kr1

Диагностика

11. Шигеллы. Классификация. Биологические свойства. Патогенез

вызываемых заболеваний.

Шигеллы — кишечные патогены человека и приматов, которые вызывают бактериальную дизентерию или шигеллезы. В соответствии с антигенной структурой О- антигена и биохимическими свойствами известные серотипы шигелл разделяют на четыре вида или серогруппы — S.dysenteriae (серогруппа А), S.flexneri (серогруппа В), S.boydii (серогруппа С) и S.sonnei (серогруппа Д).

По морфологическим признакам шигеллы не отличаются от остальных энтеробактерий. Это неподвидные (нет жгутиков) факультативно — анаэробные грамотрицательные мелкие палочки. Не имеют капсулы или способны образовывать микрокапсулу. Из особенностей могут иметь пили или фимбрии.

Биохимические свойства. По типу питания хемоорганотрофы. К питательным средам не требовательны. На плотных питательных средах вырастают мелкие, бесцветные, круглые, выпуклые, полупрозрачные (шероховатые) колонии. На жидких питательных среда диффузное помутнение. Шигеллы по сравнению с другими кишечными бактериями биохимически малоактивны. Не образуют сероводород на трехсахарно — железном агаре, не ферментируют мочевину.

Наименьшей ферментативной активностью обладают штаммы S.dysenteriae (серогруппа А), ферментирующие только глюкозу без газообразования, в отличие от других шигелл этот вид является маннит — отрицательным.

Шигеллы Флекснера ферментируют маннит, образуют индол, но не ферментируют лактозу, дульцит и ксилозу. Серотип Ньюкасл разделен на три биохимических типа. Для шигелл Флекснера более характерен водный путь передачи.

Шигеллы Бойда (серогруппа С) имеют близкую биохимическую активность, однако ферментируют дульцит, ксилозу и арабинозу. Имеют ряд серотипов, каждый из которых имеет свой главный типовой антиген.

Шигеллы Зонне (серогруппа Д) способны медленно ферментировать лактозу и сахарозу, имеют биохимические типы и фаготипы. Основной путь передачи — пищевой (чаще через молоко и молочные продукты).

Эпидемиология. Шигеллы достаточно устойчивы во внешней среде. Источник инфекции

— человек с различными формами клинического проявления шигеллезов. Механизм заражения - фекально — оральный. Для различных видов шигелл характерны преобладающие пути передачи (контактнобытовой — для S.dysenteriae, пищевой — для S.sonnei, водный — для S.flexneri). Для эпидемического процесса характерна изменение структуры циркулирующих популяций возбудителей — смена ведущих видов, биоваров,

сероваров, что связано как с изменениями популяционного иммунитета, так и с изменениями свойств возбудителя, особенно с приобретением различных плазмид (R, F, Col и др.). Инфицирующая доза — порядка 200 — 300 шигелл. Более легкое течение имеет дизентерия, вызванная шигеллами Зонне.

Факторы патогенности и патогенез поражений. Главная биологическая характеристика шигелл — способность внедряться в эпителиальные клетки, размножаться в них и вызывать их гибель. Формирование очага в слизистой нисходящего отдела толстого кишечника (сигмовидная и прямая кишки) носит циклический характер: адгезия, колонизация, внедрение шигелл в цитоплазму энтероцитов, размножение, разрушение и отторжение эпителиальных клеток, выход шигелл в просвет кишечника, снова адгезия и т.д.

Ферменты защиты и агрессии: нейрамидиназа, муциназа, гиалуронидаза. Токсины: эндотоксин, энтеротоксин, токсин Шига, шигоподобный токсин.

Патогенез бактериальной дизентерии. Основные клинические проявления. Лабораторная диагностика острой и хронической дизентерии.

Дезентерию вызывают шигеллы основных патологических серогрупп(A,C,D)

Роль факторов адгезии и колонизации выполняют пили, белки наружной мембраны, ЛПС, ферменты — нейраминидаза, муциназа, гиалуронидаза (разрушают слизь).

