в грануле, без выделения культуры.

Лечение. Хирургическое рассечение актиномикотических очагов и дренаж гнойного содержимогооснова лечения актиномикоза. Но даже радикальная операция часто кончается временной редукцией симптомов и может сопровождаться одним или большим числом рецидивов. С целью преодоления этих проблем применяют подкожное введение убитых клеток актиномицетов (гетеровакцина Lentze 1938).

Прогресс в лечении актиномикоза появился тогда, когда стали доступны сульфаниламиды и пенициллин. Пенициллин был активен против патогенных актиномицетов in vitro и in vivo. Плохой ответ на лечение пенициллином часто обусловлен наличием сопутствующих бактерий, которые являются пенициллин-резистентными. Кроме того, лекарственные средства плохо проникают через плотную ткань актиномикотических очагов и в друзы. Наконец, A. actinomycetemcomitans - обычно устойчивы к пенициллину, хотя и не производят бета-лактамаз.

Аминопенициллины более активны против патогенных актиномицетов, чем пенициллин, и, кроме того, они подавляют рост A. actinomycetemcomitans. Однако, учитывая, что они не стойки к действию бета-лактамаз, микроорганизмы, которые производят бета-лактамазы, могут мешать их терапевтической эффективности. Это редко имеет место при шейнолицевом актиномикозе, но при торакальном и, особенно, абдоминальных инфекциях продуценты бета-лактамаз обычно присутствуют. Поэтому применяемые в настоящее время схемы лечения включают препараты, эффективные против актиномицетов и потенциала продуцентов бета-лактамаз типа S. aureus, грам-отрицательных анаэробов, и, в случаях абдоминального актиномикоза,Enterobacteriaceae.

Для лечения больных, имеющих аллергию на пенициллины, вместо аминопенициллинов можно использовать тетрациклины или цефалоспорины, однако клиническая эффективность этих препаратов намного меньше, чем таковая у аминопенициллинов или комбинации аминопенициллинов с ингибиторами бета-лактамаз.

11.Плесневые грибы. Биологическая характеристика. Подтверждение этиологической роли

Плесневые грибы — различные грибы (в основном, зиго- и аскомицеты), образующие ветвящиеся мицелии без крупных, легко заметных невооружѐнным глазом, плодовых тел. Семейства, роды и виды плесневых грибов

Acremonium,Aspergillus,Dematiaceae,Fusarium,Moniliaceae,Onychocola Canadensis,Penicillium,Scytalidium dimidiatum (Nattrassia magniferae)

Плесневые грибы распространены повсеместно. В основном обширные колонии вырастают в тѐплых влажных местах на питательных средах.

Применение.Сыр стилтон содержит «благородную плесень».Штаммы гриба Aspergillus niger применяются для производства лимонной кислоты из сахаристых веществ.Штаммы Botrytis cinerea («благородная гниль») участвует в созревании некоторых вин (Сотерн).Другие виды плесеней (т. н. «благородная плесень») используются для выделки специальных сортов сыра (рокфор, камамбер).

Из пеницилла получают лекарственное средство «Пенициллин».Некоторые плесневые грибы вырабатывают вторичные метаболиты — антибиотики и микотоксины, угнетающе или токсично действующие на другие живые организмы. Наиболее известны следующие вещества:Микотоксины:Афлатоксин,Т- 2;Антибиотики:Пенициллин,Цефалоспорины,Циклоспорин. Многие антибиотики вынужденно используются в концентрациях, близких к токсическим. Так, антибиотики гентамицин, стрептомицин, дигидрострептомицин, канамицин и другие могут оказать нефро- и ототоксическое действие.

Патогены.Некоторые плесневые грибы могут вызывать заболевания животных и человека

— аспергиллѐзы, онихомикозы и другие.

