- •Учебно-методический комплекс
- •Раздел 3. Методические рекомендации для студентов, в том числе для самостоятельной аудиторной и внеаудиторной работы Ижевск 2008
- •Раздел 1: морфология микроорганизмов. Лабораторное занятие №1.
- •Работа № 1: Правила работы в бактериологической лаборатории.
- •Работа №2: Устройство оптического микроскопа. Иммерсионная система.
- •Работа №3: Правила приготовления микропрепаратов. Приготовление микропрепаратов из чистой культуры.
- •Работа № 4: Приготовление мазков из культур с плотной питательной среды и окраска их простым методом.
- •Вопросы для самоконтроля:
- •Лабораторное занятие №2.
- •Работа №1: Отличия прокариот и эукариот:
- •Работа №2: Сложные методы окраски бактерий. Метод Грама.
- •Работа № 4: Методы определения подвижности микробов. Темнопольная микроскопия.
- •Вопросы для самоконтроля:
- •Лабораторное занятие №3.
- •По Граму.
- •Вопросы для самоконтроля:
- •Лабораторное занятие № 4.
- •Раздел 2. Физиология микроорганизмов. Лабораторное занятие № 5
- •Работа № 1: Способы получения чистых культур бактерий.
- •Работа № 2: Основные требования к питательным средам
- •Работа № 3: Жидкие и плотные питательные среды.
- •Работа № 4: Методы механического разобщения бактерий. Техника посева бактерий бак.Петлей.
- •Работа № 5: Схема выделения чистой культуры аэробных бактерий (зарисовать)
- •Работа № 6: Характер роста бактерий на жидких питательных средах
- •Работа №7: Описание полонии (паспорт колонии).
- •Работа №1: Среды для определения сахаролитических свойств бактерий.
- •Работа № 2: «Пестрый ряд» кишечной палочки
- •Работа № 3: Факторы патогенности стафилококка
- •Работа 5: Среды для выращивания анаэробов
- •Работа № 7: Схема выделения чистой культуры анаэробов.
- •Работа № 8: Изучение чистой культуры, выделенной самостоятельно при проведении уирс
- •Вопросы для самоконтроля:
- •Лабораторное занятие № 7
- •Работа № 1: Техника овоскопии, заражения и вскрытия куриного эмбриона.
- •Работа №2: Культуры клеток для культивирования вирусов.
- •Работа №3: Питательные среды для культур клеток:
- •Работа №4: Методы индикации вирусов
- •Работа №5: Строение бактериофага.
- •Работа № 6: Получение бактериофагов.
- •Работа № 7: Методы титрования фагов.
- •Работа №8: Методы фагодиагностики:
- •Работа № 9: Диагностические и лечебно-профилактические фаги.
- •Вопросы для самоконтроля:
- •Лабораторное занятие №8.
- •Лабораторное занятие №9
- •Фагоцитоз -
- •Работа № 4: определение лизоцима в биологических жидкостях методом титрования
- •Основные понятии по теме
- •Работа № 1: ориентировочная реакция агглютинации (ра) для определения неизвестной культуры
- •Работа №2: развернутая реакция агглютинации (ра) при определении неизвестной культуры
- •Работа № 4: Реакция непрямой гемагглютинации (рнга) при серодиагностике инфекций
- •Работа № 5: Реакция иммунофлюоресценции (риф)
- •Работа № 7: диагностические препараты, используемые для постановки изучаемых реакций
- •Вопросы для самоконтроля
- •Лабораторное занятие № 11
- •Работа №2: определение токсигенности дифтерийной палочки
- •Работа №6: реакция нейтрализации in vivo на белых мышах при диагностике ботулизма
- •Работа №7: иммунопрепараты по теме занятия
- •Вопросы для самоконтроля:
- •Лабораторное занятие №12
- •Работа №1: кожно-аллергические пробы (кап) с инфекционными аллергенами
- •Иммуномодуляторы:
- •Работа №2: иммуноферментный анализ (ифа) для определения антител в парных сыворотках
- •Работа №3: реакции розеткообразования (е-рок, еас-рок) и бластной трансформации лимфоцитов (рбтл)
- •Работа №4: оценка иммунного статуса человека и иммунограмма здорового человека
- •Работа №5: реакция торможения гемагглютинации (ртга) для идентификации вируса гриппа