Шигеллы имеют целый ряд факторов инвазии и устойчивости к действию механизмов защиты (К- антиген, ЛПС и др.), контролизуемых хромосомными генами шигелл и плазмидами.

Шигеллы имеют различные токсины. Они имеют эндотоксин и шигаподобные цитотоксины (SLT-1, SLT-2). Цитотоксины обусловливают разрушение клеток, энтеротоксин — диарею, эндотоксин — общую интоксикацию. Токсин Шига вызывает нарушение синтеза белка, всасывания ионов натрия и воды, приток жидкости в очаг воспаления.

Наиболее типичные признаки дизентерии — понос, тенезмы (болезненные спазмы прямой кишки) и частые позывы, общая интоксикация. Характер стула определяется степенью поражения толстого кишечника.

Диагностика.

Для серологической диагностики используют РПГА с групповыми эритроцитарными диагностикумами.

12. Бактериальная дизентерия. Основные клинические проявления.

Лабораторная диагностика острой и хронической дизентерии.

13. Иерсинии. Биологическая характеристика. Вызываемые

заболевания. Лабораторная диагностика.

Род Yersinia

Род включает 11 видов. Y.pestis вызывает чуму, Y.pseudotuberculesis — псевдотуберкулез, Y.enterocolitica — (кишечный) иерсиниоз, ряд видов не патогенны или условнопатогенны для человека.

Морфология.

Чаще имеют овоидную (кокко-бациллярную) форму, мелкого размера, окрашиваются биполярно, склонны к полиморфизму. Большинство видов подвижны при температуре ниже +30 градусов Цельсия (имеют перитрихиальные жгутики), грамотрицательны, имеют капсульное вещество (при 37 градусах образуют белковую капсулу). Y.pestis неподвижны, имеют капсулу.

Культуральные и биохимические свойства.

Факультативные анаэробы. Хемоорганотрофы. Температурный оптимум от +25 до + 28 градусов Цельсия, pH — близкая к нейтральной. Хорошо культивируются на простых питательных средах. Ферментируют большинство углеводов без образования газа (ферментируют глюкозу до кислоты и газа, лактозу не расщепляют, сахароза (+/-), рамнозу не утилизирут). Иерсинии способны менять свой метаболизм в зависимости от температуры и размножаться при низких температурах (психрофильные свойства). Крупные, выпуклые, блестящие, с ровными краями, бесцветные. Вирулентные штаммы образуют шероховатые (R) колонии, переходные (RS) и сероватые слизистые гладкие (S) формы.

Культуры Y.pseudotuberculosis и Y.enterocolitica не имеют стадии ―битого стекла‖, вначале мелкие блестящие, выпуклые, затем может отмечаться сливной рост с образованием выпуклых бугристых колоний, схожих с колониями Y.pestis. Растут на универсальных питательных средах (среда Эндо, агар Мак Конки, среда Серова и др.) в сочетании с методами накопления в холодовых условиях.

Возбудители псевдотуберкулеза и иерсиниоза имеют адгезины и инвазины, низкомолекулярные протеины (ингибируют бактерицидные факторы), энтеротоксин. Часть факторов контролируется плазмидами вирулентности.

Ферменты защиты и агрессии: фибринолизин, плазмокоагулаза, нейраминидаза, муциназа. Токсины: термостабильный энтеротоксин, цитотоксин.

Псевдотуберкулез и кишечный иерсиниоз в природе передаются грызунами. Способны длительно сохраняться и даже накапливаться при низких температурах, например, в овощехранилищах. Способны вызывать заболевания у сельскохозяйственных животных. Человеку передаются преимущественно с пищевыми продуктами от животных, а также растительного происхождения.

Диагностика.

14. Методы и задачи внутривидового типирования сальмонелл, шигелл,

эшерихий, холерных вибрионов, иерсиний.

