1. Для экспресс-диагностики используют:

а) определение вирусного антигена в исследуемом материале с помощью диагностических противовирусных сывороток в реакциях: РИФ, ИФА, РИА, встречного иммуноэлектрофореза (ВИЭФ), реакции пассивной гемагглютинации (РПГА), реакции торможения гемагглютинации (РТГА) и др.;

б)обнаружение включений в пораженных клетках макроорганизма с помощью световой или люминесцентной микроскопии;

Тельца Бабеша-Негри в срезе гиппокампа. Окраска по Муромцеву. Увеличение _________ Streptococcus pyogenes (чистая культура) Окраска по Граму Увеличение _____________

в) обнаружение вирионов в патологическом материале с помощью электронной микроскопии или ИЭМ.

г) обнаружение геномов вируса молекулярно-генетическими методами: ПЦР; молекулярная гибридизация нуклеиновых кислот с помощью меченых зондов.

2. Вирусологический метод

Основные этапы:

1. Забор исследуемого материала.

2.Выбор по принципу цитотропизма и получение чувствительной тест-системы, определение ее жизнеспособности.

3. Заражение выбранной системы.

4.Индикация вируса на основании обнаружения его нуклеиновой кис­лоты, антигенов, гемагглютинина, ЦПД, включений.

5. Идентификация и титрование вируса проводится на основании:

а) определения антигенов вируса с помощью иммунологических реакций (РИФ, ИФА, РПГА, РСК, РН, ВИЭФ и др.); б) патогистологического исследования органов и тканей; в) ЦПД; г) клинических симптомов, биологических проб (кератоконьюнктивальная и др.).

Вирусологический метод (схема)

Исследуемый материал (фекалии, носоглоточные смывы, секционный материал и др.)

Обработка антибиотиками для подавления бактериальной и грибковой

микрофлоры, центрифугирование, фильтрация

Заражение серии

Куриных эмбрионов

Культур клеток

Животных

Индикация вирусов по следующим феноменам

Отставание в развитии,

гибель, изменение

оболочек эмбриона, РГА

ЦПД, образование бляшек, РИФ, РГадс, интерференция

Заболевание, гибель,

гистологические изменения

в тканях, включения

Пассажи

Титрование выделенного вируса; выбор рабочей дозы.

Титр вируса - максимальное разведение вируссодержащего материала, в котором еще наблюдается ожидаемый эффект (ЦПД, РГА, гибель животного).

Идентификация выделенного вируса в реакциях нейтрализации, РТГадс, РСК, подавление бляшкообразования и др. с диагностическими сыворотками. Вид (тип) вируса определяется по нейтрализации специфического эффекта вируса соответствующей иммунной сыворотокой.

Примечание: титрование и идентификация вируса проводится с использованием одного и того же феномена.

Культивирование вирусов

Вирусы - облигатные внутриклеточные паразиты, не способные размножаться ни в одной из бесклеточных сред. Для их культивирования используются: 1) куриные эмбрионы; 2) культуры клеток (тканей, органов); 3) лабораторные животные.