2. Феномен гемадсорбции (рГадс)

Принцип метода: контакт клеток с эритроцитами приводит к адсорбции эритроцитов на поверхности клеток, пораженных вирусом с гемагглютинирующими свойствами. Эффект можно увидеть при малом увеличении микроскопа (х80).

положительная

отрицательная

3. Образование бляшек - феномен Дюльбекко

Принцип метода: монослой клеток после заражения вирусом заливают слоем полужидкого агара, в состав которого входит питательная среда и краситель нейтральный красный. В тех зонах монослоя, где происходит размножение цитопатического вируса, группы разрушенных клеток не закисляют среду, выглядят на розовом фоне прозрачными пятнами.

4. Феномен интерференции

Принцип метода: феномен интерференции используется для обнаружения вирусов, не дающих отчетливого ЦПД в культуре клеток. Исследуемую культуру повторно заражают вирусом, регулярно вызывающим ЦПД. Индикаторным является ВВС - вирус везикулярного стоматита. При наличии в исследуемом материале нецитопатогенного вируса ЦПД у индикаторного ВВС также будет отсутствовать (клетка "занята" исследуемым вирусом).

3) ЛАБОРАТОРНЫЕ ЖИВОТНЫЕ

Используют преимущественно новорожденных белых мышей, хомяков, морских свинок, крысят. Заражение животных проводится по принципу цитотропизма вируса: пневмотропные вирусы вводятся интраназально, нейротропные - интрацеребрально, дерматотропные - на кожу. Индикация вируса основана на проявлении признаков заболевания у животных, их гибели, патоморфологических изменениях в тканях и органах, а также на положительной реакции гемагглютинации с экстрактами из органов.

3. СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД.

1. Для ранней диагностики заболевания определяют наличие IgM в сыворотке с помощью ИФА или непрямой РИФ.

2. В серодиагностике вирусных инфекций используют подход «парных сывороток», что позволяет определить нарастание титра (прирост антител) за определенный период заболевания с помощью набора вирусных диагностикумов. Парные сыворотки - две сыворотки, взятые от одного больного в начале заболевания и через 1-4 недели. Серологические реакции (РПГА, РСК, РТГА, РН, ИФА и др.) ставят одновременно с двумя сыворотками для определения и сравнения их титров.

Диагностически значимым считают нарастание титра в 4 и более раз.

ОСНОВНЫЕ СЕМЕЙСТВА ВИРУСОВ (контрольная)

ДНК- содержащие

Простые (без оболочек) ДНК- содержащие вирусы 1.Аденовирусы Adenoviridae 2-х нитчатая ДНК 2.Папилломавирусы Papillomaviridae 2-х нитчатая ДНК 3.Полиомавирусы Poliomaviridae 2-х нитчатая ДНК 4. Цирциновирусы Circinoviridae 1- нитчатая ДНК 5.Парвовирусы Parvoviridae 1- нитчатая ДНК

Сложные (с оболочками) ДНК- содерж. вирусы * Поксвирусы Poxviridae 2-х нитчатая ДНК * Герпесвирусы Herpesviridae 2-х нитчатая ДНК * Гепаднавирусы Hepadnaviridae 2-х нитчатая кольцевая ДНК с 1 нитчатым участком

РНК- содержащие

Простые (без оболочек) РНК- содержащие вирусы 1.Пикорнавирусы Picornaviridae 1-нитчатая РНК 2.Калицивирусы - Caliciviridae - 1-нитчатая РНК 3.Астровирусы - Astroviridae - 1-нитчатая РНК 4.Реовирусы - Reoviridae - 2-нитчатая РНК фрагментированная

Сложные (с оболочками) РНК- содержащие вирусы *Ортомиксовирусы Orthоmyxoviridae 1-нитч.РНК *Парамиксовирусы Paramyxoviridae 1-нитч. РНК *Тогавирусы Togaviridae 1-нитчатая РНК *Рабдовирусы Rhabdoviridae 1-нитчатая РНК *Филовирусы Filoviridae 1-нитчатая РНК *Флавивирусы Flaviviridae 1-нитчатая РНК *Ретровирусы Retroviridae 1-нитчатая РНК *Аренавирусы Arenaviridae 1-нитчатая РНК *Коронавирусы Coronaviridae 1-нитчатая РНК *Буньявирусы Bunyаviridae 1-нитчатая РНК

ДЕМОНСТРАЦИИ

Среды для культивирования клеток: среда 199, раствор Хенкса, сыворотка, гидролизат лактальбумина, трипсин, раствор Версена, лейкоцитарный интерферон.

