kr1

Конкурентный ИФА для определения антигенов: искомый антиген(1) и меченый

ферментом антиген(2) конкурируют друг с другом за антитела (3), сорбированные на твердой фазе.

Конкурентный ИФА для определения антител: искомые антитела и меченые ферментом антитела конкурируют друг с другом за антигены, сорбированные на твердой фазе. Лечение и специфическая профилактика. Специфическая профилактика. Вакцину для профилактики синегнойной инфекции получают из О-АГ клеточной стенки, Н-АГ жгутиков и слизистой капсулы. Для иммунизации используют также анатоксины их протеаз и экзотоксина А. В России применяется корпускулярная поливалентная синегнойная вакцина из 7 штаммов P.aeruginosae и стафило-протейно-синегнойная вакцина. При тяжелых травмах и обширных ожогах рекомендуется проводить вакцинацию тяжелых больных немедленно после их поступления в клинику. Ослабленным больным рекомендуют вводить иммуномодуляторы или иммуноглобулины. При пищевых токсикоинфекциях и дисбактериозах кишечника, вызванных синегнойной палочкой, эффективен комплексный интести — бактериофаг, в состав которого входит псевдомонадный фаг. Из антибактериальных препаратов чаще применяют аминогликозиды, цефалоспорины и хинолоны.

Неспецифическая профилактика: проведение текущей дезинфекции и асептических мероприятий, соблюдение асептики в палатах для больных, процедурных и операционных. Необходим бактериологический контроль за внешней средой и соблюдение мед персоналом правил личной гигиены.

5. Клостридии. Биологическая характеристика. Вызываемые

заболевания.

Род Clostridium включает более100 видов. Среди них патогенные и сапрофитные анаэробные спорообразующие палочковидные микроорганизмы, за исключением нескольких сульфатредуцирующих пигментообразующих видов.

Морфология: Это подвижные (перитрихи) крупные палочки с закругленными концами, образуют овальные или круглые эндоспоры, придающие клостридиям (греч. сloster — веретено) ветеренообразную форму. Спора в диаметре больше поперечника вегетативной клетки, располагается в центре клетки или ближе к концу. Часто располагаются попарно или в виде коротких цепочек. В молодых культурах грам+.

Культуральные свойства: в целом клостридии – облигатные анаэробы, но среди них есть и аэротолерантные (C. Perfringens, C.histolyticum); умеренные анаэробы (C. Butiricum);

строгие анаэробы (C.tetani, C.novyi и др.).

Б/х свойства: сахаролитичесская и протеолитическая активность различна. Распространенность: широко распространенны в природных средах – почва, водоемы; составляют часть сикрофлоры урогенитального, респираторного и пищеварительного тракта животных и человека, обеспечивая процессы брожения и гниения. Во внешней среде выживают в виде спор, но при благоприятных условиях активно вегетируют. Факторы патогенности: инвазивность и токсигенность. Инвазивность обусловлена действием ферментов. Экзотоксины вызывают более широкие системные поражения организма. У некоторых клостридий, токсигенность которых не высока (C.chuvoei, C.septicum), факторами патогенности являются жгутики, которые обеспечивают подвижность, адгезию и гемагглютинацию.

По экологическим и патогенным свойствам можно выделить три группы клостридий:

— сапрофиты, вызывающие бродильные (сахаролитические) процессы;

-сапрофиты, вызывающие процессы гниения (протеолиза);

-патогенные виды — по биохимическим свойствам могут вызывать процессы гниения и брожения.

Патогенные виды клостридий условно разделяются на три группы: возбудителей травматических (раневых) клостридиозов — газовой гангрены, столбняка; возбудителей энтеральных клостридиозов (токсикоинфекций) — ботулизма, псевдомембранозного колита; и виды, вызывающие патологические процессы только в ассоциациях между собой или с другими микроорганизмами.