Плесневые грибы рода Aspergillus нередко выявляются при культуральных исследованиях проб, отобранных из наружных слуховых проходов, носовых пазух, а также при исследовании мокроты. При этом Aspergillus fumigatus является основным возбудителем

инвазивного аспергиллеза, наиболее часто поражающего бронхолегочную систему, a Aspergillus niger способен вызывать различные заболевания ЛОР-органов, а также нередко выделяется в ассоциациях с другими возбудителями микозов. В то же время, доказать этиологическую роль грибов в каждом конкретном случае достаточно сложно, поскольку плесневые грибы нередко рассматривают как контаминацию, вследствие распространенности их спор в окружающей среде.

Онихомикоз.Поражения ногтей, обусловленные плесневыми грибами Scopulariopsis brevicaulis.Первичное поражение здоровых ногтей плесневыми грибами отмечается сравнительно редко. Причиной онихомикозов в этих случаях обычно являются грибы рода

Scopulariopsis, чаще всего Scopulariopsis brevicaulis. Чаще всего поражаются ногти больших пальцев стоп, иногда возникают онихомикозы стоп и кистей. В начале поражения в толще ногтевой пластинки появляются пятна, окраска которых варьирует в широких пределах - от серой, зеленовато-желтой до черной. Это зависит от пигментообразовательной деятельности грибов и частой их ассоциации с бактериями и дрожжеподобными грибами. В дальнейшем нижняя часть ногтя разволокняется, верхняя - утолщается. Развивается выраженный онихомикоз, ноготь деформируется.В подавляющем большинстве случаев плесневые грибы вторично внедряются в ногти, уже претерпевшие какие-либо дистрофические изменения, что чаще всего бывает у пожилых людей на фоне травмы, ишемии, дерматозов, или осложняют онихомикозы, вызванные дерматофитами. В отличие от первичных онихомикозов, обусловленных, вторично поражаются обычно несколько ногтей. Плесневые грибы в этих случаях живут в самых верхних дорсальных отделах ногтевой пластинки. Они остаются сапрофитами, сами повреждающего действия на ноготь не оказывают, но могут усилить действие основной причины, например ишемии или травмы.

Несмотря на то, что этиологическая роль плесневых грибов в развитии онихомикозов доказана, являются ли эти грибы, выделенные из пораженных ногтей, в каждом конкретном случае патогенными или сапрофитными, представляет собой трудную задачу. Для этой цели рекомендуют использовать следующие критерии [Gotz, 1965].1. Подозреваемый гриб должен при надлежащей окраске обнаруживаться при микроскопии исследуемого материала.2. Он должен повторно выделяться из очагов при температуре от 27 до 37 °С. 3. В каждом случае патогенность обнаруженного гриба должна определяться в эксперименте на животном.

Возбудители фузариотоксикозов – грибы рода Fusarium – вызывают отравления с летальным исходом у животных и человека. Наибольшее эпидемиологическое и эпизоотологическое значение имеют следующие виды, относящиеся к роду Fusarium:

1)Fusarium graminearum Schw. – возбудитель «пьяный хлеб» – поражение центральной нервной системы с летальным исходом;

2)Fusarium sporotrichiella Bil. – возбудитель алиментарно-токсическая алейкия, или

«септическая ангина» – тяжелое заболевание органов кроветворения;

3) Fusarium moniliforme – токсины его обладают канцерогенным действием. Наиболее распространенными пищевыми (кормовыми) отравлениями продуктами жизнедеятельности грибов рода Fusarium sp. – фузариотоксикозами, – являются: 1) «пьяный хлеб» – поражение ЦНС с летальным исходом; 2) алиментарно-токсическая

алейкия, или «септическая ангина» – тяжелое заболевание органов кроветворения. При тяжелом течении этих двух заболеваний быстро наступает летальный исход.

12.Криптококкоз. Биологическая характеристика возбудителей. Принципы лабораторной диагностики.