- •Работа №6: ртга в парных сыворотках на определение антител при серодиагностике гриппа
- •Работа №7: реакция нейтрализации по типу «цветной пробы» при идентификации вируса полиомиелита
- •Работа №8: реакция нейтрализации по типу «цветной пробы» на определение антител при серодиагностике полиомиелита
- •Работа №9: иммунопрепараты по изучаемой теме
- •Вопросы для самоконтроля
- •Лабораторное занятие № 16
- •Работа № 1: классификация вакцин
- •Работа №2: Календарь профилактических прививок приказ от 27.06.2001 № 229
- •Работа №3: приготовление убитой вакцины
- •Других иммунопрепаратов
- •Вопросы для самоконтроля
- •Лабораторное занятие № 17
- •Цель: оценить степень усвоения теоретического материала и практических навыков по теме: «Инфекция и иммунитет»
- •Практическое занятие № 2
- •Возбудители брюшного тифа и паратифов а и в
- •Лабораторная диагностика брюшного тифа
- •Возбудители сальмонеллезных токсикоинфекций
- •Возбудители внутрибольничных сальмонелезных инфекций
- •Возбудитель кишечного иерсиниоза
- •Возбудители кишечного кампилобактериоза
- •Возбудитель холеры
- •Методы экспресс- диагностики:
- •Возбудитель ботулизма
- •Лабораторная диагностика ботулизма
- •Возбудитель протейной токсикоинфекции
- •Стафилококки
- •Лабораторная диагностика
- •Проблема госпитальной стафилококковой инфекции
- •Возбудители:__________________________________________________________________________________________________________
- •Стрептококки
- •Гломерулонефрит
- •Менингококковая инфекция
- •Менингококковый сепсис
- •Менингит
- •Практическое занятие № 6
- •Микоплазмы пневмонии
- •Хламидии пневмонии
- •Лабораторная диагностика
- •Гемофильная палочка
- •Бактериологический метод диагностики
- •Возбудитель столбняка
- •Возбудители анаэробной газовой инфекции
- •Диагностика раневой анаэробной инфекции
- •Лабораторная диагностика
- •Практическое занятие № 8
- •Возбудитель дифтерии
- •Лабораторная диагностика
- •Определение антитоксического иммунитета:
- •Лабораторная диагностика
- •Рнга практическое занятие № 9
- •Возбудители туберкулеза
- •Лабораторная диагностика
- •Возбудители актиномикоза
- •Лабораторная диагностика
- •Лабораторная диагностика
- •Практическое занятие № 10
- •Возбудители бруцеллеза
- •Лабораторная диагностика
- •Ра: Реакция Хеддельсона
- •Ифа, рнга, рск, кап
- •Прямая риф, рнга, рск, кап
- •Алгоритм ответа
- •Культивирование: лабораторные животные
- •Работа 1: Культура фибробластов в норме и при цпд вируса.
- •Работа 4. Идентификация вируса гриппа в ртга
- •Работа 6: рск при диагностике кори.
- •Сравнительная характеристика возбудителей вирусных респираторных инфекций (таблица)
- •Лабораторное занятие №13
- •Работа 1: Реакция нейтрализации «цветня проба» при идентификации вируса полиомиелита в исследуемом материале.
- •Работа реакция нейтрализации по типу «цветной пробы» на определение антител при серодиагностике полиомиелита
- •Работа 1: Оценить готовый результат ифа в парных сыворотках при серодиагностике клещевого энцефалита (определение IgM)
- •Работа3.: Метод флюоресцирующих антител-мфа (н риф) при серодиагностике глпс.
- •Практическое занятие № 15.
- •Работа 1: тельца Пашена и тельца Гварниери при натуральной оспе
- •Работа 2: структура вируса вич
- •Антигены вич
- •Работа 3: иммуноблотинг при диагностике вич-инфекции
- •Практическое занятие № 16.
- •Практическое занятие № 17
- •Гонококк
- •Бледная трепонема
- •Возбудители урогенитального хламидиоза
- •Возбудители риккетсиозов
- •Лабораторная диагностика
- •Возбудители возвратного тифа
- •Лабораторная диагностика
- •Список основной литературы
Лабораторное занятие № 7
Тема: КУЛЬТИВИРОВАНИЕ И ИНДИКАЦИЯ ВИРУСОВ.