Современная систематика выделяет пять групп клостридий по расположению спор, способности гидролизовать желатин и наличию особых условий для роста. Все патогенные для человека виды ферментируют желатин, отличаясь расположением спор — терминальное, т.е. в виде тенисных ракеток - у четвертой группы (C.tetani — возбудитель столбняка); субтерминальное (веретено) у второй группы (остальные возбудители: C.botulinumвозбудитель ботулизма, C.perfringens и другие возбудители газовой гангрены, C.difficile — возбудитель псевдомембранозного колита).

6. Столбняк. Биологическая характеристика возбудителя. Патогенез и

клиника.

Возбудитель столбняка Clostridium tetani ( семейство Clostruduaceae, род Clostridium)

Морфология: крупная спорообразующая подвижная (перитрихи) грам+ палочка, старые формы не окрашиваются. Споры располагаются терминально (вид барабанной палочки), капсула отсутствует.

Культуральные свойства: для выращивания используют специальные питательные среды – бульон Китта-Тароци* , кровяной агар с глюкозой*, тиогликолевый бульон*, среда Вильсона-Блер*, среда Вейнберга*, среда Виллиса и Хоббса*. Посевы помещают в микроанаэростаты, из которых удаляют воздух. C. tetani для роста нуждается в аминокислотах: аргинине, гистидине, валине, лейцине, изолейцине и триптофане. На

твердых питательных средах в анаэробных условиях образуют тонкие прозрачные колонии двух типов: серовато-желтые шероховатые (R-формы) и гладкие (S-формы). На кровяном агаре формируют зоны гемолиза. На жидких питательных средах растет придонно. При посеве уколом в столбик в агаром вырастает в виде чечевичек (R-формы) или пушинок (S- формы). Температурный оптимум 37градусов, рН=7,0-7,9.

Б/х свойства: C.tetani – строгий анаэроб. У него отсутствуют цитохромы, цитохромоксидаза, пероксидаза и каталаза. Поэтому кислород для него – яд. Клостридии имеют бродильный тип метаболизма с образованием уксусной, масляной, пропионовой кислот и этанола. Большинство штаммов не ферментируют углеводы, обладают слабой протеолитической акстивностью.

Антигенные свойства. Возбудитель имеет О- и Н- антигены. По О-АГ делят на серогруппы. По Н-АГ выделяют 10 сероваров возбудителя. Все они продуцируют одинаковые по антигенным свойствам экзотоксины.

Факторы патогенности. Главный фактор — сильнейшие экзотоксины: тетаноспазмин (нейротоксин) и тетанолизин (гемолизин). Тетаноспазмин – полипептид, состоящий из двух частей: тяжелая Н-часть, которая обеспечивает фиксацию молекулы на рецепторах мембран аксоновых окончаний, и L-часть, которая проникает в отростки нервных клеток и подавляет там действие тормозных нейромедиаторов, что вызывает местные тетанические сокращения ППМ. Тетанолизин – белковый мембранный токсин. Вызывает гемолиз эритроцитов, кардиотоксический эффект и подавляет фагоцитоз, способствуя распространению возбудителя по организму.

Патогенез и клиника: заражение столбняком происходит при проникновении возбудителя в организм через повреждения кожи и слизистых оболочек, чаще всего при ранениях (боевых, производственных или бытовых). Инкубационный период – 6-14 дней. Палочки столбняка остаются в ране. Главной причиной заболевания является экзотоксин, продуцируемый микробами. По кровеносным, лимфатическим сосудам и нервным стволам он распространяется по организму, достигая спинного и продолговатого мозга, и поражает нервные окончания синапсов, в результате чего нарушается проведение импульсов по нервным волокнам. Клинически это проявляется нисходящим спазмом: жевательных мышц, затруднением глотания, напряжением мышц лица, затылка и спины. У больного появляется вынужденная «сардоническая» улыбка. Характерны постоянные мышечные боли, выраженная чувствительность с=к внешним раздражителям, частые генерализованные судороги. При приступах туловище принимает дугообразный вил. Болезнь протекает при повышенной температуре тела и ясном сознании. Смерть наступает от паралича дыхательного центра, асфиксии (поражение мышц гортани, диафрагмы, межреберных мышц) или паралича сердца. В случае выздоровления судороги ослабевают, состояние больного улучшается. Длительность заболевания при благоприятном исходе – до 2 месяцев.

