Вопрос № 44

До недавнего времени ферменты служили лишь объектом исследования в клинической биохимии, и лишь сравнительно недавно они стали использоваться, как аналитические реагенты, то есть как реактивы для количественного определения других веществ.  Преимущества ферментативных методов исследования: высокая точность, специфичность (в силу специфичности используемых ферментов), чувствительность. К этим «трем китам», на которых стоят ферментативные методы, следует добавить простоту проведения анализа, значительное сокращение времени исследования и, часто, отсутствие необходимости построения калибровочных графиков. 

На использовании в качестве индикаторного фермента глюкозо-6- фосфатдегидрогеназы (Г6ФДГ) основан самый точный метод из всех существующих методов определения глюкозы. Здесь реакция идет по схеме:

Глюкоза + АТФ =(гексокиназа)= глюкозо-6-фосфат + АДФ

Глюкозо-6-фосфат + НАДФ = (Г6ФДРГ)=НАДФН

Эта реакция сопровождается накоплением НАДФН и, следовательно, возрастанием оптической плотности при 340 нм. Регистрируется спектрофотометрическими методами. Расчет содержания глюкозы в анализируемом образце может быть произведен.

Другой подход к определению глюкозы основан на использовании сопряженной системы глюкозооксидаза + пероксидаза и более широко известен. При участии глюкозооксидазы глюкоза окисляется кислородом воздуха с образованием перекиси водорода, количество которой определяется по ее способности в присутствии пероксидазы окислять диамины с образованием окрашенных продуктов.

Известны лабораторные методы определения содержания мочевины в моче, основанные на её гидролизе в присутствии соевой уреазы с последующим измерением количества аммиака, выделившегося в результате реакции.

Определение содержания этанола связано с использованием алькогольдегидрогеназы, катализирующей окисление первичных до альдегидоа. Нашло применение в судебно-медицинской практике.

Глюкозооксидаза	Определение концентрации глюкозы в крови
Холестеролоксидаза	Определение холестерина в крови
Липаза	Определение триацилглицеринов в крови
Уреаза	Определение мочевины в крови

ИММОБИЛИЗОВАННЫЕ ФЕРМЕНТЫ (от лат. immobiiis - неподвижный) - препараты ферментов, молекулы к-рых связаны с матрицей, или носителем(как правило, полимером), сохраняя при этом полностью или частично свои каталитич. св-ва. Иммобилизованные ферменты обычно не раств. вводе; между двумя фазами возможен обмен молекулами субстрата, продуктов каталитич. реакции, ингибиторов и активаторов. Преимуществом метода захвата является то, что фермент сохраняется в естественном состоянии.

Иммобилизованные ферменты применяют в произ-ве L-аминокислот, 6-аминопенициллановой к-ты, из к-рой получают полусинтетич. пенициллины, в синтезе преднизолона, для удаления лактозы из продуктов питания, используемых больными с лактазной недостаточностью, в изготовлении ферментных электродов для экспресс-определения мочевины, глюкозы и др. в-в, для создания аппаратов "искусств. почка" и "искусств. печень", для удаления эндотоксинов, образующихся в процессе заживления ран и ожогов, при лечении нек-рых онкологии, заболеваний и др. Большое значение приобрели в клинич. и лаб. практике иммуноферментные методы анализа, в к-рых также используются иммобилизованные ферменты.