См серодиагностику каждого возбудителя. Все методы складываются в дифференцировку Культуральных свойств, Биохимических свойств, Антигенной структуры, которые позволяют выделить определенный вид м\о, что способствует правильному выбору диагноза, хода лечения и профилктики. Для более подробно ответа см. все эти сво-ва в ответе на частные вопросы шигелл, сальмонелл, эшерихий, холеры, иерсений. Диагностика холерного вибриона по антигенной структуре по биологическим группам Хайберга

Блок 2.

1.

Дифтерия. Биологическая характеристика возбудителя. Лабораторная диагностика

Cotynebacterium diphtheriae

Морфология: длина 1—6 мкм, толщина 0,3— 0,8 мкм. Отличительной особенностью возбудителя дифтерии является многообразие форм — наряду с длинными изогнутыми, изящными «типичными» палочками микробов встречаются короткие толстые с колбовидными вздутиями на концах, иногда коккообразные клетки, что придает микробу сходство с булавой. В колбовидных вздутиях часто находят волютиновые зерна (тельца Бабеша-Эрнета). Чаще всего соединены по 2 бактерии в форме «V».

Грам: «+» Микрокапсула: «+» Пили: «+» Споры - «-»

Антигены. В микрокапсуле содержат К-антиген, позволяющий дифференцировать их на серовары. Все вырабатывают одинаковый токсин. Серологическая гетерогенность наблюдается в пределах одного типа.

Факторы вирулентности: 1) пили, 2) микрокапсула, 3) дифтерийный экзотоксины Дифтерийный экзотоксин состоит из 2 субъединиц: токсического полипептида и транспортного полипептида. Образование первого контролируется бактерией, второгогенами фага, лизировавшего бактериальную клетку. Следовательно только лизогенные дифтерийные палочки могут секретировать токсин. Фиксация токсина происходит на: мембране клеток мышцы сердца, паренхимы сердца, почек, надпочечников, нервных ганглиев. При этом блокируется синтез белка на рибосомах и происходит гибель клетки.

Лаборатоная диагностика:

Дифтерийные микробы хорошо растут в аэробных условиях при температуре 37 С (в окружающей среде активны при 15 — 40 С). Могут расти на обычных питательных средах, но лучше и с характерной морфологией развиваются на средах, содержащих кровь или сыворотку любого вида животного. На этих средах дифтерийные бактерии вырастают уже через 3 ч.

1.Забор и посев материала (материал: слизь из зева и носа, пленка с миндалин и носоглотки)

2.Бактериоскопическое и бактериологическое исследования

Бактериологический метод: Посев на среду Клауберга (МПА + гемолизированная кровь +

теллурит калия + глицерин)

Подозрительны колонии засевают на сывороточный агар — для выделения и сохранения чистой ультуры. А также засевают на среду Пизу — для определения реакции на цистиназы (потенциально токсигенные коринебактерии способны разлагать цистеин с образованием сероводорода, который с ионами железа образует комплекс черного цвета). Реакцию агглютинации ставят на стекле с помощью монотиповых дифтерийных сывороток.

3. Реакции ферментации:

Глю - «к-»; Мал - «к-»; Гал - «к-»; H2S- «+»; Моч- «-»

1. Лабораторная диагностика дифтерии производится с целью:

•постановки диагноза острого заболевания;

•установления бациллоносительства;

•определения вирулентности (токсичности) дифтерийных палочек Наиболее распространены:

•свернутая лошадиная сыворотка (среда РУ);

•среда Леффлера (3 части сыворотки + 1 часть мясного бульона с 1% виноградного сахара, 1% пептона);

•теллуритовые среды.

Типы дифтерийных микробов. На основании культуральных свойств различают 3 типа дифтерийных микробов:

•gravis (тяжелый);

•mitis (средний);

•intermedius (промежуточный).

Тип гравис дает зернистый осадок и пленку на бульоне, на плотных средах образует плоские матовые колонии неправильных очертаний, напоминающие маргаритку. Тип митис равномерно мутит бульон и образует выпуклые полупрозрачные колонии. Третий тип обладает некоторыми свойствами первого и второго типов. Часто встречаются также атипичные формы. У дифтерийных бактерий, как и у других микроорганизмов, наблюдаются:

•гладкие (S) формы колоний;

•шероховатые (R) формы;

•промежуточные (RS).