Заболевание встречается редко, но распространено повсеместно. Возбудитель- Cryptococcus neoformans (в естественных условиях выделяют из помета голубей). Морфология. Медленно растущие дрожжи(в первичном росте появляются на 3,5 или 7 сутки). Округлая форма клеток, с двуконтурной оболочкой, с одной слегка удлиненной

почкой. При неблагопр.усл. наблюдаются нитчатые формы. Характерный признак-наличие толстой слизистой капсулы, толщина которой превосходит размеры клеток (до 50мкм).В результате полового размножения формируются булавовидные голобазидии, на вершине которых формируются 4 цепочки базидиоспор Культуральные свойства. Аэроб,хорошо растет на простых сахарных средах,

ср.Сабуро(при комн.температуре вырастают блестящие слизистосальные колонии беловатого цвета с куполообразной поверхностью).Оптим. темп. 37°С . Биохимические свойства. Углеводы не ферментирует, но окисляет глюкозу, мальтозу, сахарозу. Обладает уреазой, лакказой, протеазой, липазой. Продуцируют меланин на средах с добавлением L-ДОПА или семян некоторых растений

Антигенная структура. Выявлено 4 серогр. по капсульному полисахариду: A,B,C,D. При скрещивании штаммов, относящихся к серогр. A и D или B и C,образуется мицелий и базидиоспоры (при такой морфологии гриб называется Filobasidiella neoformans).Помимо специфич.реакций могут давать перекрестные реакции с дрожжеподобными грибами и пневмококками.

Патология и патогенез. Инвазивный микоз, часто формируется на фоне иммуносупрессии. В пораженных тканях образуются гранулемы с некротическими казеозными изменениями, при поражении ГМ преобладает хронич. воспаление с наличием гигантских и эпителиоидных клеток, макрофагов и лимфоцитов. Может наблюдаться долгий латентный период. Основная форма инфекциимедл.развивающийся хронич. менингит с частыми ремиссиями и обострениями. Возможно развитие энцефалита, отмечаются изменения в легких, на коже, в других внутренних органах. При генерализации процесса неблагоприятный исход.

Лабораторная диагностика. Основана на обнаружении гриба в исслед. материале( ликвор,гной из свищей, биоптаты тканей) и выделении чистой культуры. Хорошее стимулир. действие на рост гриба оказывает желчь. Видовая идентификация (1)до рода – по микроскопии нативного материала или культуры с тушью(негативное контрастирование капсулы);(2) для исследования медицински значимых видов используется две питательные среды:

канаванин-глициновый агар с бромтиоловым синим (C.neoformans var.neoformans

образует красные колонии, C.neoformans var.grubii цвет среды не меняет.)

креатин-тимин глюкозный агар с бромтиоловым синим (исходный цвет среды желтый

C.gattii изменяет цвет среды на синий, C.neoformans не меняет цвет среды)

(3) ассимиляция углеводов, (4) MALDI-TOF-MS,парциальное ДНК-сиквенирование. С помощью разл. серологических реакций(РПГА,РП,РСК,РА) можно обнаружить специфические АТ или АГ (латекс-агглютинация и иммуноэлектрофорез).Иногда используется внутрибрюшинное заражение лабораторных мышей.

Специфическая профилактика. Не разработана!

Лечение. Применяют амфотерицин В, фторцитозин, флюкостат (по спец.схемам лечения).Показано хирургическое удаление криптококковых очагов. Есть данные о положительном эффекте от применения антикриптококкового гамма-глобулина в сочетании с химиопрепаратами.

13.Поверхностные микозы. Глубокие микозы. Примеры. Принципы лабораторной диагностики.

Из многих тысяч известных видов грибов лишь около 100 (представители 15 родов) способны вызывать микозы человека и животных. При этом патогенность большинства из них сравнительно невелика, и заболевания обычно развиваются на фоне нарушений обмена веществ, эндокринных расстройств или иммунодефицитных состояний. Предрасполагающими факторами также выступают нарушения питания, авитаминозы, дисбактериозы и многие другие. Чаще заболевания наблюдают у детей (кандидозы, дерматомикозы) у детей, а также у лиц некоторых профессий (например, у работающих на мукомольных предприятиях, у лиц, занятых в производстве антибиотиков, сотрудников

микологических лабораторий и т.д.). Патогенные грибы вызывают поражения кожи и еѐ придатков, подкожной клетчатки, иногда поражения мышц и суставов, а также различных внутренних органов, ЦНС. При этом большинство видов не продуцирует каких-либо токсических веществ, а патогенез поражений включает развитие реакций гиперчувствительности на компоненты патогенных грибов, проявляющие свойства аллергенов.