ЗАНЯТИЕ № 28

ТЕМА: ОСТРЫЕ РЕСПИРАТОРНЫЕ ВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ (ОРВИ). ВИРУСОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ЗАБОЛЕВАНИЙ.

ПЕРЕЧЕНЬ КОНТРОЛЬНЫХ ВОПРОСОВ

1. Острые респираторные заболевания. Этиология. Таксономия основных возбудителей ОРВИ.

2. Ортомиксовирусы. Классификация и общая характеристика семейства. Вирусы гриппа. Ультраструктура. Биологические особенности. Репродукция. Антигенная структура. Типы и подтипы вируса гриппа. Изменчивость - антигенный дрейф, антигенный шифт, следствия.

3. Методы лабораторной диагностики гриппа: экспресс-диагностика, вирусологический метод, серодиагностика.

4. Иммунитет. Специфическая профилактика и лечение гриппа.

5. Парамиксовирусы. Общая характеристика и классификация семейства. Ультраструктура, биологические особенности парамиксовирусов.

6. Эпидемиология и клиника основных заболеваний, вызываемых парамиксовирусами.

7. Методы лабораторной диагностики парагриппозных инфекций. Иммунитет. Специфическая профилактика и лечение.

8. Коронавирусы: классификация, свойства, роль в патологии человека, вирусологическая диагностика коронавирусной инфекции.

9. Реовирусы: классификация и характеристика семейства. Роль вирусов рода Reovirus в патологии человека, вирусологическая диагностика.

10. Вирус краснухи. Таксономия. Биологические свойства. Патогенез и клиника заболевания. Тератогенное действие вируса. Врожденная краснуха. Вирусологическая диагностика краснухи. Профилактика.

11. Герпесвирусы: состав и характеристика семейства. Резистентность к физическим и химическим факторам. Вирусы простого герпеса 1 и 2 серотипов. Свойства. Патогенез герпетических инфекций. Варицеллавирус: сходства и отличие от ВПГ, взаимодействие с организмом человека. Ветряная оспа, опоясывающий герпес. Вирусологическая диагностика инфекций.

12. Цитомегаловирус (бета-герпесвирусы). Свойства. Формы инфекции. Вирус Эпштейна-Барр (гамма-герпесвирусы). Лабораторная диагностика инфекционного мононуклеоза. Герпесвирус человека 6, роль в патологии человека ГВЧ-6, -7, -8 (синдром хронической усталости, саркома Капоши).

ЛАБОРАТОРНАЯ И САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА

Этиология острых респираторных вирусных инфекций (заполнить таблицу)

Семейство	Род	Вызываемые заболевания
Orthomyxoviridae
Paramyxoviridae
Reoviridae
Picornaviridae
Coronaviridae
Togaviridae

Характеристика ортомиксо- и парамиксовирусов (заполнить таблицу)

Хактеристика семейства	ОРТОМИКCОВИРУСЫ	ПАРАМИКСОВИРУСЫ
Таксономия и классификация
Форма и размер
Наличие суперкапсида
Тип НК (особенности)
Тип симметрии нуклеокапсида
Антигены
Методы культивирования
Источник инфекции
Пути передачи

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ГРИППА

Экспресс-диагностика

Исследуемый материал _________________________________________________________________________

Метод –______________________________________________________________________________________

Диагностический препарат ______________________________________________________________________

2. Вирусологический метод (целесообразно проводить в первые 3 дня заболевания)

Исследуемый материал: ________________________________________________________________________

1 этап. Подготовка исследуемого материала _______________________________________________________

2 этап. Заражение _____________________________________________________________________________

Эмбрионы инкубируются 48-72 часа при t 33-35°C.

3 этап. Вскрытие эмбрионов, отсасывание амниотической или аллантоисной жидкости в пробирку. Выявление вируса в РГА.

РГА с целью выявления вируса гриппа

Исследуемый материал: ______________________ Диагностический препарат:___________________________

Принцип метода: ______________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________________________

РГА	положительная	отрицательная	Контроль эритроцитов
Результат

Вывод: положительная РГА указывает на _________________________________________________________

4 этап. Титрование вируса в РГА (для определения рабочей дозы перед постановкой РТГА с целью идентификации вируса).

Разведение вируса	1/2	1/4	1/8	1/16	1/16	1/64	Контроль эритроцитов
1 кап. взвеси КЭ
Результат

Титр вируса - __________________________ Рабочая доза для РТГА __________________________________