У высокотоксичных штаммов обычно преобладают R-формы.

Сбраживание крахмала и гликогена считают характерной особенностью типа гравис. Многие штаммы дают гемолиз на кровяном агаре и лизируют эритроциты, добавленные к культуре.

Дифтерийные бактерии чувствительны к дезинфицирующим средствам: 10%-ная перекись водорода убивает их в течение 3 мин

2.

Дифтерия. Специфическая профилактика и принципы лечения. см. вопрос 1

Профилактика: Наиболее эффективный способ профилактики дифтерии иммунизация дифтерийным анатоксином. Анатоксин это безвредное производное токсина (токсин обработанный формалином), которое способно индуцировать выработку антител к исходному токсину. Он входит в состав применяемых для иммунизации детей поливакцин как компонент «Д», например в АКДС (адсорбированная коклюшно-дифтерийно- столбнячная вакцина), и весьма надежно предупреждает дифтерию. Однако чтобы постоянно поддерживать иммунитет, необходимо каждые десять лет проводить ревакцинацию дифтерийным анатоксином. Зачастую это не делается, поэтому значительная часть пожилого населения восприимчива к дифтерии.

Лечение: Противодифтерийную сыворотку можно вводить как внутримышечно (чаще), так и внутривенно. Повторные введения сыворотки возможны при продолжающейся

интоксикации. В настоящее время дозы сыворотки пересматривают как в сторону увеличения, так и в сторону уменьшения, в зависимости от формы дифтерии. Также применяются антибиотики: пенициллин, ванкомицин, эритромицин и др.

Проводят дезинтоксикационную терапию кристаллоидными и коллоидными растворами внутривенно (полиионные растворы, глюкозо-калиевая смесь с добавлением инсулина, реополиглюкин, свежезамороженная плазма). В тяжѐлых случаях к вводимым растворам добавляют глюкокортикоиды (преднизолон в дозе 2-5 мг/кг). Одновременно указанные капельные вливания способствуют коррекции гемодинамических нарушений. Применяют десенсибилизирующие препараты, витамины (аскорбиновую кислоту, витамины группы В и др.).

3.

Дифтерия. Бактерионосительство, его эпидемиологическое значение. Методы определения токсигенности возбудителя дифтерии.

см. вопрос 1

Большую опасность для окружающих представляют бактерионосители(естественный резевуар), выделяющие возбудитель из носоглотки. В различных группах частота длительного носительства варьирует от 13 до 29%. Непрерывность эпидемического процесса обеспечивает длительное носительство даже без регистрируемой заболеваемости. Методы определения токсигенности дифтерийных палочек:

Определение токсигенности дифтерийной палочки in vivo. Проводят подкожным или внутрикожным заражением 0,5-1,0 мл бактериальной культуры морских свинок массой 250 г. За 24 ч до заражения одно животное иммунизируют дифтерийным антитоксином. При положительном результате неиммунизированные животные погибают в течение 3-5 сут. Определение токсигенности дифтерийной палочки in vitro. Способность к образованию токсина можно определять заражением куриных эмбрионов или культур клеток с регистрацией последующего цитопатнческого эффекта. Можно использовать твердофазный ИФА с использованием антитоксинов, меченных пероксидазой. Также предложены ПЦР и ДНК-зонды для обнаружения гена tox в бактериальной хромосоме. Однако наибольшее распространение получил тест иммунодиффузии Илека. На среду с пониженным содержанием Fe2+ (для более интенсивного токсинообразования) проводят посев исследуемого изолята и эталонных токсигенного и нетокси-генного штаммов параллельными штрихами. На выросшие колонии накладывают полоску фильтровальной бумаги, пропитанной дифтерийным антитоксином. Образующийся токсин и антитоксин диффундируют в агар и в месте встречи образуют линии преципитации, так называемые «усы» или стрелы. На практике используют модификацию метода. Полоску бумаги, пропитанную антитоксином (500 ME в 1 мл), наносят на чашку, а исследуемые культуры засевают бляшками по обе стороны бумажной полоски. Контролем служит заведомо токсигенная культура, также посеянная «бляшкой». В результате встречной диффузии токсина и антитоксина в месте их контакта выпадает линия преципитации, сливающаяся с линией преципитации токсигенного штамма.