Классификация микозов по локализации и характеру поражений: поверхностные,

подкожные, глубокие и оппортунистические микозы, а также микотоксикозы.

Поверхностные микозы: Возбудители— плесневые грибы, способные разлагать кератин эпидермиса, волос и ногтей. По локализации инфекционных процессов заболевания разделяют на кератомикозы (сапрофитйи) и дерматомикозы.

Для кератомикозов характерны поражения рогового слоя эпидермиса и поверхности волосяного стержня. Возбудители мало контагиозны, а колонизация кожи и волос не сопровождается развитием выраженной воспалительной реакции. Поражения не представляют опасности для жизни, часто не требуют специального лечения и несут чисто косметические проблемы.

Разноцветный лишай— малоконтагиозное, часто встречающееся заболевание, наблюдаемое преимущественно у лиц молодого возраста при чрезмерной потливости, а также на фоне сахарного диабета. Возбудитель— диморфный дрожжеподобныи гриб Pityrosporum orbiculare (Malassezia furfur). Микроорганизмы распространены повсеместно и колонизируют роговой слой эпидермиса практически всех взрослых людей, наиболее часто кожу подмышечных впадин, спины и груди,проявляется в виде гиперили гипопигментированных пятен на коже. Депигментация обусловлена ингибированием активности тирозиназы — фермента, необходимого для синтеза меланина. Микробиологическая диагностика включает микроскопию частичек кожи из очагов поражения, обработанных КОН. В препаратах обнаруживают короткие изогнутые гифы и толстостенные дрожжеподобные клетки-фиалоконидии («макароны с фрикадельками»). При облучении очагов поражений лампой Byда наблюдают жѐлтое свечение. После посева чешуек рогового слоя на среду Сабуро через 4-8 дней появляются беловато-кремовые блестящие колонии, образованные почкующимися дрожжеподобными клетками. В терапии разноцветного лишая наиболее эффективно местное применение сульфида селена и 1% крема с тербинафином (ламизилом)

Трихоспороз (белая пьедра)- дрожжеподобныи гриб Trichosporon beigelii поражают поверхность волосяных стержней (на голове, конечностях и лобке) с формированием мягких беловато-жѐлтых узелков. Последние образованы мицелием, содержащим овальные или круглые артроконидии. Заболевание чаще регистрируют в странах с тѐплым или тропическим климатом. У лиц с иммунодефицитами возможны фунгемии с развитием эндофтальмитов, абсцессов головного мозга, эндокардитов и др. При микроскопии материала из очагов поражений обращают внимание на наличие псевдогиф, иногда септированных гиф, многочисленные артроконидии и небольшое количество бластоконидий. Для лечения применяют амфотерицин Б, иногда в комбинации с 5- фторцитозином.

Чѐрная пьедра. Возбудитель— плесневой гриб Piedraia hortae. Заболевание проявляется образованием плотно спаянных чѐрных твѐрдых узелков диаметром 1 мм, расположенных на волосах головы, бороды и усов. Заболевание регистрируют во влажных тропических регионах Южной Америки и Индонезии. Возбудитель способен как к поверхностному, так и к внутреннему росту (по ходу волосяного стержня), что приводит к повышенной ломкости волос. Для лечения удаляют волосяной покров на поражѐнных участках и обрабатывают кожу каким-либо поверхностным фунгицидом, например ртути дихлоридом.

При дерматомикозах поражаются эпидермис, собственно кожа и волосяной стержень.

Возбудители широко распространены в природе. Инфицирующие агенты — фрагменты гиф и конидии, передающиеся контактным путѐм. Основным условием для заражения

является мацерация кожи, поэтому наиболее часто инфицирование происходит в банях, бассейнах и душевых.Возбудителей дерматомикозов разделяют на три эпидемически значимые группы.