*среда Китта-Тароци- жидкая питательная среда для культивирования анаэробных микроорганизмов, состоящая из мясопептонного бульона, обогащенного экстрактивными продуктами печени животных и содержащего кусочки вываренной печени в качестве поглотителя свободного кислорода *кровяной агар с глюкозой - агар 2% на бульоне Хоттингера в объеме 100 мл расплавляют

и охлаждают до +450С, после чего добавляют к нему 10-15 мл свежевзятой стерильной дефибринированной крови кролика, барана или крупного рогатого скота и 10 мл 20% стерильного раствора глюкозы. Смесь взбалтывают так, чтобы не образовалось пузырей пены, и разливают по чашкам *тиогликолевй бульон - Редуцирующие вещества, такие как тиогликолят и цистин -

обеспечивают анаэробные условия, достаточные даже для строгих анаэробов 8среда Вильсона-Блер - Железо-сульфитный агар готовят следующим образом: к 100 мл

расплавленного и охлажденного до 60—80° 3% мясо-пептонного агара с 1% глюкозы (pH

8,0) добавляют 10 мл 20% свежеприготовленного раствора сернистокислого натрия и 1 мл 8% раствора хлорного железа. Раствор сернистокислого натрия предварительно стерилизуют текучим паром в течение 1 часа, а раствор хлорного железа готовят на стерильной дистиллированной воде. Имеется возможность замены сернисто-кислого натрия серноватистокислым, а хлорного железа — сернокислым. Приготовленную среду, не стерилизуя, разливают в пробирки и для контроля стерильности помещают на сутки в термостат при t° 37°. В процессе роста анаэробов сернистокислый натрий восстанавливается с образованием сернистого железа. Cl. perfringens, Cl. oedematiens, С1. sporogenes, Cl. fallax, Cl. chauvoei на этой среде образуют интенсивночерные колонии. Колонии Cl. tetani и Cl. histolyticum окрашиваются в зеленовато-черный цвет

*среда Вейнберга - питательные среды, применяемые для выращивания патогенных анаэробов и получения их токсинов.

Практическое применение получили следующие В. с.

1.Жидкая среда обогащения Vf представляет собой смесь водного экстракта сердечной мышцы быка и пептона из свиных желудков и печени. Перед засевом к бульону стерильно добавляют 0,5% глюкозы. Среда рекомендуется для получения токсинов группы возбудителей газовой гангрены, для выращивания Cl. botulinum.

2.Среда Вейнберга — Гой для получения ботулинического токсина.

3.Полужидкий агар для выращивания и хранения штаммов анаэробов.

4.Углеводные среды для определения сахаролитических свойств анаэробов. Отдельно приготовляют 30% водные растворы сахарозы, глюкозы, мальтозы, галактозы, левулезы, арабинозы, дульцита и глицерина и тд, фильтруют растворы через бумажный фильтр, разливают в ампулы по 5—10 мл и стерилизуют. 5—10 капель основного раствора каждого субстрата вносят в отдельные пробирки с пептонной водой и после контроля на стерильность засевают испытуемой культурой. Результаты регистрируют через 24 часа, добавляя каплю лакмусовой настойки, дающей при сбраживании субстратов красное окрашивание.

7. Столбняк. Эпидемиология. Формы инфекции, диагностика.

Плановая и экстренная профилактика.

Эпидемиология: являясь нормальным обитателем кишечника человека и животных, клостридии попадают с фекалиями в почву. Вегетативные формы C.tetani быстро погибают во внешней среде, а споры, устойчивые к внешним воздействиям (погибают при кипячении через 1-3ч, при автоклавировании 120градусах через 40 мин, в водных растворах дезинфектантов через 15мин) способны десятилетиями размножаться в почве и пыли. Механизм передачи: контактный, входные ворота – поврежденная кожа, слизистые (раны). Формы инфекции: Существует деление столбняка на формы в зависимости от тяжести течения заболевания.