4.

Менингококки. Биологическая характеристика. Формы вызываемой инфекции. Носительство.

Neisseria meninditidis. Менингококк - возбудитель менингококковой инфекции - строгого антропоноза с воздушнокапельной передачей возбудителя.

Источник — больной человек или носитель.

Морфология: Сферической формы или слегка ововидной. В препаратах расположены попарно. Обращенные к друг другу поверхности уплощены «в виде кофейных зерен».

Грам - «-» Микрокапсула - «+» Пили - «+»

Споры - «-»

Антигенный состав. Имеют четыре основные антигенные системы.

1.Капсульные группоспецифические полисахаридные антигены( A,B, C, D, X, Y, Z, W-135, 29E). Штаммы серогруппы А наиболее часто вызывают эпидемические вспышки.

2.Белковые антигены наружной мембраны. По этим антигенам менингококки серогрупп В и С подразделены на классы и серотипы.

3.Родо- и видоспецифические антигены.

4.Липополисахаридные антигены (8 типов). Имеют высокую токсичность, вызывают пирогенное действие.

Факторы патогенности:

1.Факторы адгезии и колонизация — пили и белки наружной мембраны.

2.Факторы инвазивности — гиалуронидаза и другие продуцируемые ферменты (нейраминидаза, протеазы, фибринолизин).

Большое значение имеют капсульные полисахаридные антигены, защищающие микроорганизмы от фагоцитоза.

Токсин: ЛПС клеточной стенки. Играет ведущую роль в развитии генерализованных форм инфекции и может вызывать шок. Высокие концентрации эндотоксина приводят к снижению фракций комплимента С2, С3 и С4. При бактериемии происходит к токсемии из-за распада возбудителей.

Выделяется 3 формы менингококковой инфекции:

-Больные локализованными формами болезни (бактерионосительство и острый назофарингит).

-Больные генерализированными формами болезни (менингококковый сепсис, менингококкемия (менингококцемия) в виде: типичной, молниеносной или хронической формах),а также менингит и менингоэнцефалит.

-Менингококковый сепсис.

Носительство менингококков распространено довольно широко; уровень его подвержен значительным колебаниям. На одного больного генерализованной формой в зависимости от эпидемиологической ситуации может приходиться от 100 до 10000 носителей. Пораженность носительством больше в очагах инфекции, чем вне очагов, причем особенно значительна эта разница в период интенсивного подъема заболеваемости. Уровень носительства зависит от момента обследования в коллективе, что связано с распространением возбудителя после регистрации 1-го случая заболевания в течение 10-12 нед, после чего уровень носительства резко снижается. Длительность носительства менингококков составляет 2-3 нед, в среднем-11 дней; до 70% носителей освобождаются от возбудителя в течение одной недели. Есть сведения о редких случаях более продолжительного носительства (до 6 мес), которое связано, как правило, с хроническим воспалением носоглотки различной этиологии. Наиболее мощными источниками возбудителя инфекции являются больные генерализованными формами, но их роль менее выражена, чем при других капельных инфекциях, за счет ранней госпитализации по клиническим показаниям. Особую роль в качестве источников возбудителя инфекции играют также больные менингококковым назофарингитом.

5.

Менингококковая инфекция. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика.

см. вопрос 4

Лабораторная диагностика основана на бактериоскопии, выделении культуры и ее биохимической идентификации, серологических методах диагностики. Посев материала производят на твердые и полужидкие питательные среды, содержащие кровь, асцитическую жидкость, сыворотку крови.

Каталаза - «+» Оксидаза - «+»