Геофильные дерматофиты обитают в почве; заражение происходит после контакта с инфицированной землѐй. Основные возбудители — Microsporum gypseum, Trichophyton ajelloi, Т. terrestre.

Зоофильные дерматофиты — паразиты животных, выступающих источником заражения людей. Основные возбудители — Microsporum canis (кошки, собаки), М. gallinae (домашняя птица), Trichophyton verrucosum (крупный рогатый скот), Т. equinum (лошади)

Антропофильные дерматофиты — паразиты человека, заражение происходит в результате контакта с больным. Основные возбудители — Epidermophyton floccosum, Microsporum audouinii, Trichophyton mentagrophytes var. interdigitale, T rubrum, T. schoenleinii.

Вирулентность дерматофитов низкая; как факторы их вирулентности можно рассматривать кератинолитические протеазы. Патогенез не изучен. Дерматофиты поражают только кожу; во многом это обусловлено фунгицидным действием сыворотки крови (за счѐт активности трансферрина, хелирующего ионы Fe +, необходимые грибам) и неблагоприятным влиянием температуры (37 °С).

Методы диагностики поверхностных микозов.

Диагностика поверхностных микозов основана на данных микроскопии поражѐнных тканей и идентификации культур грибов, выделенных из них. Возбудителей микроспории достаточно легко выявляют облучением волос УФ-лампой Вуда (поражѐнные участки светятся зелѐным цветом). Морфологическая идентификация возбудителей дерматомикозов в образцах тканей затруднена и требует выделения чистой культуры. Материалом для исследований служат волосы, фрагменты кожи и ногтей. Образцы микроскопируют в неокрашенных препаратах, обработанных КОН. В кератинизированных тканях грибы образуют только гифы и артроспоры — их наличие позволяет отличить грибковую инфекцию кожи от прочих поражений, например аллергических. Выделение культур возбудителя дерматомикозов осуществляют помещая отдельные волосы или фрагменты кожи на агар Сабуро, агар Сабуро с антибиотиками или картофельный декстрозный агар. Возбудителей дерматомикозов идентифицируют микроскопически, по морфологии колоний и особенностям роста на дифференциально-диагностических средах. • Виды Trichophyton вырастают за 2-3 нед, колонии разноцветные, конидии большие, гладкие и септированные (до 10 септ), по форме напоминают карандаши (10-50 мкм). Внутривидовая идентификация затруднена и требует изучения биохимических свойств. • Виды Microsporum растут также медленно, макроконидии толстостенные, многоклеточные, веретенообразные, 30-160 мкм длиной и покрыты шипиками. • Epidermophyton floccosum образует белые, жѐлтые или оливковые колонии. Грибы идентифицируют по наличию множества гладких конидий, напоминающих дубинки (7-20 мкм длиной).

Глубокие микозы.Эумикотическая мицетома (мадуромикоз, мадурская стопа) — хроническая инфекция. Обычны поражения стопы, реже — кисти. Основной возбудитель

— плесневой гриб Pseudoallescheria boydii — сапрофит, обитающий в почве, навозе, гниющих растениях, сточных и прибрежных водах многих стран мира. Наиболее часто возникают поражения стоп, однако возможно инфицирование ран любой части тела. Характерны локальные очаги поражения с отѐками и множественные абсцессы со свищами. Иногда наблюдают вторичные поражения костей и бактериальные суперинфекции, часто заканчивающиеся фатально.

Микробиологическая диагностика-мероприятия, направленные на выделение и идентификацию возбудителя. Микроскопия биоптатов или гнойного отделяемого иногда помогает выявить гифы гриба, однако чаще их поиски оказываются безуспешными, поскольку возбудители склонны образовывать в тканях микроколонии в виде (в зависимости от возбудителя) жѐлтых, красных, белых, коричневых и чѐрных зѐрен

размером 0,5-2,0 мкм.

Гистоплазмоз (болезнь Дарлинга) — обычно самоограничивающаяся инфекция дыхательных путей. Реже наблюдают хронизацию и диссеминирование процесса.