Легкая: признаки заболевания нарастают за 5-6 дней; температура тела нормальная либо слегка повышена; тризм (затрудненное открывание рта), « сардоническая улыбка» (напряжение мимической мускулатуры, придающей лицу больного своеобразное выражение: морщинистый лоб, суженные глазные щели, растянутые губы, опущенные уголки рта) и тонус мышц умеренные.

Среднетяжелая: признаки заболевания нарастают за 3-4 дня; судороги возникают несколько раз в сутки; температура тела умеренная, реже высокая.

Тяжелая: признаки заболевания нарастают за 1-2 дня; явно заметны типичные проявления болезни с нарушением глотания, мимики, тонуса мышц, нарушений дыхания; частые и интенсивные судороги (несколько раз в течение часа); выраженное потоотделение и учащенное сердцебиение; высокая температура тела (до 39-40 градусов).

Очень тяжелая: признаки заболевания нарастают очень быстро; судороги возникают несколько раз в течение 3-5 мин.; температура тела очень высокая (около 40 градусов);

выраженная одышка, учащенное сердцебиение; синюшность кожи; угроза прекращения возможности дышать.

Другое деление на формы связано с путем проникновения столбнячной палочки в организм:

травматический столбняк (попадание столбнячной палочки в рану при травматических повреждениях кожи); столбняк, развившийся в результате воспалительных и разрушающих целостность кожи процессов (попадание инфекции, если кожа повреждена не от травмы, а

врезультате болезней кожи); с невыясненными входными воротами (непонятно, каким образом произошло заражение).

Также выделяют отдельные формы столбняка по особенностям внешних проявлений. Местный столбняк: встречается редко, в основном у ранее привитых лиц; характеризуется местными нарушениями, не затрагивающими всего организма; характеризуется спазмами и подергиваниями мышц в месте ранения; незначительное повышение температуры тела; отсутствие общих судорог; часто переходит в общий столбняк.

Головной столбняк Розе: разновидность местного столбняка; возникает редко, обычно после ранений лица или головы; к классическим проявлениям столбняка в области головы

ввиде тризма (затрудненное открывание рта), напряжения затылочных мышц, « сардонической улыбки» (напряжение мимической мускулатуры, придающей лицу больного своеобразное выражение: морщинистый лоб, суженные глазные щели, растянутые губы, опущенные уголки рта), присоединяются симптомы нарушений черепных нервов. Обычно это поражение двухстороннее, более выражено на стороне ранения.

Головной столбняк Бруннера: очень тяжелая форма; протекает с преимущественным поражением мышц лица, шеи и глотки; поскольку при нем напрямую поражаются нервные центры, ответственные за дыхательные мышцы, и нервы, регулирующие деятельность внутренних органов, прогноз и тяжесть течения крайне неблагоприятны.

Столбняк новорожденных (заражение происходит при попадании столбнячных палочек в пупочную рану плода при родах): общие проявления как у взрослых; местные изменения затрагивают пупочную ранку (она как будто « намокает», либо краснеет, либо из нее выделяется гной)

Лабораторная диагностика. Микробиологическая диагностика включает бактериоскопию исходных материалов, посев для выделения возбудителя и его идентификацию, обнаружение столбнячного токсина. Исследованию подлежит материал от больного (особенно в местах проникновения возбудителя в организм — из ран – отделяемое раны, кровь), трупа (кровь, кусочки печени и селезенки), перевязочный и шовный хирургический материал, пробы почвы, пыли и воздуха. Подозрение на столбняк вызывает выявление в окрашенных мазках грамположительных палочек со спорами в виде барабанных палочек. Исследуемый материал засевают на среду Китта-Тароци и затем на твердые питательные среды для получения ЧК и ее идентификации на основе морфологических, культуральных, биохимических и токсигенных свойств. Наличие экзотоксина выявляют биопробой на мышах, у которых после его введения развивается типичная картина столбнячной интоксикации: Одну группу заражают исследуемым материалом, вторую (контрольную) — после смешивания проб с антитоксической столбнячной сывороткой. При наличии столбнячного токсина опытная группа мышей погибает, контрольная — остается живой. Специфическая профилактика. Для создания активного иммунитета в плановом порядке проводят иммунизацию детей с 3-5 месячного возраста адсорбированным столбнячным анатоксином, входящим в АКДС (адсорбированная убитая корпускулярная коклюшно- дифтерийно-столбнячная вакцина), содержащая анатоксины столбняка, дифтерии и убитые коклюшные палочки; АДС (адсорбированная дифтерийно-столбнячная вакцина); секстанатоксина (сорбированные столбнячный, ботулинистический и гангренозный анатоксины). Пассивная профилактика проводится противостолбнячным человеческим иммуноглобулином (ПСЧИ) или противостолбнячной антитоксической лошадиной