БАКТЕРИОФАГИ.
Цель: усвоить методы культивирования и индикации вирусов,
методы получения и титрования бактериофагов и их
практическое использование.
ВОПРОСЫ ДЛЯ ПОДГОТОВКИ:
Значение открытия Д.И. Ивановского. Этапы развития вирусологии, роль отечественных ученых в развитии вирусологии.
Структура и химический состав вирусов и бактериофагов.
Типы взаимодействия вируса с клеткой, стадии репродукции, исходы.
Методы культивирования вирусов. Индикация вирусов.
Бактериофаги. Взаимодействие фага с клеткой. Умеренные и вирулентные фаги. Лизогения.
Получение и титрование фагов. Применение фагов в медицине, микробиологии и биотехнологии.
Внутривидовая идентификация бактерий (биовары, серовары, фаговары и т.д.). Эпидемическое маркирование.
САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:
Провести овоскопию куриного эмбриона, заразить его
вируссодержащим материалом. Провести вскрытие ранее зараженного эмбриона, визуально оценить состояние оболочек.
Описать типы культур клеток, их отличия.
Изучить питательные среды для культур клеток: Хенкса, Игла, 199.
Изучить и зарисовать методы индикации вирусов:
а) цитопатическое действие - промикроскопировать и зарисовать культуры фибробластов в норме и с ЦПД;
б) реакция гемагглютинации – поставить РГА для индикации вируса в исследуемом материале, оценить и зарисовать;
в) реакция гемадсорбции – зарисовать с таблицы;
г) включения в пораженных клетках – зарисовать с таблиц тельца Бабеша-Негри при бешенстве, тельца Гварниери при натуральной оспе, внутриядерные включения при аденовирусной инфекции;
д) реакция бляшкообразования – с таблицы;
е) «цветная проба» - зарисовать и оценить готовую реакцию.
Разобрать особенности строения и зарисовать структуру
бактериофага.
Описать способ получения бактериофага.
Учесть и зарисовать результаты титрования фага по Аппельману
и по Грациа.
Учесть и зарисовать готовые результаты фагодиагностики: реакции
фаголизиса и фаготипирования.
Описать препараты фагов, используемые для диагностики, лечения
и профилактики заболеваний.
10. Уборка рабочего места.
11. Защита протокола.
Работа № 1: Техника овоскопии, заражения и вскрытия куриного эмбриона.
Овоскопия: поместить эмбрион на овоскоп и карандашом отметить границу воздушной полости.
Строение 12-дневного куриного эмбриона
воздушная хорион - аллантоисная
полость оболочка (ХАО)
эмбрион аллантоисная полость
амниотическая желточный мешок
полость
белок
Заражение: скорлупу над воздушной полостью протирают спиртом, обжигают на огне, смазывают 2% настойкой йода, снова протирают спиртом и обжигают. Для заражения на ХАО изогнутыми ножницами срезают скорлупу над воздушной полостью, пинцетом снимают часть подскорлупной оболочки, исследуемый материал в объеме ________ наносят на ХАО (конец иглы не должен быть ниже границы воздушной полости). Отверстие в скорлупе закрывают покровным стеклом и заливают воском или парафином.
Для заражения в аллантоисную полость через прокол в скорлупе вводят иглу шприца так, чтобы конец иглы был ниже уровня воздушной полости на ______. Отверстие в скорлупе заливают воском.
Вскрытие куриных эмбрионов проводят с соблюдением правил асептики. Скорлупу над воздушной полостью обрабатывают так же, как при заражении, и срезают ножницами чуть выше границы прикрепления хорион-аллантоисной оболочки. Визуально оценивают состояние ХАО (помутнение, наличие бляшин и т.д.). Аллантоисную жидкость насасывают пипеткой после прокола ХАО в месте, лишенном крупных кровеносных сосудов. Затем ХАО разрезают ножницами и через отверстие выливают все содержимое в чашку Петри. Амниотический мешок так же разрезают, освобождают от эмбриона, просматривают на наличие поражений.