Возбудитель — диморфный гриб Histoplasma capsulatum var. capsulatum.

Криптококкоз(болезнь Буссе-Бушке) — диссеминированный микоз, обычно наблюдаемый у лиц с выраженным иммунодефицитом. Возбудитель — дрожжевой гриб Cryptococcus neoformans

Материал для исследований криптококкоза — гнойное отделяемое и биоптаты из поражѐнных органов. Микроскопия криптококкоза довольно легко позволяет выявить С. neqformans в мазках, окрашенных тушью, так как при инвазивном росте грибковые клетки достигают значительных размеров (до 25 мкм), обусловленных формированием большой капсулы • Для выделения культуры криптококкоза материал засевают на микологические среды. При температуре 21 °С в течение 1-5 сут появляются гладкие блестящие выпуклые сочные беловато-жѐлтые колонии. На агаре Сабуро гриб может образовывать кремовокоричневые колонии. Клетки, полученные из культур, более мелкие (4-6 мкм) и окружены капсулой.

Бластомикоз (болезнь Джилкрайста) — локальный или системный микоз, наиболее часто проявляющийся поражениями кожи, лѐгких и других внутренних органов. Возбудитель — диморфный гриб Blastomyces dermatitidis.

Кокцидиоидомикоз (болезнь Вернике-Посады, кокцидиоидоз) — неконтагиозный системный микоз, проявляющийся первичной лѐгочной инфекцией либо прогрессирующими гранулематозными поражениями кожи, костей, суставов, внутренних органов и мозговых оболочек. Возбудитель кокцидиоидомикоза — диморфный гриб

Coccidioides immitis

Методы диагностики глубоких микозов:

1)Микроскопия и посев мокроты, гноя, суставной жидкости, центрифугата спинномозговой жидкости (при подозрении на менингит), другого материала из очагов поражения при 25 и 37 оС.

2)Гистологическое исследование биопсийного материала из очагов поражения при окраске PAS-методом, импрегнации по методу Гомори-Грокотт.

3)Кожная проба с кокцидиоидином или сферулином.

4)Определение IgМ к Coccidioides immitis в сыворотке крови методом латексагглютинации, преципитации или иммунодиффузии.

5)Определение IgG к Coccidioides immitis в сыворотке крови методом фиксации комплемента или иммунодиффузии.

6)Определение антител к Coccidioides immitis в цереброспинальной жидкости при подозрении на менингит.

*ШИК-реакция или PAS-реакция (для выявления гликогена). Реактив - Шифф-

периодная кислота (выделенные буквы и составляют аббревиатуру ШИК – шифф-йодная кислота). Под влиянием периодата калия гликоген окисляется с образованием альдегидных соединений, легко реагирующих с реактивом Шиффа (фуксин-сернистая кислота). В местах локализации гликогена выявляется вишнево-фиолетовое окрашивание, по интенсивности которого можно судить о количестве гликогена в клетках.Кроме гликогена, положительную реакцию могут давать такие ШИК-положительные вещества, как кислые и нейтральные мукополисахариды, мукопротеины, гликопротеины и др.

*Импрегнация по методу Гомори-Грокотт. Фиксация: 10% формалин.Растворы: 2%

хромовая кислота,5% нитрат серебра,3% метенами, Маточный раствор метенамин-серебра, Маточный раствор светового зеленого… Результаты: Грибы окрашены очень контрастно в черный цвет. Муцин – в темно-серый

цвет.Внутренние части гифов грибов – в темно-розовый. Окружающие тканиокрашены в светло-зеленый.

*Кожная проба с кокцидиоидином или более новым препаратом сферулином

высокоспецифична, за исключением случаев перекрестных реакций при гистоплазмозе и бластомикозе. Положительная кожная проба позволяет отличить «свежую» инфекцию от «старой» только в том случае, если незадолго до этого она была отрицательной. В то же время отрицательная кожная проба не исключает кокцидиоидозной инфекции. Кокцидиоидин вводят внутрикожно по 0,1 мл в разведении 1:1000, 1 : 100 и даже 1:10. Реакция максимально выражена через 36 ч, читают ее через 24 и 48 ч. Реакция считается положительной при появлении на месте инъекции уплотнения размером не менее 5 мм.

