Вопрос № 45

Ферменты обнаруживают и оценивают по двум критериям: по появлению продуктов реакции или по исчезновению субстратов. Ферменты проявляют специфичность в отношении субстратов и типа реакции.

Активность ферментов зависит от температуры, рН среды, концентрации субстрата [S] и концентрации фермента [Е].

Количественная оценка активности ферментов в биологических жидкостях (кровь, моча, слюна) широко используются в клинической практике для диагностики и дифференциальной диагностики заболеваний. Как правило, активность ферментов увеличивается при заболеваниях печени, инфаркте миокарда и других видах патологии. При диагностике болезней, связанных с врожденной недостаточностью метаболизма, определение активности ферментов становится единственным критерием болезни.

Количественная оценка активности ферментов основывается на измерении количества образовавшегося продукта реакции или убыли субстрата в единицу времени, отнесенного к 1 мг белка или 1 мл биологической жидкости.

Единицы активности

Международная единица активности (МЕ или Е или U (unit) - количество фермента, которое катализирует превращение 1 мкмоля вещества за 1 мин (мкмоль/мин):

1 мкмоль превращенного субстрата

1 МЕ = —————————————

1 мин

В системе единиц СИ – катал (кат) -количество Е, которое превращает 1 моль S за 1 секунду (1 моль/с).

Количество превращенного субстрата

п катал = ———————————————

Время (с)

Удельная активность Е -– число единиц ферментативной активности на 1 мг белка (мкмоль/мин/мг)

Количество превращенного субстрата (мкмоль)

Уд. ак = ————————————————

Время (мин) ´ масса белка (мг)

Вопрос № 46

Влияние pH среды. В 3 пробирки 3 раствора с разными pH (кисл, нейтр, щел). Затем слюну и крахмал. Через некое время йодом обнаруживают крахмал и исследуют зависимость активности амилазы от pH. Где нет окраски – расщепление крахмала. Для амилазы оптимум – рН=7,0.

Термолабильность. 2 пробирки с крахмалом. В одну – обычную слюну, в другую – прокипяченную 3 минуты (инактивированную). Проверяем окрашиванием йодом.

Специфичность.  В две пробирки (№1 и №2) вносят раствора крахмала, в две другие (№3 и №4) - раствора сахарозы. Затем в пробирки №1 И №3 добавляют раствора слюны, а в пробирки №2 и №4-такое же количество раствора сахаразы. Перемешивают и оставляют в термостате или на водяной бане 15 минут при температуре 37°С. После этого с содержимым всех четырех пробирок проделывают реакции с йодом и Троммера.  № 1 - нет окрашивания (разложение крахмала). № 2 – синее окрашивание. № 3 – нет окрашивания (сахароза не разложилась). № 4 – гидрат закисис меди желтого цвета.

37