Методы прямого обнаружения возбудителя и его антигенов

В окрашенных или нативных (неокрашенных) препаратах, приготовленных из исследуемого материала, пользуясь обыч­ным микроскопом, можно увидеть возбудителей бактериальных инфекций (бактериоскопический метод) и протозойных инвазий (паразитологическое исследование). Например, при микроскопии препаратов крови обнаруживают возбудителей возвратного тифа и лептоспироза; при бактериоскопии осадка спинномозговой жидкости — менингококки и листерии; воз­будителей чумы находят при микроскопии мазков из пунктата чумного бубона, а бацилл сибирской язвы — в мазках-отпе­чатках, взятых с сибиреязвенного карбункула; в мазках с мин­далин удается обнаружить спирохеты и веретенообразные па­лочки, вызывающие ангину Симановского-Плаута-Венсана; скопления холерных вибрионов в виде стайки рыб можно уви­деть при бактериоскопии мазков каловых и рвотных масс.

Микроскопия широко используется для диагностики пара­зитарных болезней. В толстой капле и мазках крови могут быть обнаружены плазмодии малярии, в мазках крови и пре­паратах костного мозга — лейшмании, в крови, спинномозго­вой жидкости, пунктатах лимфатических узлов — токсоплазмы. Микроскопия дуоденального содержимого и испражнений необходима для диагностики лямблиоза. Возбудителей пневмоцистной пневмонии (СПИД-индикаторного заболевания) находят в мокроте. Основанием для диагностики глистных ин­вазий служит обнаружение яиц гельминтов при микроскопии кала (аскаридоз, дифиллоботриоз, гименолепидоз) или желчи (описторхоз, фасциолез).

Преимущество микроскопического исследования заключа­ется в его быстроте. Результаты анализа можно получить уже через несколько часов после забора материала. При некото­рых заболеваниях (малярия, возвратный тиф, менингококковая инфекция и др.) возбудителей удается обнаружить с пер­вого дня болезни и, таким образом уточнив диагноз, назначить своевременную этиотропную терапию.

Бактериологический метод. Метод основан на культивировании (выращивании) микроорганизмов. Наиболее широкое распро­странение в практике получил предусматривающий выделение возбудителей с последующей их идентификацией при посеве исследуемого материала на спе­циальные питательные среды.

Выбор материала и сроки его взятия определяет врач в со­ответствии с клиническими особенностями и периодом пред­полагаемого заболевания, местом избирательной локализации возбудителя и путями его выделения в окружающую среду. Так, возбудителей дифтерии выделяют при посеве слизи из зе­ва и носа, возбудителей кишечных инфекций (холеры, дизен­терии, эшерихиозов) — при посеве кала, рост возбудителей брюшного тифа выявляют при посевах крови, мочи, кала, жел­чи, а рост менингококков — в посевах слизи из носоглотки, крови, ликвора. Посев пунктатов лимфатических узлов осуще­ствляют для диагностики чумы, сапа и др. При выборе среды для выращивания учитывают биологи­ческие свойства микроорганизма. Нередко посев дублируют одновременно на нескольких питательных средах. Бактериологическое исследование позволяет получить пред­варительные положительные результаты уже с первых часов или дней болезни, однако окончательный ответ при большин­стве инфекций становится известным лишь через 2-4 дня, а при бруцеллезе, псевдотуберкулезе - через 2-4 нед., что обу­словлено различием в темпах роста микроорганизмов.

Вирусологический метод. При использовании вирусологического метода материал для исследования подвергают специальной обработке с целью очищения его от примесей слизи, клеток и бактерий. Культи­вируют вирусы (аденовирусы, вирусы гриппа, клещевого эн­цефалита и др.) в культуре клеток, на куриных эмбрионах с последующей идентификацией с помощью светового микро­скопа.

Биологический метод. Для выделения вирусов можно применять и заражение ла­бораторных животных, т. е. биологический метод. Например, энтеровирусы выявляют при заражении мозга мышей-сосун­ков, вирусы простого герпеса — при интраназальном введении исследуемого материала кроликам. Однако такой способ куль­тивирования слишком трудоемкий, дорогостоящий, требую­щий много времени, поэтому в диагностических лаборатори­ях практически не используется.

Биологический метод необходим для диагностики бактериальных инфекций (лептоспироз, бруцеллез, туляре­мия, чума). При этом заражают морских свинок, котят, крыс, мышей, а исследуемый материал (кровь больного, пунктат из не вскрывшегося бубона) животным вводят подкожно, внутрикожно, внутрибрюшинно или втирают в скарифицированную кожу. Применяется биологический метод и для обнаружения токсинов возбудителей, например, ботулотоксина.

Существенно расширились возможности специфической диагностики с внедрением в практику методов прикладной им­мунологии, основанных на взаимодействии антигенов и антител и позволяющих выявить в патологическом материале не только возбудителей, но и их антигены.