14. Использование микроскопических грибов в пищевой промышленности.

В пищевой промышленности находят применение различные микроскопические грибы: многочисленные дрожжевые культуры имеют важное значение для приготовления уксуса, алкоголя и различных спиртных напитков: вина, водки, пива, кумыса, кефира, а также в хлебопечении. Биотехнологические функции грибов разнообразны. Их используют для получения таких продуктов, как:

-антибиотики (пенициллы, цефалоспорины);

-гиббереллины и цитокинины (фузариум и ботритис);

-каротиноиды (н-р, астаксантин, придающий мякоти лососевых рыб краснооранжевый оттенок вырабатывают Rhaffia rhodozima, которых добавляют в корм на рыбозаводах);

-белок (Candida, Saccharomyces lipolitica);

-сыры типа рокфор и камамбер (пенициллы);

-соевый соус (Aspergillus oryzae)..

Из 500 известных видов дрожжей первым люди научились использовать Saccharomyces cerevisiae, этот вид наиболее интенсивно культивируется. К дрожжам, сбраживающим лактозу, относится Kluyveromyces fragilis, который используют для получения спирта из сыворотки. Saccharomycopsis lipolytica деградирует углеводороды и употребляется для получения белковой массы. Все три вида принадлежат к классу аскомицетов. Другие полезные виды относятся к классу дейтеромицетов (несовершенных грибов), так как они размножаются не половым путем, а почкованием. Candida utilis растет в сульфитных сточных водах (отходы бумажной промышленности). Trichosporon cutaneum, окисляющий многочисленные органические соединения, включая некоторые токсичные (например, фенол), играет важную роль в системах аэробной переработки стоков. Phaffia rhodozyma синтезирует астаксантин - каротиноид, который придает мякоти форели и лосося, выращиваемых на фермах, характерный оранжевый или розоватый цвет. Промышленные дрожжи обычно не размножаются половым путем, не образуют спор и полиплоидны. Последним объясняется их сила и способность адаптироваться к изменениям среды культивирования.

Плесени вызывают многочисленные превращения в твердых средах, которые происходят пред брожением. Их наличием объясняется гидролиз рисового крахмала при производстве сакэ и гидролиз соевых бобов, риса и солода при получении пищи, употребляемой в азиатских странах. Пищевые продукты на основе сброженных плесневыми грибами Rhizopus oligosporus соевых бобов или пшеницы содержат в 5 - 7 раз больше таких витаминов, как рибофлавин, никотиновая кислота) и отличаются повышенным в несколько раз содержанием белка. Плесени также продуцируют ферменты, используемые в промышленности (амилазы, пектиназы и т.д.), органические кислоты и антибиотики. Их применяют и в производстве сыров, например, камамбера и рокфора.

Искусственное разведение древоразрушающих грибов получило довольно широкое распространение. Мицелий съедобных грибов можно выращивают на жидких средах, например на молочной сыворотке и др., в специальных ферментерах, в так называемой глубинной культуре. Это полностью механизированный и автоматизированный процесс. Так, в Институте микробиологии Академии наук БССР разработаны и апробированы в

опытном производстве способы получения белковых грибных препаратов даедалина и пантегрина из мицелия древоразрушающих грибов дедалеопсиса бугристого и пилолистника тигрового, с высоким содержанием белка и биологически активных веществ. По содержанию белка 1 кг этих препаратов эквивалентен 2 кг мяса. По биологической ценности белок этих препаратов не уступает растительным и приближается к животным белкам. Перевариваемость белков данных препаратов составляет свыше 80 %. В основе этого способа получения пищевого белка лежат полученные микологами данные о том, что плодовые тела грибов и их грибница близки по своему химическому составу и пищевой ценности. Грибные белковые препараты даедалин и пантегрин рекомендованы в качестве пищевых добавок после соответствующего медицинского контроля. Исследования в этом направлении продолжаются.