- •Содержание:
- •История изучения нуклеиновых кислот. Методы молекулярной биологии.
- •Молекулярная биология
- •Строение нуклеиновых кислот. Нуклеопротеиды.
- •Гидролиз нуклеопротеидов
- •Выделение дезоксирибонуклеопротеидов (днп) из тканей
- •Синтез нуклеотидов. Распределение нуклеотидов в организме.
- •Распределение нуклеотидов в организме
- •Структура и функции днк и рнк.
- •Количественное определение нуклеиновых кислот.
- •Количественное определение нуклеиновых кислот в крови
- •Спектрофотометрическое определение суммарного содержания нуклеиновых кислот в тканях органов
- •Количественное определение днк колориметрическим методом
- •Количественное определение рнк колориметрическим методом
- •Структура генома. Экспрессия генов.
- •Литература:
Гидролиз нуклеопротеидов
ПРИНЦИП РАБОТЫ:
Для изучения состава нуклеопротеидов проводят кислотный гидролиз дрожжей в присутствии серной кислоты. При непродолжительном, т.е. частичном, гидролизе нуклеопротеиды распадаются на белок и нуклеиновые кислоты. Про продолжительном гидролизе наступает полный распад нуклеопротеидов.
При гидролизе мононуклеотидов выделяются пуриновые или пиримидиновые основания, углевод (рибоза или дезоксирибоза) и фосфорная кислота.
Составные части нуклеопротеидов в гидролизате можно открыть с помощью цветных (качественных) реакций.
ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ: дрожжи (пекарские).
РЕАКТИВЫ и ОБОРУДОВАНИЕ:
1) серная кислота, 10% раствор; 2) едкий натр, 10% раствор; 3) медь сернокислая, 1% раствор; 4) аммиак концентрированный; 5) азотнокислое серебро, 1-2% раствор (аммиачный раствор); 6) молибденовый реактив – раствор молибденовокислого аммония в азотной кислоте; 7) концентрированная серная кислота; 8) тимол, 1% алкогольный раствор; 9) круглодонная колба с воздушным холодильником; 10) воронка с фильтром; 11) мерный цилиндр на 50 или 100 мл.
ХОД РАБОТЫ:
Кислотный гидролиз нуклеопротеидов.
Помещают 1 гпекарских дрожжей в круглодонную колбу на100 мл, добавляют20 мл 10% раствора серной кислоты и20 млдистиллированной воды. Колбу закрывают пробкой с длинной стеклянной трубкой и кипятят под тягой в течение1 часана асбестовой сетке при слабом нагревании. Через час после начала кипения нагревание жидкости прекращают, дают ей остыть, переносят в цилиндр, доводят водой до первоначального объема и фильтруют.
С фильтратом проделывают качественные реакции на составные части нуклеопротеидов. При гидролизе нуклеиновых кислот обнаруживаются фосфорная кислота, рибоза или дезоксирибоза и азотистые основания – пуриновые и пиримидиновые.
Качественные реакции на составные части нуклеопротеидов.
а) Биуретовая проба на полипептиды.
К 5 каплямгидролизата прибавляют10 капель 10%раствора едкого натра и1 каплю1%раствора медного купороса. Жидкость окрашивается в розовый цвет.
б) Серебряная проба на пуриновые основания.
Нейтрализуют 10 капельгидролизата1 каплейконцентрированного аммиака и добавляют5 капель 1%раствора азотнокислого серебра. При стоянии через3-5 минвыпадает небольшой бурый осадок серебряных производных пуриновых оснований.
в) Качественная реакция Молиша на пентозную группировку.
При взаимодействии концентрированной серной кислоты с гексозами или пентозами происходит дегидратация их: из пентоз образуется фурфурол, а из гексоз – оксиметилфурфурол. Они дают с тимолом (метилизопропилфенол) или α-нафтолом в присутствии концентрированной серной кислоты продукты конденсации красного цвета.
К 10 каплямпрофильтрованного гидролизата дрожжей добавляют2-3 капли 1%алкогольного раствора тимола, перемешивают и по стенке пробирки осторожно приливают20 капельконцентрированной серной кислоты.
При встряхивании на дне пробирки образуется красное окрашивание вследствие образования продукта конденсации фурфурола с тимолом.
г) Молибденовая проба на фосфорную кислоту.
К 3-5 каплямгидролизата приливают20 капельмолибденового реактива (раствор молибденовокислого аммония в азотной кислоте) и кипятят несколько минут. Жидкость окрашивается в лимонно-желтый цвет. При охлаждении образуется желтый кристаллический осадок комплексного соединения фосфорно-молибденовокислого аммония.
Молибденовая проба на фосфорную кислоту: H3PO4+ 12(NH4)2MoO4+ 21HNO3→
→ (NH4)3PO4∙ 12MoO3+ 21NH4NO3+ 12H2O
РЕЗУЛЬТАТЫ и ВЫВОДЫ:
Работа №2