сывороткой (ПСС). Плановая активная иммунопрофилактика столбняка проводится согласно «календаря профилактических прививок» АКДС, АДС, АДС-М.

Экстренная профилактика при травме, ожогах, обморожениях заключается в введении столбнячного анатоксина в количестве 0,5 мл пациентам, иммунизированным в прошлом столбнячным анатоксином. Для экстренной специфической профилактики столбняка применяют:

АС-анатоксин; противостолбнячный человеческий иммуноглобулин (ПСЧИ); при отсутствии ПСЧИ сыворотку противостолбнячную лошадиную очищенную концентрированную жидкую (ПСС).

Неспецифическая профилактика проводится путем тщательной ПХО раны с удалением загрязненных землей тканей. После ПХО пострадавшим вводят сорбированный столбнячный анатоксин или анатоксин с антитоксической сывороткой.

Лечение. Используют донорский противостолбнячный иммуноглобулин (антитоксин), антитоксическую сыворотку (350МЕ/кг), антибиотики (пенициллины, цефалоспорины). Для создания вакцинального иммунитета используют столбнячный анатоксин, чаще в составе АКДС.

-бактериальные ассоциации: клостридии, стафилококки, протеи, псевдомонасы и др.;

-разрушение глубоких мышц (глубина и распространенность повреждения);

-недостаток кислорода в ране (колотые, огнестрельные);

-нарушение кровообращения в ране (наложение жгута);

-одновременное попадание анаэробов и аэробов.

Патогенез: ведущая роль в механизме заболевания принадлежит экзотоксинам.

I фаза – инфекционная: споры прорастают, вегетативные формы продуцируют, выделяют токсины L- токсины и ферменты, которые расширяют зону некроза, разрушая мышечную( альфа-токсин) и соединительную ткани( коллагеназа, гиалуронидаза); ферментируется мышечный гликоген, выделяется молочная кислота, углекислый газ, водород, появляется симптом крепитации( хруст при надавливании на ткани), некроз сосудистой стенки, отек, почернение и деструкция кожи.

II фаза – токсическая: интоксикация, некроз тканей, отек, гемоглобинурия, почечная недостаточность (обусловлено токсинами); бактериемия в последней стадии не имеет существенного значения. Смерть наступает от гипотонии периферических сосудов (сосудистый шок).

Инкубационный период: от нескольких часов до 5 дней, продолжение заболевания 5-6 дней, летальный исход в 60 %.

Клиника: наряду с симптомами интоксикации усиливаются боли в области раны, которая покрывается серым налетом, при разрыве тканей выделяется темная жидкость с неприятным гнилостным запахом. Поступая в кровь, токсические в-ва, продукты распада тканей приводят к гемолизу, развитию почечной недостаточности, токсическому шоку. Летальный исход в течении 2-3 дней.

Иммунитет: выражен естественный из-за наличия в кишечнике здорового человека клостридий; постинфекционный – непрочный, непродолжительный, ведущая роль принадлежит антитоксическому иммунитету, который также ненапряженный.

9, Лабораторная диагностика, лечение, профилактика.

Материал для исследования

1.Экссудат из раны.

2.Кусочки измененной ткани из раны.

3.Инородные тела, попавшие в рану.

4.Кровь (генерализация процесса).

Основные методы исследования

1.Микроскопический.

2.Бактериологический.

3.Биологический.

4.Экспресс-методы

5.Биопроба

Ход исследования

1)Первый день исследования