3.Цель самоподготовки:
Необходимо знать ответы на следующие вопросы:
1.Значение данных ферментов в жизненных процессах.
2.Реактивы для обнаружения ферментов.
3.Другие методы обнаружения оксидоредуктаз.
4.Исходный уровень знаний: Студенты должны знать:
- ход анализа фермента,
- характерные свойства оксидоредуктаз,
- ход анализа дегидрогеназы,
- правила безопасности при работе с реактивами.
5. План изучения темы:
1. Оценка исходных знаний студентов.
2. Подготовка материалов и оборудования.
3. Выполнение лабораторной работы.
4. Оформление лабораторной работы.
6. Основная литература:
1. Н. П. Елинов. Основы биотехнологии. – С.-Петербург, 1995. – 600 с.
2. Г. А. Строев. Биологическая химия. – М.: Высшая школа, 1986. – 479 с.
7. Вопросы для самоконтроля:
1. Дайте характеристику ферментов?
2.Каков механизм действия ферментов, катализирующих реакции окисления-восстановления?
3.Характеристика данного класса.
4.Какие окислительные ферменты содержатся в капустном соке?
5.Дайте характеристику реакциям, протекающим с участием фермента дегидрогеназы?
8. Контрольные задания:
1. Записать реакцию разложения пероксида водорода с помощью пероксидазы.
2. Записать реакцию окисления гистомина продуктами разложения пероксида водорода.
3. Вспомогательные дегидрогеназные реакции.
4. Объясните, для чего в опытах с дегидрогеназой используют масло.
9. План выполнения лабораторной работы:
1. Подготовка биологического материала.
2. Подготовка оборудования.
3. Выполнение лабораторной работы.
10. Методика определения:
1. Используемые материалы и оборудование:
- капустный сок,
- яблочный сок,
- картофельный сок,
- пробирки,
- водяная баня,
4 химических стакана по 50 мл.
- весы аптечные,
- плитка электрическая,
- пипетка,
- стеклянная палочка,
- термометр.
2. Используемые реактивы:
- пероксид водорода,
- гидрохинон,
-вода дистиллированная.
- 0,5-процентный водный раствор формальдегида,
- 0,02-процентный водный раствор метиленового синего,
- янтарная кислота,
- растительное масло,
-NaCl.
СХЕМА ООД
|
Последовательность действий. |
Способ выполнения действий и контроль. |
|
1.Приготовление исходного материала |
Кусочки капустной кочерыжки, картофель и яблоко, примерно 20 г, необходимо измельчить на терке. Полученные кашицы отжать через 2 слоя марли. Сок собрать в отдельные стаканчики. Капустный сок разбавить дистиллированной водой в 10 раз. Яблочный и картофельный сок необходимо разбавить |
|
2. Определение пероксидазы и оксидазы |
Пронумеруйте 6 пробирок. В пробирки 1, 2, 3, 4 налить по 1 мл разбавленного капустного сока. Пробирки 1 и 2 поставить для разрушения ферментов на 5 минут в кипящую водяную баню, а затем охладить до комнатной температуры. В пробирки 5 и 6 вместо сока налейте по 1 мл дистиллированной воды. Во все 6 пробирок добавить небольшое количество гидрохинона. Затем в пробирки 1, 3, 5 добавить по 5 капель дистиллированной воды, а в пробирки 2, 4, 6 по 5 капель H2O2. Содержимое пробирок тщательно перемешать или встряхнуть. Через 10-15 минут можно уже наблюдать результаты опыта.То же самое проделать для картофельного и яблочного сока |
|
3. Определение дегидрогеназы в молоке |
Пронумеруйте 6 пробирок. В пробирки 1 и 2 налейте по 5 мл свежего некипяченого молока, а в 8-ю пробирку такое же количество холодного кипяченого молока. Дистиллированную воду в водяной бане нагрейте до 37 ОС. Во все три пробирки добавьте по 0,5 мл раствора формальдегида и по 5 капель раствора метиленового синего. Смесь станет голубой. В каждый флакон налейте немного масла, чтобы образовался тонкий изолирующий слой на поверхности, и поставьте пробирки 1 и 3 на водяную баню. Пробирку № 2 оставьте при комнатной температуре. Заметьте время начала реакции и наблюдайте за изменением окраски. |
|
4. Определение дегидрогеназы в мясе птицы |
Сырое мясо птицы 10 г мелко нарежьте и разотрите на блюдце. Кашицу промойте несколько раз, чтобы удалить растворимые вещества. Промытую кашицу разбавьте с тройным объемом дистиллированной воды, в которую добавлен NaCl – примерно 1,5 г. Разбавленную кашицу влейте в пробирки № 4, 5 и 6 – по 5 мл в каждую. Пробирку № 4 погрузите на 5 минут в кипящую водяную баню и охладите до комнатной температуры. Затем в пробирки № 4 и № 5 добавьте по 0,5 мл раствора янтарной кислоты и по 10 капель раствора метилового синего, а в пробирку 6 добавьте по 0,5 мл дистиллированной воды и 10 капель красителя. В каждый флакон долейте чуть-чуть масла, чтобы изолировать смесь от воздуха. Проследите изменение |
Обработка результатов эксперимента.
Заполнить таблицу:
|
№ пробирки |
Изменение окраски |
Вывод |
Лабораторная работа № 3
Тема: Обнаружение гидролаз в биологическом материале.
1.Цель
работы:
закрепить теоретические навыки по
обнаружению гидролаз в биологическом
материале. Освоить метод определения
-амилазы
в слюне.
2.Мотивация цели: данная тема позволит не только расширить область знаний по предмету, но и область их дальнейших профессиональных применений.